拟南芥总蛋白提取.doc

河北经贸大学毕业论文

拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析

专业名称： 生 物 技 术
班 级： 2003 02
学生姓名： 陈 丽 丽
指导教师： 陈 颖
完成时间： 2007年6月

河北经贸大学毕业论文
摘要
植物蛋白提取方法有很多种，不论使用哪一种方法，均必须在操作中保存生物大分子结构的完整性，保存活性防止变性及降解现象的发生。因蛋白空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在，遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失，因此选择的条件应为十分温和。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术作为分离鉴定生物大分子的一种实验技术手段，已经成为分子生物学实验室中的重要技术之一。
本试验采用三种不同的方法（两种蛋白溶解法，一种蛋白沉淀法）分别提取拟南芥不同组织（拟南芥整个植株，拟南芥叶片，拟南芥愈伤组织）的蛋白，然后用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行电泳分析，通过分析凝胶电泳图谱比较分析不同提取液提取蛋白的效果优劣从而确定较好的蛋白提取法，以及拟南芥植株不同组织含有的不同蛋白。
实验结果表明提取液2提取蛋白的效果最好，电泳条带最清楚，提取液3即三氯乙酸丙酮次之，提取液1即PBS溶液最次；并且拟南芥总蛋白跑的电泳谱带最多且最清晰，叶片蛋白谱带最少且较模糊，说明植物各组织的蛋白含量与种类存在差异，这与其功能性质具有相关性，叶片电泳谱带少说明叶片蛋白只含有总蛋白的一部分，由于根部蛋白受培养基中的琼脂的影响而出现一条粗带。另外，本实验采取了快速脱色和脱色液脱色两种不同的脱色法，结果表明快速脱色法不仅简单方便效果更好适于推广致用。

关键词 SDS-PAGE电泳；拟南芥蛋白；蛋白质分析

Abstract
There are many methods of the withdrawtion of the plant proteins, no matter any method, it must preserve the biology macromolecular structure to be integrity in the operation, preserve activity to prevent the degradation and degeneration phenomenon. Space for protein structure mainly rely on hydrogen bonding, salt bonding and the Vander Waals bonding, the existence of the event acid, alkali treatment, high temperature, Mechanical dramatic role and strong radiation can lead to the loss of activity, it should choose the conditions for the very modest. SDS-PAGE as the isolation and identification of biological macromolecules in one of laboratory means, it has become one of the important laboratory technique in Molecular biology.
This experiment uses three different methods (two methods are proteins todissolve solution, one method is protein precipitation) withdraws the tissues, protein of Arabidopsis thaliana ( all the protein of Arabidopsis thaliana, the leaf protein of Arabidopsis thaliana, the injuries tissue protein of Arabidopsis thaliana),and then the protein atlas in different tissues and organs of Arabidopsis thaliana were analyzed with SDS polyacrylamidegel, and then, through the analysis of the SDS-PAGE picture we can analysis the different extract buffer and the different protein of the different organizations.
Finally, the results indicate that the best method is extract buffer 2 —the SDS-PAGE picture is the clearest, the extract buffer 3 that is the trichloroacetic acid acetone next, the last is the extract buffer 1 which is PBS. The kinds of protein in the whole Arabidopsis thaliana were most and clearest in these three tissues, the kinds of protein in the leaf were least, this phenomenon can be explained by that the protein's content and the protein's type are different, this indicates that the number of the strip belt band has the relevance with the function nature, the phenomenon that the number of the leaf protein is the least indicate that the content and type of the leaf protein are only a part of the whole protein of Arabidopsis thaliana; as a result of that the culture medium has influence with the root protein, the picture of the whole protein has a thick belt. In addition, this experiment takes two different bleaching methods, one is rapid bleaching, the other is bleaching liquid, the result shows that the rapid bleaching method not only simple and convenient, but also have a better effect, so we can use it extensively.

