补气活血方对多因素损伤老年痴呆大鼠血清β淀粉样蛋白及生长因子水平的影响.doc

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补气活血方对多因素损伤老年痴呆大鼠血清
b淀粉样蛋白及生长因子水平的影响

作者：韩玉生,周忠光,姜国华

【摘要】目的 建立多因素损伤老年性痴呆(AD)大鼠模型,探讨补气活

血方对 AD 大鼠血清b淀粉样蛋白(b-AP)、转化生长因子(TGF-a)及

类胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)水平的影响及其作用机理。 方法 采用

腹腔注射 D-半乳糖、氢溴酸东莨菪碱注射液(SCOP),喂饲 AlCl3 ,喹啉

酸(QA)海马区注射相结合的方法建立多因素损伤 AD 大鼠模型,随机分

为正常组(A 组)、假损伤组(B 组)、模型组(C 组)、补气活血方组(D

组)、喜得镇组(E 组)。D、E 组分别灌胃给予补气活血方和喜得镇,A、

B、C 组给予等容积的生理盐水。治疗 3 周后,放免法观测大鼠血清b

-AP、TGF-a及 IGF-Ⅱ水平变化。结果 模型组大鼠血清b-AP、TGF-

a及 IGF-Ⅱ水平明显升高,经补气活血方和喜得镇治疗后,血清b

-AP、TGF-a及 IGF-Ⅱ水平明显降低。结论 补气活血方可能通过调节

TGF-a、IGF-Ⅱ的水平,影响b-AP 生成,从而达到治疗 AD 作用。

【关键词】 补气活血方；老年性痴呆；多因素损伤；b淀粉样蛋白；

生长因子；大鼠

Key words ： Buqi Huoxue Decoction ； Alzheimer ' s disease ；

multi-factor injury；b-AP；growth factor；rat

长期以来,对于老年性痴呆(AD)治疗的实验研究多局限于单因素的动

物模型,不能充分体现 AD 与衰老及多种环境因素相关的病理机制。本

研究采用多种方法相结合建立多因素损伤 AD 大鼠模型,用放射免疫分

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析方法检测模型大鼠血清b淀粉样蛋白(b-AP)、转化生长因子(TGF-

a)及类胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)的含量,探讨中药补气活血方对

其影响及其的作用机理。

1 材料与方法

1.1 动物

Wistar 大鼠 70 只,雌雄各半,清洁级,体重(300±20)g,黑龙江中医药

大学实验动物中心提供,许可证号：SCXK(黑) 。

1.2 药物、试剂与仪器

补气活血方系古方补阳还五汤为基础加减而组成的经验方,由黄芪、

党参、当归、茯苓、远志、赤芍、川芎等组成,制成浓缩液(含原药材

6.5 g/mL),黑龙江中医药大学制剂室提供。喜得镇为瑞士山德士药厂

与天津华津制药厂联合生产；D-半乳糖由上海试剂二厂生产；氢溴酸

东莨菪碱注射液(SCOP)由上海禾丰制药有限公司提供；喹啉酸(QA),

美国 Sigma 公司产品。脑立体定位仪(SN-ZM,日本)；大鼠跳台仪。

1.3 造模与分组

大鼠适应 1 周后进行跳台实验,剔除不合格者,称重后随机分成正常

组(A 组)、假损伤组(B 组)、模型组(C 组)、补气活血方组(D 组)、喜

得镇组(E 组),每组 15 只。除 A、B 组外,其余各组均予 D-半乳糖 5O

mg/(kg·d),皮下注射 6 周,造成亚急性衰老模型[1-2]。C、D、E 组同

时每日喂饲 AlCl3 水溶液 20 mg/mL×6 周,B 组予以等量的生理盐水。

6 周后将 QA 注入亚急性衰老大鼠海马。具体方法：将大鼠用 3%的戊巴

比妥钠 30 mg/kg 经腹腔麻醉后,固定在脑立体定位以上,于颅顶正中切

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口,钻开颅骨,以微量注射器垂直进针,用 0.01 mol/L pH 7.4 的 PBS

缓冲液溶解的 QA 1 mL(含 QA 150 nmol/2 mL)缓慢注入两侧海马,B

组注入 O.01 mol/L pH 7.4 的 PBS 缓冲液 1 mL,每侧注入时间为 5 min,

留针时间 5 min,局部消毒后,缝合皮肤。最后 C、D、E 组大鼠于实验

观察前 15 min 前给予腹腔注射 SCOP 2 mg/kg,B 组给予等量的生理盐

水。剔除造模过程中死亡及不成功大鼠,最后每组取 10 只进行检测。

1.4 给药

D、E 组大鼠于注射 QA 后第 1O 日开始分别连续灌胃,其余各组予以生

理盐水灌服,以上各组均按 10 mL/(kg·d)灌胃,连续 3 周。

1.5 观测指标

1.5.1 大鼠跳台实验

腹腔注射 SCOP 或生理盐水后进行试验,测试学习能力。将大鼠放

入跳台仪内适应环境 5 min,然后通电,大多数大鼠跳上跳台逃避电击。

从通电到完全稳定上台所用的时间为潜伏期,跳下时大鼠双足同时接

触铜栅视为错误反应,训练 5 min 并记录 5 min 内的潜伏期和错误次数

作为学习指标。24 h 后重测,先将大鼠放在跳台上,记录大鼠第 1 次跳

下跳台时间为潜伏期,并记录错误次数作为记忆能力指标。

l.5.2 血清b淀粉样蛋白、转化生长因子及类胰岛素样生长因子

Ⅱ水平检测

给药 3 周后大鼠股动脉取血分离血清,血清b-AP、TGF-a及 IGF-

Ⅱ检测采用放免法。放免试剂盒由北京福瑞生物工程公司提供。检测

由哈尔滨医科大学附属二院同位素室完成。 1.6 统计学方法

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