关于贵州省猪种猪病血清学的调查.docx

2012年寒假专业实践

论文题目：贵州省猪6种猪病血清学调查

学 院：动物科学学院
专 业：动物医学专业
班 级：09级(1)班
学 号： 0909050200
学生姓名： 赵福友
指导教师： 周碧君 教 授

2012年2月一五日

贵州省猪6种猪病血清学调查
【摘要】采用ELISA方法对贵州省动物疫病研究室收集的血清进行6种猪病( 猪瘟、伪狂犬病、篮耳病、圆环病毒感染、细小病毒病、乙型脑炎) 的血清学调查，并统计分析结果。
【关键词】贵州省猪;猪病;血清学调查
【前言】
猪瘟（classical swine fever．CSF）俗称"烂肠瘟"是由猪瘟病毒(HCV或CSFV)引起的一种具有高度传染性疫病，是威胁养猪业的主要之一，其特征是：急性，呈败血性变化，实质器官出血，坏死和梗死；慢性呈性坏死性肠炎，后期常有副伤寒及继发。是的一种急性接触性传染病，又称。
猪伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一种高度接触性传染病。健康猪与病猪、带毒猪直接接触可感染本病，还可经皮肤伤口感染、空气传播，也可通过哺乳垂直传播。猪感染本病时，因不同的年龄而表现不同[1]。种猪主要表现繁殖障碍；成年猪危害不严重，一般为隐性感染，主要表现呼吸系统症状，整体生产性能变差，但猪体可长期带毒和排毒，成为本病的主要传染源，给养猪业造成严重的损失。
猪繁殖与呼吸综合征( 又称蓝耳病) ( PRRS) 是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 引起的猪的一种高度接触性传染病, 不同年龄、品种和性别的猪均能感染, 但以妊娠母猪和1 月龄以内的仔猪最易感, 该病以母猪流产、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔猪呼吸困难、败血症、高死亡率等为主要特征[ 2, 3] 。该病毒在世界各地普遍流行,在我国也广泛存在, 疫情的流行在不同养殖场和不同地区均呈现动态变化, 并且呈现不断扩大的蔓延趋势, 成为近几年对养殖业危害比较严重的病毒性疾病。
猪圆环病毒病 （Porcine circovirus disease, PCVD）由猪圆环病毒(Porcine circovirus, PCV)所引起的哺乳仔猪和育肥猪出现临床或亚临床型的一种传染病，被世界各国兽医界公认为目前最重要的猪传染病之一。PCV2可以引发断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、新生仔猪先天性震颤（PCT）、猪皮炎肾炎综合症（PDNS），与母猪繁殖障碍（RF），断奶猪和育肥猪呼吸道综合征（PRDC）、增生性坏死肺炎(PNP)、肉芽肿性肠炎及肝炎等疾病密切相关，成为猪圆环病毒相关疾病（PCVAD），并且PCV2与多种病原混合感染的现象十分普遍。
猪细小病毒病（PPVD）是由猪细小病毒（PPV）引起妊娠母猪流产、木乃伊胎、死胎和产弱仔为特征的繁殖障碍性疾病，在我国各地均有发生，给养猪业造成重大经济损失。
猪乙型脑炎即流行性乙型脑炎（epidemic encephalitisB）又称日本乙型脑炎（Japanese encephalitis），简称乙脑，是由流行性乙型脑炎病毒（日本乙型脑炎病毒JEV）引起的一种蚊媒性人畜共患的传染病。JEV主要引起妊娠母猪突发流产，死胎或木乃伊胎；公猪多发生一侧性睾丸炎；育肥猪持续高热。本病不仅对养猪业造成了巨大的经济损失，而且严重威胁着人类的健康。猪乙脑目前无特效的治疗方法，而且病毒可经胎盘垂直传播，感染猪可长期带毒，所以对其进行快速、准确的诊断意义十分重大[4-6]。
1 材料和方法
1． 1 血清样本
猪血清20份，按常规方法分离血清, - 20℃储存。该猪场已经免疫猪瘟、猪伪狂、PRRSV/PPV JEV;未免疫PCV
1． 2 试剂
“猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：111200）， “猪伪狂犬病ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：111201），“猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：111202），“猪圆环病毒ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：111203），“猪细小病毒ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：111204），“猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：111205）。