Keywords SDS-PAGE electrophoresis; Arabidopsis thaliana protein; The protein analysis

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目录
1 引言···························································································1
1.1拟南芥简介·················································································1
1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳·····························································2
1.3拟南芥蛋白提取···········································································3
1.4实验研究的意义···········································································3
1.5展望···························································································4
2 材料、主要试剂及主要仪器···························································4
2.1实验材料···················································································4
2.1.1拟南芥培养···············································································4
2.1.2培养拟南芥愈伤组织··································································4
2.2主要试剂及药品···········································································5
2.2.1溶液的配置···············································································5
2.2.2所用主要药品和试剂··································································7
2.3 主要仪器···················································································8
3 实验方法·····················································································8
3.1样品蛋白的制备——蛋白质的提取·················································8
3.1.1提取液1、2和水提取蛋白··························································8
3.1.2提取液3提取蛋白·····································································9
3.1.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳···························································9
4 结果与分析 ···············································································10
4.1不同方法提取拟南芥不同组织蛋白的效果比较分析·························10
4.2丙酮法提取蛋白与其它提取法的比较············································11
4.3拟南芥蛋白分子量分析·······························································13
5 讨论··························································································13
5.1金属离子螯合剂在蛋白提取中起重要作用······································13
5.2关于谱带倾斜现象······································································13
5.3关于拟南芥各组织蛋白·······························································13
5.4染色、脱色·················································································14
6 结论··························································································15
参考文献·······················································································16
致谢·····························································································18

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拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析

1 引言

1.1 拟南芥简介

拟南芥（Arabidopsis thaliana）十字花科。二年生草本，高7～40厘米。基生叶有柄呈莲座状，叶片倒卵形或匙形；茎生叶无柄，披针形或线形。总状花序顶生，花瓣4片，白色，匙形。长角果线形，长1～1.5厘米。花期3～5月。我国内蒙、新疆、陕西、甘肃、西藏、山东、江苏、安徽、湖北、四川、云南等省区均有发现[1]。

图1-1 拟南芥花 图1-2 拟南芥植株
这种植物具有以下特点：
（1）形态个体小，高度只有30 cm左右；
（2）生长周期快，从播种到收获种子一般只需6周左右；
（3）种子多，每株每代可产生数千粒种子；
（4）形态特征简单；
（5）基因组小，只有5对染色体。
拟南芥广泛用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究，已成为一种典型的模式植物，被科学家誉为“植物中的果蝇”。虽然这种植物在许多方面“简单”，但它的大多数基因与其他复杂”的植物基因具有很高的同源性，另外，由于这种植物的全部基因组测序已经完成，因此可以预测，拟南芥在植物学所有领域的研究中将发挥更大的作用[2]。
1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
1937年瑞典化学家Tiseliue首先开发了蛋白质电泳技术，并成功地将血清蛋白分成几个组分。原理：迁移率是带电颗粒在一定电场强度下，单位时间内介质中的迁移距离，可公式计算：U=V/E=Dl/Ut
U：迁移率，单位是cm/V．s或cm/V．min
V：泳动速度，单位是cm/s 或cm/min
E：电场强度，单位是V/cm
D： 泳动距离，单位是cm
T：电泳时间，单位是min或s
L：支持物长度，单位是cm
SDS是十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate）的简称，是一种阴离子表面活性剂，加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键、疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（在一定条件下，大多数蛋白质与SDS的结合比为1.4 g SDS/1 g蛋白质），使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而掩盖了不同种类蛋白质原有的电荷差别。这样就使电泳迁移率只取决于分子大小这一因素，于是根据标准蛋白质分子量的对数和迁移率所作的标准曲线，可求得未知物的分子量[3]。
聚丙烯酰胺变性凝胶电泳是对扩增产物进行检测，与其他电泳法比较具有如下优点：① 电泳区带狭窄不易扩散，供试品用量极微，电泳分离时间短，设备简单，分辨率高，重复性佳，已广泛用于酶、蛋白、聚核苷酸、多肽的分析鉴定和少量制备。② 凝胶是以单体-烯酰胺和交联剂，甲叉丙烯酰胺聚合而成的纵链交错的且有“分子筛效应的三维网状结构”。其机械性能优良，对热稳定，无色透明，无杂质，不溶于缓冲液，在280 nm波长处无紫外吸收。电泳时无电渗和吸附作用，适于供试品的定量和精制。
本实验利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分别比较不同提取方法提取拟南芥总蛋白、叶蛋白、愈伤组织蛋白的差异以及每个提取方法的优劣。

