乌龙头的培养.doc

The Effect Of 2，4-D、NAA、6-BA
On Aralia's Callus
【Abstract】Aralia - Araliaceae woody plants, common name, also known as: "needling old bract, crateva unilocularis, gill Aralia" and so on. Aralia has developed as a potential new plant has aroused extensive research, the study of its rich nutritional value and medicinal value. With different concentrations of 2,4-D, NAA ,6-BA combination, induced the formation of a callus Aralia. Optimum ratio of hormone:
【Key words】Aralia Tissue culture hormone concentration callus
1、前言：
楤木[Aralia.chinensis L] 为五加科木本植物，俗名又称：“刺老苞、树头菜、刺龙牙”等[1～2]。
楤木属全世界共有40余种，大多数分布在亚洲和北美，我国广泛分布28种[3]。我国主要分布在东北、云南、甘肃的陇南、天水等地[4]。据不完全统计，我国常见木本蔬菜约100多种[5]。
我国楤木属主要种类可列表如下：
1中国产楤木属种类[6]
中文名
别名
拉丁名
产地
楤木
飞天蜈蚣、鸟不宿、五龙头等
Aralia
chinensis L.
特产中国，主要分布西北、华北、长江流域及以南山区
辽东楤木
龙牙楤木、刺龙牙、刺老鸦
A.elata(Miq.)Seem
产河北东北部，东北地区及青岛崂山
黄毛楤木
刺龙苞、鸟不企、大鹰不扑
A.decaiseneana Hance
产云南贵州、广西、湖南等地
棘茎楤木
红楤木、鸟不宿、红刺党等
A.echnocaulis Hand.-Mazz
产长江流域及以南各省
长刺楤木
刺叶楤木、雷公木、鹰不扒
A.spnifolia Merr
产福建、广东、江西、浙江等
太白楤木
五龙头、刺苞头
A.taibaiensis Z.Z.Wang et H.C.Zheng
产云南、四川、陕西、甘肃、宁夏等地
长白楤木
东北土当归、九眼独龙
A.continentalis Kitagawa
产吉林、辽宁等地
食用土当归
水白芷、川土当归
A.cordata Thunb
分布长江流域以南及甘肃、陕西、河北河南、北京等地
楤木具有很高的食用价值，随着世界范围内人们生活水平的不断提高，人们对食品营养的重视也越来越大。现代工业科技进步之下同样也引起了食品安全与营养的巨大问题。近年来安全问题频频出现，也引起了人们对食品安全的重视和营养的研究。楤木做为木本蔬菜中的一种因其野生在林缘地区，不施农药、化肥，又远离工矿城市，空气、土壤又无污染，故称绿色食品。楤木芽菜味清香、爽口，尤其是在全遮光条件下生产出来的芽菜（芽苞开绽后称芽菜），其风味不但仍能保持芽苞自然状态下的特色，而且风味更加细嫩、鲜美，更适合初食者的口味[7]。
楤木不仅具有很大的食用价值而且具有药用价值。据报道, 楤木芽体内的总皂甙和锗的含量分别是人参的2.8倍和3.6倍[8]。楤木属药用主要是其根皮。具有祛风除湿、利尿消肿、活血止痛、疏肝解郁、温中和胃之功效。主要用于治疗风湿痹痛、跌打损伤、肝炎、疮痈等。民间还用于小儿豆疹、干咳等。现已发现其为高含量的齐墩果酸资源植物。从中提取的齐墩果酸已用于治疗肝炎及中毒性肝损伤[9-10]。
楤木处于野生状态，而且分布零散，生长量低，给这一野生资源的开发利用造成了一定的困难。目前很多研究人员已经对楤木属的一些种类的繁殖做了初步的研究，可参照表2：
2楤木繁殖研究[11~14]
楤木属种类
繁殖研究进展
常规培育
组织培养

辽东楤木
播种育苗：（种子的采集与处理、催芽与播种）；
根段繁殖
实验表明MS+NAA0.01mg/L处理对愈伤组织诱导、分化效果较好，诱导成苗培养基为MS+NAA0.02mg/L+6-BA0.5mg/L，生根培养基为改进的MS+NAA0.01mg/L+IBA1.5mg/L。