以上试剂盒均购自武汉科前动物生物制品有限责任公司。
每个标本均检测猪瘟病毒抗体、伪狂犬病野毒抗体、篮耳病病毒抗体、圆环病毒抗体、细小病毒抗体、乙型脑炎病毒抗体共6项指标。1.3检测方法
（1） 猪瘟、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪圆环病毒2型、细小病毒、乙型脑炎
样品稀释：在血清稀释板中按1：40的体积稀释待检血清样品（195ul样品稀释液中加5ul待检血清样品）。
对照稀释：在血清稀释板中按1：40分别稀释阳性对照和阴性对照（234ul样品稀释液中加6ul对照血清）。
①　 取抗原包被板（根据样品多少，可以拆开分次使用），分别将稀释好的待测血清和对照各取100ul加入到抗原包被板孔中，待检样品做1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。
②　 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200ul，静置3分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次。
③　 每孔加羊抗猪酶标二抗100ul，置37℃温育30分钟。
④　 洗涤5次，方法同2.切记每次在干净吸水纸上拍干。
⑤　 每孔先加底物 液A一滴（50ul）、再加底物B一滴（50ul）,混匀，室温（一八℃—25℃）避光显色10分钟。
⑥　 每孔加终止液一滴，10分钟内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。
（2） 猪伪狂犬病毒
血清样品稀释：在血清稀释板中按1：1的体积稀释待检血清样品（100ul样品稀释液中加100ul待检血清样品）。
对照血清稀释：在血清稀释板中按1：1分别稀释阳性对照和阴性对照（120ul样品稀释液中加120ul阳性和阴性对照）。
①　 取抗原包被板（根据样品多少，可以拆开分次使用），分别将稀释好的待测血清和对照各取100ul加入到抗原包被板孔中，待检样品做1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。
②　 甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200ul，静置3分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次。
③　 每孔加酶标记物100ul，置37℃温育30分钟。
④　 洗涤5次，方法同2.切记每次在干净吸水纸上拍干。
⑤　 每孔先加底物 液A一滴（50ul）、再加底物B一滴（50ul）,混匀，室温（一八℃—25℃）避光显色10分钟。
⑥　 每孔加终止液一滴，10分钟内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。
2 结果
2.1猪瘟病毒血清抗体检测结果
猪瘟病毒抗体检测：采用武汉科前动物生物制品有限责任公司生产的“猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：11004），以间接ELISA方法检测血清抗体。试验成立的条件是阳性对照孔平均值≥0.6；阴性对照孔平均值≤0.3。样品效价（OD630值）大于0.35为阳性，小于0.35为阴性。结果见表1。
表1 猪瘟抗体检测结果
样品标号
OD630
阴阳性
样品标号
OD630
阴阳性
1
0.361
+
11
0.411
+
2
0.916
+
12
0.738
+
3
0.772
+
一三
1.593
+
4
0.433
+
14
1.055
+
5
1.008
+
一五
1.446
+
6
0.304
-
16
1.432
+
7
0.632
+
17
1.4
+
8
0.343
-
一八
1.586
+
9
1.565
+
19
2.294
+
10
0.725
+
20
1.935
+
合计
20
阳性率
90%
附：阴性对照平均值为0.073，阳性对照平均值为0.875
由表2可知，猪群猪瘟抗体阳性率较高为95.24%,根据农业部关于印发《2011年国家动物疫病强制免疫计划》的通知（农医发[2011]6）存栏猪抗体合格率≥70%为合格，该猪群猪瘟免疫合格。
2.2伪狂犬病血清抗体检测结果