1.3 拟南芥蛋白提取

蛋白质的种类有很多，提取方法也有很多种，常用的有等电点沉淀法、盐析法、有机沉淀法，不同的方法对与提取不同的蛋白具有较好的效果。即使是同一种物质的不同组织也含不同的蛋白质，在本实验中，将采用三种方法（两种蛋白溶解法，一种沉淀蛋白法）提取拟南芥不同组织的蛋白质，然后进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，比较不同的提取方法的提取效果、不同组织的蛋白提取情况[4]。
不论使用哪一种方法，均必须在操作中保存生物大分子结构的完整性，保存活性防止变性及降解现象的发生。因空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在，遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失，因此选择的条件应为十分温和。同时应注意防止系统中重金属离子、细胞自身酶系及其他有毒物质的污染 [5] 。

1.4 实验研究的意义

拟南芥已广泛用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究，已成为一种典型的模式植物，被科学家誉为“植物中的果蝇”。虽然这种植物在许多方面“简单”，但它的大多数基因与其他“复杂”的植物基因具有很高的同源性，该种植物的全部基因组测序已经完成。
SDS聚丙烯是种很重要的分离生物大分子的实验技术，但是在实验过程也有很多应该注意的事项。蛋白质的提取有多种方法，本实验中将选用三种不同的方法进行提取，然后将提取的蛋白样品进行SDS-PAGE分析，从而确定提取蛋白的最佳方法。
本实验通过用多种对拟南芥不同组织进行提取，提取的蛋白样品将进行SDS凝胶电泳分析，分析不同蛋白提取法的优劣以及同一植物不同组织的蛋白电泳差异，加强对SDS-PAGE的原理和操作步骤的理解和掌握。

1.5 展望

提取蛋白跑完电泳后可以做Western杂交，然后进行蛋白序列分析。
Western杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异性蛋白质的检测方法。先从生物细胞中提取总蛋白或目的蛋白，SDS-PAGE电泳将蛋白质按分子量大小分离，再把分离的各蛋白质条带原位转移到固相膜（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，接着将膜浸泡在高浓度的蛋白质溶液中温育，以封闭其非特异性位点。然后加入特异抗性体（一抗），膜上的目的蛋白（抗原）与一抗结合后，再加入能与一抗专一性结合的带标记的二抗，最后通过二抗上带标记化合物（一般为碱性磷酸酶）的特异性反应进行检测。根据检测结果，从而可得知被检生物（植物）细胞内目的蛋白的表达与否、表达量及分子量等情况。Western杂交方法灵敏度高，通常可从植物总蛋白中检测出50 ng的特异性的目的蛋白[6]。
然后也可对已获得的目的蛋白进行蛋白序列的分析。通常使用专一化学试剂或具有不同水解专一性蛋白酶，得到有可能重叠的序列的肽段，从而推断出蛋白的氨基酸序列。蛋白质的一级结构是其高级结构的基础，因此，蛋白质序列分析对于获得有关高级结构的信息是一个很有用的基础[7]。