长白楤木
在国内，科研人员仅对长白楤木的常规栽培技术（选地、整地、育苗、移栽、田间管理、采收加工）作了有限的研究
确定了腋芽途径最佳初始培养基MS+6-BA1.5mg/L+2,4-D1.0mg/L，分化培养基为MS +6-BA2.0mg/L + NAA0.2mg/L + IAA0.2mg/L，生根培养基为1/2MS+NAA0.02mg/L 和1/2MS+ IBA0.5mg/L。

黄花楤木
用ABT 生根剂不同浓度对硬枝、嫩枝及根进行处理后扦插育苗试验, 结果表明：黄花楤木1cm以上的根用ABT生根剂浓度为100mg/kg处理5- 8 h。生根率最高, 可达58. 3%, 0. 5-1cm 生根率一般。0. 5cm 以下的生根率最低; 硬枝扦插生根率仅为3. 4%。嫩枝扦插未有生根现象。

暂无

龙牙楤木
种子繁殖、根蘖苗繁殖、插条扦插、根段扦插。

诱导培养基：MS+6-BA1～5mg/L+IAA0.1～0.5mg/L；分化培养基：MS+6-BA1～6mg/L+2,4-D1～6mg/L+IAA0.1～0.6mg/L。

在甘肃天水林区、陇南山地、漳县阴湿山区也广泛分布有楤木。其与其它林木混生，喜连片生长，浑身长满小刺，是礼县山林地区所产的药、菜两用的名贵野菜，同样有很大开发潜能。但目前还没有人对乌龙头的繁殖做以研究来使其进行规模化栽植。本实验对天水当地的野生楤木（乌龙头）进行组培实验，初步探索不同激素浓度搭配，对楤木组培中诱导愈伤组织的影响并找出最适激素浓度搭配。
2、材料
2.1供试材料：楤木嫩芽(采自天水当地)。
2.2实验用品：
超净工作台：上海智域分析仪器制造有限公司。
PH仪：雷磁。PHS-3D；编号：600606060025；上海精密科学有限公司。
酒精灯、镊子、手术刀、电子天平、玻璃棒、容量瓶、灭菌锅、培养瓶或培养皿、封口膜、培养箱、、胶头滴管等。
2.3实验药剂：
2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)：(2，4-Dichlor ophenoxy acetic acid) >98%；上海生工生物。
萘乙酸(NAA)：北京双旋微生物培养基制品厂。
6-苄基嘌呤(6-BA)：（6-Ben Zylamino purine）>99%；上海生工生物。
大量元素、微量元素、铁盐、维生素氨基酸等。

三、实验处理与方法：
2.1母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ及母液Ⅳ的配置
各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
2.2激素的配置：
(1)2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)： 1 mg/mL
(2)萘乙酸(NAA)：0.2 mg/mL
(3)6-苄基嘌呤(6-BA)： 1 mg/mL
都定容与100 mL的容量瓶中待用。
2.3培养基的配置与灭菌：
本实验采用MS基本培养基
加入琼脂煮沸后吸取母液Ⅰ为50 mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。最后加蒸馏水定容至1000mL，搅拌均匀。调PH用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用PH仪测培养基的pH，一直到培养基的pH为5.8为止。
2.3.1倒培养基：
本次实验探究不同激素浓度对楤木愈伤组织的影响，采用一个梯度三个重复。所以用200 mL的烧杯按表3加入三种激素（采用3*3*4组合），然后倒入培养基至200 mL后分装入3个培养瓶中。激素浓度设置参照文献[15]。
2.4培养基灭菌:
培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌：121℃(0.105MPa),15-20min。在灭菌时对接种用的手术刀、镊子、蒸馏水也进行统一灭菌。
2.5接种：
无菌室要进行甲醛熏蒸灭菌，接种前先打开无菌操作台上的紫外灯灭菌20分钟后方可进行接种。
用天水楤木嫩芽作为外植体。一般直径大小为1-2cm。将嫩芽水洗净后，先用70%乙醇浸泡30s，再用0.1%升汞消毒7-10min，用无菌水冲洗外植体三次，至表面基本无消毒液。然后切取乌龙头嫩芽分生组织部分厚约2mm，然后再将其切成6份（保留其分生组织）进行移接并编号，每种激素搭配做3个重复。
将盛有外植体的培养瓶放入培养箱培养，培养条件为：光强2000lux、温度25℃、12h光照。
3、实验结果与分析
表格 3
编号
2，4-D（mg/L）
NAA（mg/L）
6-BA（mg/L）
接种数
出愈率
重复次数
1
0.5
0.5
1.0
15