猪伪狂犬病血清抗体检测：采用武汉科前动物生物制品有限责任公司生产的“猪伪狂犬病ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：111201），以间接ELISA方法检测血清抗体。试验成立的条件是阴性对照孔平均OD630值与阳性对照平均OD630值之差大于或等于0.4。样品S/N值大于0.6为阴性，小于或等于0.6为阳性。结果见表2
表2 猪伪狂犬病血清抗体检测结果
样品标号
OD630
阴阳性
样品标号
OD630
阴阳性
1
0.645
+
11
0.295
+
2
1.203
-
12
0.163
+
3
1.297
-
一三
0.166
+
4
1.296
-
14
0.229
+
5
1.201
-
一五
0.19
+
6
1.241
-
16
0.272
+
7
1.333
-
17
0.174
+
8
1.238
-
一八
0.一三2
+
9
1.165
-
19
0.201
+
10
1.22
-
20
0.225
+
合计
20份
阳性率
60%
附：阴性对照平均值为1.233，阳性对照平均值0.一八9
由表3可知，猪伪狂犬病抗体阳性率为60%，根据农业部关于印发《2011年国家动物疫病强制免疫计划》的通知（农医发[2011]6）存栏猪抗体合格率≥70%为合格， 该猪群猪伪狂犬免疫不合格。
2.3猪繁殖与呼吸综合征血清抗体检测结果
猪繁殖与呼吸综合征血清抗体检测：采用武汉科前动物生物制品有限责任公司生产的“猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：110404），以间接ELISA方法检测血清抗体。试验成立的条件是阳性对照孔平均值≥0.7；阴性对照孔平均值≤0.3样品OD630值大于0.42为阳性，小于0.38为阴性。结果见表3
表3 猪繁殖与呼吸综合症抗体
样品标号
OD630
阴阳性
样品标号
OD630
阴阳性
1
0.168
-
11
0.76
+
2
1.314
+
12
0.503
+
3
0.974
+
一三
1.863
+
4
1.86
+
14
0.一八5
-
5
1.67
+
一五
1.054
+
6
2.126
+
16
0.22
-
7
1.323
+
17
0.923
+
8
1.6
+
一八
1.393
+
9
1.831
+
19
1.45
+
10
1.一五9
+
20
0.656
+
合计
20份
阳性率
85%
附：阴性对照平均值0.11，阳性对照平均值1.46
由表3可知，猪蓝耳病抗体阳性率为85%，根据农业部关于印发《2011年国家动物疫病强制免疫计划》的通知（农医发[2011]6）存栏猪抗体合格率≥70%为合格，该猪群猪蓝耳病免疫合格。
2.4猪圆环病毒血清抗体检测结果
猪圆环病毒病抗体检测：采用武汉科前动物生物制品有限责任公司生产的“猪圆环病毒ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：110402），以间接ELISA方法检测血清抗体。试验成立的条件是阳性对照孔平均值≥0.7；阴性对照孔平均值≤0.3。样品OD630值大于0.42为阳性；小于0.38为阴性。结果见表4
表4 猪圆环病毒抗体检测结果
样品标号
OD630
阴阳性
样品标号
OD630
阴阳性
1
1.357
+
11
0.632
+
2
1.626
+
12
1.504
+
3
1.45
+
一三
1.43
+
4
1.06
+
14
1.791
+
5
1.906
+
一五
1.887
+
6
1.327
+
16
1.822
+
7
1.522
+
17
0.859
+
8
0.868
+
一八
2.098
+
9
2.一八
+
19
2.一八4
+
10
1.57
+
20
1.909
+
合计
20份
阳性率
100%
附：阴性对照平均值0.089，阳性对照平均值1.859
血清样本PCV抗体阳性率为100%；由于样本猪场未免疫圆环疫苗，所以，PCV抗体系PCV2感染所致。
2.5猪细小病毒血清抗体检测结果
猪细小病毒抗体检测：采用武汉科前动物生物制品有限责任公司生产的“猪细小病毒ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：110803），以间接ELISA方法检测血清抗体。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值≥0.6，阴性对照孔平均OD630值必须<0.3。样品OD630值>0.4，判为阳性；样品OD630值<0.4，判为阴性。结果见表5
表5 猪细小病毒抗体检测结果
样品标号
OD630
阴阳性
样品标号
OD630
阴阳性
1
0.069
-
11
1.082
+
2
0.871
+
12
0.958
+
3
0.52
+
一三
0.1一三
-
4