2 材料、主要试剂及主要仪器

2.1 实验材料

2.1.1 拟南芥培养[8]
⑴ 培养前预处理：拟南芥（Arabidopsis thaliana，哥伦比亚野生型）种子用70%乙醇浸泡2 min后，无菌水漂洗1次，再用3.5％次氯酸钠浸泡10～15 min，无菌水漂洗5次，播种于MS培养基上，放入4℃冰箱中春化3天；
⑵ 春化后的拟南芥种子放入生长箱中培养，生长7天左右（培养箱温度周期为22℃（昼）/18℃（夜），光周期为12 h（光）/12 h（暗），光强为120～130 μmol。
2.1.2 培养拟南芥愈伤组织[9]
⑴ 挑选大而饱满的具有发芽能力的成熟种子，采取两步消毒法。剥胚前用75%酒精中浸1 min，再用0.1%升汞消毒8 min，无菌水冲洗5～6次。在超净台内用镊子和解剖针仔细剥取胚，成熟胚盾片向上接种于愈伤组织诱导培养基上。
⑵ 愈伤组织的诱导
将成熟胚每瓶接种5粒，接种后在黑暗条件下培养，温度为18℃，3～7天后，开始产生愈伤组织，15天后明显增大，统计愈伤组织诱导率。
⑶ 愈伤组织培养调控
愈伤组织最初多呈水浸状，质量较差，经过改良继代，其表面长出白色或黄色的愈伤组织，并迅速增殖。愈伤组织20天继代1次，每瓶接3块，接种培养40天后观察愈伤状态。
愈伤组织的诱导和试管苗的分化在诱导培养基上培养1周，叶段和茎段的切口处开始膨大，两周后愈伤组织生长良好，表面呈粒状，局部变绿18℃储藏以备用。
2.2 主要试剂及药品
2.2.1 溶液的配制[10-16]
2.2.1.1 MS培养基
MS培养基配方：
大量元素(母液Ⅰ)         mg/L
NH4NO3                      33 000
KNO3                        38 000
CaCl2·2H2O              8 800
MgSO4·7H2O              7 400
KH2PO4                      3 400
微量元素(母液Ⅱ) mg/L
KI                       166
H3BO3                        1 240
MnSO4·4H2O                4 460
ZnSO4·7H2O              1 720
Na2MnO4·2H2O            50
CuSO4·5H2O              5
CoCl2·6H2O               5
铁盐(母液Ⅲ) mg/L
FeSO4·7H2O               5 560
Na2-EDTA·2H2O           7 460
有机成分(母液Ⅳ) mg/L
肌醇                       20 000
烟酸                       100
盐酸吡哆醇(维生素B6)        100
盐酸硫胺素(维生素B1)        100
甘氨酸                     400
其中诱导培养基附加植物激素IAA0.5－2 mg，分化培养基附加6BA 0.5-1 mg，IAA0.5 mg，蔗糖20 g，琼脂1.2%，pH5.8。
2.2.1.2 蛋白提取液1——PBS溶液
称取NaCl 0.8006 g，KCl 0.02012 g，KH2PO4 0 .02722 g，Na2HPO4 0.3682 g加蒸馏水溶解，定容至100 ml。
2.2.1.3 蛋白提取液2——提取Buffer
称取Tris 0.1214 g放入洗净的小烧杯中，然后加少量蒸馏水定容，加盐酸用酸度计调pH为8.0，再称取SDS 0.025 g，DTT 0.07715 g，EGTA 0.09509 g，EDTA 0.09306 g加入上述溶液，最后用100 ml的定量瓶定容，放入冰箱待用。
该提取Buffer最后各成分浓度为：
5 m mol/L EDTA
5 m mol/L EGTA
10 m mol/L DTT
0.05 m mol/L SDS
20 m mol/L Tris-HCl pH 8.0
2.2.1.4 蛋白质提取液3——三氯醋酸—丙酮
　　提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液2.7 g尿素0.2 g CHAPS溶于3 ml灭菌的去离子水中（终体积为5 ml），使用前再加入1M的DTT 65 μl/ml。
2.2.1.5 Loading buffer（10 ml 1×）
1 mol/LTris-HCl(pH6.8) 0.625 ml
β－巯基乙醇 0.25 ml
10% SDS 1 ml
溴酚蓝 0.1125 ml
50％甘油 0.5 ml
蒸馏水 2.5 ml
2.2.2 所用主要药品和试剂
拟南芥种子—哥伦比亚野生型（河北师范大学）
母液Ⅰ
母液Ⅱ                   
盐酸吡哆醇(维生素B6)      
盐酸硫胺素(维生素B1)   
甘氨酸                  
氯化钠（天津北宏试剂厂）
琼脂粉（北京奥博星生物技术责任有限公司）
磷酸二氢钠（天津科盟化工工贸有限公司）
磷酸氢二钾（天津科盟化工工贸有限公司）
SDS（北京赛弛生物科技有限公司）
EGTA（天津东丽区华明镇北于堡工业区）
EDTA（河北博海生物工程有限公司）
DTT —二硫苏糖醇
丙酮
β-巯基乙醇
9.5 M尿素
5 m M碳酸钾
丙三醇二甘油（天津永大化学试剂开发中心）
甲叉双丙烯酰胺（北京海淀区土地四街）
Tris（华美生物工程有限公司）
甘氨酸（河北博海生物工程有限公司）
丙烯酰胺（天津科密欧）
考马斯亮蓝R-250（天津永大）
四甲基乙二胺（即TEMED）
过硫酸胺
Marker溶液
脱色液
2.3 主要仪器
电子分析天平BS1245（北京赛多利斯仪器系统有限公司）
超净工作台（哈尔滨）
高压灭菌锅
海尔冰箱
DYY-Ⅲ4电泳仪(北京六一仪器厂)
DYY-Ⅲ28A型垂直夹心式电泳槽(北京六一仪器厂)
制冰机（SANYO）
离心机Beckman Incubator (Avanti j-25)
微电脑电磁炉（佛山）
脱色摇床（上海智城）

