RP┐HPLC法检测海马脑片灌流液中氨基酸类神经递质.doc

RP┐HPLC 法检测海马脑片灌流液中氨基酸
类神经递质

作者：王晓菲 罗晓星 周四元 赵德化 程涛 潘小军

【关键词】 谷氨酸

关键词: 高效液相色谱;海马;天门冬氨酸;谷氨酸;牛磺酸;g-

氨基丁酸

摘 要:目的 建立一种可同时测定微量谷氨酸（Glu） ，天门冬氨

酸（Asp） ，牛磺酸（Tau） -氨基丁酸（GABA）4 种氨基酸类神经递 ，g

质的 HPLC 分析方法. 方法 制备大鼠海马脑片，灌流取样，冻干再溶

后，采用邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生，反相梯度洗脱的高效液相/荧

光检测法， 测定其中 4 种微量氨基酸的含量. 结果 各氨基酸的浓度与

峰面积均呈现良好的线性关系，相关系数（r）分别为:Asp0.9920，

Glu0.9667，Tau0.9803 和 GABA0.9584;日内变异系数（%）为 Glu4.3，

Asp4.6，Tau6.7 和 GABA7.1;最低检出限（pmol L-1 ）为:Asp0.17，

Glu0.35，Tau0.68 和 GABA1.12，标准加入回收率（%）分别为:Asp106

±7，Glu101±5，Tau94±6 和 GABA92±11. 结论 该法具有衍生化反

应操作简便，流动相成本低，灵敏度高，特异性强，分析时间短的优

点，而且同样适用于其他生物样品的测定.

Keywords:HPLC;hippocampus;aspartic

1

acid;glulamate;taurine;GABA

Abstract:AIM To establish a method for simultaneous

de-termination of trace amino acid neu

rotransmitters Glu ， Asp ， Tau and GABA by HPLC was

improved.METHODS The sample prepared by rat hippocampal slices

perfusation was lyophi-lized and resoluted，4kinds of trace

amino acids were determinated by HPLC which involved pre-column

derivatiza-tion with o-phthalaldehyde，reversed-phase gradient

elution and fluorescence detection.RESULTS A good linear

rela-tionship existed between peak area and concentration of

amino acids.The correlation coefficients（r）were:Asp0.9920，

Glu0.9667， Tau0.9803and GABA0.9584respec-tively.The precisions

（%） were Glu4.3， Asp4.6， Tau6.7and GABA7.1for interassay CV.The

detection limits（pmol L-1 ）were:Asp0.17，Glu0.35，Tau0.68，

GABA1.12and the recovery rates of4amino acids（%）were Asp106

± 7 ， Glu101 ± 5 ， Tau94 ± 6and GABA92 ± 11respec ┐

tively.CONCLUSION The operation of the derivatization is easy，

the mobile-phase is cheap and this method has suffi-cient

sensitivity，specificity and less separation time.Also it is

good for determination of amino acid in other biologic sam-ple.

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0 引言

谷氨酸（Glu） 、天门冬氨酸（Asp） -氨基丁酸（GABA）和 、g

牛磺酸 Tau） ，是大脑海马结构中分布最广泛研究最多的神经递质，

前两者属于兴奋性递质， 后两者属于抑制性递质.这些氨基酸类递质的

异常是诱发多种神经系统疾病，如兴奋性毒性反应、癫痫、舞蹈病、

帕金森病的因素之一［1，2］ .随着对神经药理学研究的深入和临床

神经系统疾病病因的探索，要求建立一种快速、精确的微量氨基酸定

量分析方法.经典的氨基酸分离方法是离子交换色谱法［3］ ，此法需

特殊装置， 且分析时间较长;而荧光分光光度法和氨基酸自动分析仪检

测灵敏度较低，且干扰因素较多［4］ .我们以大鼠的海马脑片灌流液

为标本，以邻苯二甲醛为柱前衍生剂，建立起一种更简便、更灵敏，

适于检测生物样品中微量氨基酸的高效液相色谱分析方法.

1 材料和方法

1.1 材料 美国 Agilent-1100 系列高效液相色谱仪及荧光检

测器， 度设置及数据均由 on-line 计算机数据处理系统处理.邻苯二 梯

甲醛（OPA） 2-巯基乙醇，L-Glu，GABA，Asp，Tau 及乙醇胺均购自 ，

Sigma 公司.甲醇为色谱纯（进口）.其余试剂均为分析纯（国产）.试

剂用水为三蒸水.

1.2 方法

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