RPHPLC法测定复方鱼腥草片中金丝桃苷的含量.doc

RP-HPLC 法测定复方鱼腥草片中金丝桃苷的
含量

作者：黄秀红，冯灵平，廖建维，熊吉

【摘要】 目的用 RP-HPLC 法测定复方鱼腥草片中金丝桃苷的含量。

方法 HPLC 用外标一点法，KromasilC-18 柱，乙腈-0.1%磷酸溶液（18：

82）为流动相，柱温为 30℃，流速为 1.0ml/min，l=360nm。结果金

丝 桃 苷 在 0.0675 ～ 1.35 m g 范 围 内 呈 良 好 线 性 , 回 归 方 程 为

Y=20.345X-12.118， R2=0.9999， 平均加样回收率 100.5%， RSD%为 1.4%

（n=9） 。结论方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好。为复

方鱼腥草片中鱼腥草的定量分析提供了科学有效的方法。

【关键词】复方鱼腥草片；金丝桃苷；HPLC

【 Abstract 】

ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofhypero

sideinFufangYuxingcaoPionbyRP-HPLC.MethodsUsingKromasilC18Co

lumn,acetonitrile-0.1%phosphoricacidsolution （ 18 ： 82 ）

asthemobilephase,detectionwavelengthas360nmandcolumntemperat

ureas30℃.Theflowratewas1.0ml/min.ResultsThecalibrationcurve

waslinearatarangeof0.0675 ～ 1.35 m

gforthehyperosideandlinearequationwasY ＝ 20.345X-12.118R2 ＝

0.9999.Theaveragerecoverywas100.5%andtherelatedstandarddevia

tion （ RSD ） was1.4%

（n=9）.ConclusionThismethodwassimpleandaccurateandproper,wh

1

ichcanbeprovideforscientificquantitativeanalysismethodofhyer

osideinFufangYuxingcaoPion,andthereduplicateoftheresultwasgo

od.

【Keywords】fufangyuxingcaotablet；hyperoside；RP-HPLC

复方鱼腥草片为《中国药典》收载品种，亦为民间常用药，具有

清热解毒的功效，用于外感风热所致的急喉痹、急乳蛾，症见咽部红

肿、咽痛；急性咽炎、急性扁桃体炎见上述症候者。本方由鱼腥草、

黄芩、金银花、连翘等 5 味中药经提取加工制成。据现行药典及多数

文献的报道，对复方鱼腥草片的质量控制多以黄芩苷作为指标进行研

究。而在实际处方中，鱼腥草所占的量高达一半以上，为君药，故控

制其中的鱼腥草的含量极其必要。现经实验论证，对方中的鱼腥草中

所含的金丝桃苷的含量测定方法进行方法学研究，认为线性、重复性、

回收率、精密度等均较理想。

1 仪器与试药

Agilent1100 系列高效液相色谱仪、G1322A（DEGASSER）溶剂脱

气器、G1311A（QuatPump）四元泵、G1313（ALS）自动进样器、G1316A

（COLOM）柱温箱、G1315B（DAD）检测器及 Agilent 工作站；UV－可

见紫外分光光度计（SHIMADZU） 乙腈为色 ；

谱纯，其余均为分析纯；对照品金丝桃苷 Hyperoside（批号

1521-200202）购于中国药品生物制品检定所；样品复方鱼腥草片由海

正药业提供（批号为 050301，050302，050303） 。

2 测定方法的研究

2

2.1 测定波长的确定取金丝桃苷的甲醇溶液做光谱图测定，在

360nm 处有最大吸收，故检测波长选定 360nm。

2.2 流动相的选择根据文献报道及《中国药典》的采用的流动相，

比较了（1）乙腈-甲醇-四氢呋喃（1：1：19.4：78.6）（2）乙腈-0.1% ；

磷酸（16:84） 并设定柱温为 30℃。根据上述二种流动相的实验结果， ，

认为流动相（2）较理想。经调整，将"色谱条件与系统适用性试验"

确定为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 乙腈-0.1%磷酸 W/V） 18：
（ （

82）为流动相；流速为 1.0ml/min；检测波长：360nm；柱温 30℃。理

论板数按金丝桃苷峰计算应不低于 4000。色谱图 1、2、3。图 1 金丝

桃苷对照品色谱图 2 复方鱼腥草片样品图图 3 缺鱼腥草阴性样品图

2.3 提取方法选择经查阅相关资料，对提取方法、提取溶剂、溶

剂用量、提取时间进行考察，采用正交表 L9（34）进行实验。见表 1，

2。 1 复方鱼腥草片含量测定法正交试验的因素表 2 复方鱼腥草片含 表

量测定法正交试验的计算

从对金丝桃苷进行正交试验的简单计算来看，其中提取方法的影

响相对较为明显，它的极差最大，其余各项的极差小，说明这些因素

对金丝桃苷几乎没有什么影响。结合经济和环保等因素以及相对比较

考虑，认为最佳的提取方案为采用 60%的乙醇，加入样品 50 倍量的溶

剂，回流提取 40min。按此条件，又对同一批样品进行复核试验，根

据复核试验的结果，金丝桃苷的平均含量为 0.3512mg/g，与正交试验

中的最大值 0.3440mg/g 相比较提高 2.1%，由此证明所选最佳方案比

较合理的。

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