3 实验方法

3.1 样品蛋白的制备——蛋白质的提取[11-16]

3.1.1 用提取液1、2和水提取蛋白
⑴ 选取生长较好的拟南芥，分别称取叶片、拟南芥植株、愈伤组织各1 g，分别放入预冷好的三个研钵中。
⑵ 分别向三个研钵中加入液氮研磨样品，直至呈粉末状为止。
⑶ 向已编号的离心管（1.5 ml Eppendorf管，以下简称EP管，编号分别为LFbuffer1、LFbuffer2、LF水、AT buffer1、AT buffer2、AT水、YSh buffer1、 YSh buffer2、 YSH水，其中，LF：叶蛋白，AT：总蛋白，YSh：愈伤组织蛋白。）中预先加入100 μl提取液1、2、3和水。
⑷ 将加好的样品摇匀，迅速放入冰中备用。
⑸ 将六只离心管放入提前设好温度的冷冻超速离心机中以12 000 rpm/min 4℃离心10 min。
⑹ LFbuffer1、LFbuffer2、BF水、AT buffer1、AT buffer2、AT水、YSh buffer1、YSh buffer2、YSh水这些EP管分别取上清液，分别加入已编号的九个新的EP管中。
⑺ 再次将九只离心管放入冷冻超速离心机中12 000 rpm/min 4℃离心10min。
⑻ 按照步骤⑹再次取上清或去上清将所需要的物质加入新的已编号的离心管。
⑼ 分别加入与样品等量的Loading Buffer，放入沸水中煮10 min，然后迅速放入冰上冷却，然后12 000 rpm/min离心5 min，备用。
3.1.2 提取液3提取蛋白
⑴ 分别称取拟南芥植株，叶片，愈伤组织各1 g，剪碎后加入10 mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉。
⑵ 加入1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制，含10 mmol即0.07% β-巯基乙醇），混匀，-20℃沉淀1小时，然后4℃，15 000 rpm/min离心15 min。
⑶ 弃上清，沉淀复溶于1.5 ml冷丙酮(含10mmol β-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清。然后干燥沉淀，保存备用。
3.1.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳[3 17-19]
3.1.3.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶制备
⑴ 配置分离胶溶液
分离胶8%（10 ml）：
A液2.7 ml，B液2.5 ml，蒸馏水4.8 ml，10%过硫酸胺50 μl，
TEMED 5 μl。
⑵ 配置浓缩胶溶液
浓缩胶3％（4 ml）：
A液 0.67 ml，C液 1.0 ml, 蒸馏水2.3 ml, 10%过硫酸铵30 μl,
TEMED 5 μl
⑶ 电泳缓冲液（Tris-甘氨酸缓冲液pH 8.0）：
称取Tris 4.0 g， 甘氨酸14.4 g，SDS 1.0 g，用无离子水溶解后定容至1 L。
3.1.3.2 样品的处理及加样
提取液1、2和水提取的蛋白样品可充分混合后可直接上样。提取液3提取的蛋白样品需充分混合后加loading buffer后，最好离心5 min后才上样。用微量进样器取30 μl上述混合液，通过缓冲液，小心地将样品加到凝胶凹形样品槽底部。
最后将Marker溶液（即Amethia，是一种蛋白分子量标准物）用微量进样器加到凝胶板的第一个样品槽中，记下加入的样品顺序。
3.1.3.3 电泳和检测
打开电泳仪开关，开始时电流为10 mA，待样品进入分离胶后，将电流调至20-30 mA，当溴酚蓝染料距框1 cm时，停止电泳，关闭电源。
3.1.3.4 染色与脱色
⑴ 取下凝胶进行考马斯亮蓝染色。
⑵ 一张胶片用至少5倍体积的染色液浸泡凝胶，放摇床上室温缓慢旋转3－4 h，直到满意为止；另一张胶片用快速脱色法脱色。
⑶ 将脱色后的凝胶照相。