3
2
0.5
0.5
1.5
15

3
3
0.5
0.5
2.0
15

3
4
0.5
1.0
1.0
15

3
5
0.5
1.0
1.5
15

3
6
0.5
1.0
2.0
15

3
7
0.5
1.5
1.0
15

3
8
0.5
1.5
1.5
15

3
9
0.5
1.5
2.0
15

3
10
1.0
0.5
1.0
15

3
11
1.0
0.5
1.5
15

3
12
1.0
0.5
2.0
15

3
13
1.0
1.0
1.0
15

3
14
1.0
1.0
1.5
15

3
15
1.0
1.0
2.0
15

3
16
1.0
1.5
1.0
15

3
17
1.0
1.5
1.5
15

3
18
1.0
1.5
2.0
15

3
19
1.5
0.5
1.0
15

3
20
1.5
0.5
1.5
15

3
21
1.5
0.5
2.0
15

3
22
1.5
1.0
1.0
15

3
23
1.5
1.0
1.5
15

3
24
1.5
1.0
2.0
15

3

25
1.5
1.5
1.0
15

3
26
1.5
1.5
1.5
15

3
27
1.5
1.5
2.0
15

3
28
2.0
0.5
1.0
15

3
29
2.0
0.5
1.5
15

3
30
2.0
0.5
2.0
15

3
31
2.0
1.0
1.0
15

3
32
2.0
1.0
1.5
15

3
33
2.0
1.0
2.0
15

3
34
2.0
1.5
1.0
15

3
35
2.0
1.5
1.5
15

3
36
2.0
1.5
2.0
15

3

4结论

参考文献：
【1】李继红,董晓东. 楤木的繁殖技术研究[J].中国野生植物资源,2003,22(3):50-51.
【2】代永彬.发展穗木巩固鲁甸县退耕还林工程成效[J]. 林业调查规划,2004,124-126.
【3】姜 鸑,姜 新.楤木属植物研究现状与展望[J]. 河北农业科学,2008,12(5):87-90.
【4】文 军.中国五加科楤木属一些分类群的订正[N]. 植物分类学报,2000,38(1):1-9.
【5】王国良,闫小红.日本无刺楤木离体茎段人工促成产芽技术[N]. 南京林业大学学报,2006,30(1):61-64.
【6】任风芝,栗新慧,屈会化. 楤木属植物化学成份及药理活性研究进展[J].广州化工,2000,28(4)：124-130.
【7】于生林.楤木开发利用大有前途[J].林业科技,2002:35.
【8】王国良,张 敏,闫小红等.日本无刺楤木促成芽营养成分的比较研究[J]. 江苏林业科技,2006,33(6):6-9.
【9】雷志钧,周日宝. 楤木根皮的生药学研究[N].湖南中医药导报,2001,5(2):87-88.
【10】王忠壮,靳守东,全山丛等.楤木属植物药食兼用嫩芽营养成分分析[N]. 营养学报,1999,21(1):100-103.
【11】班文杰,赵恒田. 辽东楤木人工繁殖与栽培技术[J].中国野生植物资源,2008,27(3):61-63.
【12】李宝仁,杨立学,程政军.长白楤木研究进展[J].中国科技信息,2006(2):90.
【13】王双贵,胡永强,韩彩萍等.黄花楤木繁育技术试验研究[J].陕西农业科技,2008(4):76-78.
【14】董衍奎,孙颖达,安文和等.龙牙楤木的离体培养[J].中国林副特产,2005(6):22.
【15】秦亚平,吴大椿,肖锦和.龙牙木楤木组织培养与快速繁殖技术研究[J].安徽农业科学,2004,32(1):111-114.