4 结果与分析

4.1 不同方法提取拟南芥不同组织蛋白的效果比较分析
图4-1 各种拟南芥组织蛋白凝胶电泳图
MK：maker AT1：提取液1提取的总蛋白
AT：水提取的总蛋白 YS3：提取液3提取的愈伤蛋白
YS：水提取的愈伤组织蛋白 AT3：提取液3提取的总蛋白
LF1：提取液1提取的叶蛋白

97 400 D

66 200 D

43 000 D
31 000 D

14 400 D

AT1 AT YS3 YS AT3 LF1 MK

图4-2 各种拟南芥组织蛋白凝胶电泳图
MK：maker LF：水提取的叶蛋白
LF2：提取液2提取的叶蛋白 LF3：提取液3提取的叶蛋白
YS2：提取液2提取的愈伤组织蛋白 YS：水提取的愈伤组织蛋白
AT2：提取液2提取的总蛋白 YS1：提取液1提取的总蛋白
YS1 AT2 YS YS2 LF3 LF2 LF MK

97 400D

66 200D

43 000D

20 100D

14 400D

在本研究中，由于制样时组织量相同，电泳时上样量一致，因此可以通过比较电泳条带的深浅来分析不同提取液提取蛋白的效果。由图4-1可以看出，AT3，YS3，AT1图谱较清晰，蛋白条带清晰，颜色深，而LF1，YS，AT条带较相对应的前三者都不清晰；图4-2可以看出，AT2，YS2，YS1图谱较清晰，而YS和叶蛋白的所有图谱不清晰。水作为阴性对照，水作为蛋白提取液时，电泳条带几乎没有。
这一结果表明，不论是拟南芥愈伤组织还是拟南芥总蛋白，蛋白提取液2比蛋白提取液1提取蛋白效果好。主要原因是因为蛋白提取2中含有SDS、EGTA、EDTA等物质，对组织蛋白的释放有帮助。而PBS是植物细胞常用的缓冲液，成分中没有助于蛋白释放的化学物质，PBS提取的蛋白主要是来自于液氮研磨时对植物细胞的破坏从而致使蛋白在缓冲液中释放。蒸馏水没有蛋白条带，这说明实验体系没有问题，也就是说蛋白提取液对植物组织蛋白具有提取作用。
4.2 丙酮法提取蛋白与其它提取法的比较
同时我们又采取了丙酮法提取拟南芥愈伤组织和拟南芥总蛋白，同时用蛋白提取液2提取等量相同的组织，上样量均为30 μl，将两种蛋白的SDS-PAGE结果作比较。实验结果表明，用两种方法分别提取等量相同的植物组织，丙酮法提取的蛋白条带比蛋白提取液2提取的蛋白条带清晰，条带颜色深，带较多说明蛋白浓度比后者高，也就是说提取效果好于后者（见图4-1）。
从上述电泳图可以看出，提取液2提取的蛋白跑电泳的谱带最多也最清晰，可以得出结论：三种提取液中提取液2提取蛋白的效果最好，其次是提取液3，最后是提取液1。
表4-1 各种蛋白提取液提取后凝胶电泳图效果比较

提取液1
提取液2
提取液3
水
植株
效果不好，蛋白损失多，有杂质，谱带教多但不太清楚。
效果好，蛋白损失少，杂质少，谱带最多且清晰明显。
效果较好，蛋白损失较少，杂质较少，谱带比较多且较清楚明显。
效果不好，只提出部分蛋白，谱带少也不清晰。
愈伤
效果不好，蛋白损失多，有杂质，谱带
少且不太清楚。
效果好，蛋白损失少，杂志少，谱带较
多且清晰明显