0.935
+
14
0.625
+
5
1.504
+
一五
1.276
+
6
0.559
+
16
1.246
+
7
0.425
+
17
1.222
+
8
0.737
+
一八
0.28
-
9
1.443
+
19
0.811
+
10
0.326
-
20
0.997
+
合计
20份
阳性率
80%
附：阴性对照平均值0.27，阳性对照平均值1.626
由表5可知，猪细小病毒病抗体阳性率为80%，根据农业部关于印发《2011年国家动物疫病强制免疫计划》的通知（农医发[2011]6）存栏猪抗体合格率≥70%为合格，该猪群猪细小病免疫合格。
2.6猪乙型脑炎病毒血清抗体检测结果
猪乙型脑炎病毒病抗体检测：采用武汉科前动物生物制品有限责任公司生产的“猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒”（生产批号：110603），以上试剂盒均购自武汉科前动物生物制品有限责任公司。以间接ELISA方法检测血清抗体。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值≥0.6，阴性对照孔平均OD630值必须<0.3。样品OD630值≥0.32，判为阳性；样品OD630值<0.32，判为阴性。结果见表6
表6 猪乙型脑炎病毒抗体检测结果
样品标号
OD630
阴阳性
样品标号
OD630
阴阳性
1
0.071
-
11
0.992
+
2
0.8
+
12
0.811
+
3
0.298
-
一三
0.一三2
-
4
0.537
+
14
0.377
+
5
0.559
+
一五
0.677
+
6
0.292
-
16
0.771
+
7
0.245
-
17
0.937
+
8
1.432
+
一八
0.175
-
9
0.771
+
19
0.312
-
10
0.517
+
20
0.14
-
合计
20份
阳性率
40%
附：阴性对照平均值0.085，阳性对照平均值1.342
由表6可知，猪乙型脑炎抗体阳性率为40%，根据农业部关于印发《2011年国家动物疫病强制免疫计划》的通知（农医发[2011]6）存栏猪抗体合格率≥70%为合格， 该猪群猪乙型脑炎免疫不合格。
表7 6种猪病血清抗体检测结果
猪病名称
样本数
阳性数
阳性率
猪瘟
20
一八
90%
猪伪狂犬
20
12
60%
蓝耳病
20
17
85%
圆环病毒病
20
20
100%
细小病毒病
20
16
80%
乙型脑炎
20
8
40%
3 讨论
近年来，由于猪病的广泛流行，给养猪业带来巨大的经济损失。特别是猪繁殖障碍性疾病已成为威胁和危害养猪业健康发展的一类重要疫病，据报道引起猪发生繁殖障碍的疾病有猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒感染、猪繁殖与呼吸综合症、猪乙型脑炎等［7］。调查结果：猪瘟是一种最常见的猪传染病，每年有不同程度流行，从免疫结果发现对该猪群猪瘟的免疫成功。猪蓝耳病是一种高度接触性传染病，呈地方流行性。PRRSV只感染猪，各种品种、不同年龄和用途的猪均可感染，患病猪和带毒猪是本病的重要传染源，主要传播途径是接触感染、空气传播和精液传播，也可通过胎盘垂直传播，对该病的免疫结果为买内衣成功。猪细小病毒病是猪的一种繁殖障碍性疾，调查资料显示，对住细小病毒病的免疫成功。乙型脑炎是一种虫媒人兽共患传染病，传播媒介以库蚊为主；伪狂犬病是感染动物种类多和致病性强的一种病毒，除各种年龄的猪、牛都易感外，在自然条件下使羊、犬、猫、兔、鼠、水貂、狐等动物感染发病主要转播途径为垂直转播和媒体转播。对乙型脑炎和伪狂犬进行了免疫调查结果是免疫失败，可能的原因有可能有疫苗被污染、疫苗质量达不到规定的效价、疫苗的使用和管理不当、血清型的差异等。圆环病毒在母猪中抗体阳性率较高(100% )，为对该病进行免疫，所以应对该病进行治疗和处理，对阳性率高的必须进行淘汰处理，对阳性率低的猪进行隔离治疗治疗无效立即淘汰，对为患病的应制定一系列免疫程序。根据检测结果，应制定一系列针对性防控措施，采用定期进行血清学检测的方法，淘汰阳性猪，逐步建立无传染病猪群，为今后培育猪创造有利的条件。

参考文献
[1]殷震，刘景华. 动物病毒学[M]. 北京：科学出版社,1997：44-45.:
[2] 王􀀁 涛, 王子轼, 彭德旺. 猪圆环病毒感染与断奶仔猪多系统衰竭综合征[ J] . 国兽医学报, 2002, 22 ( 3) : 314~ 316.
[3] 代广军, 蔡雪辉, 苗连叶, 等. 规模养猪高热病等流行疫病防控新技术[ M] . 北京: 中国农业出版社, 2008. 0~ 126.
[4] 陈溥言. 兽医传染病学. 2版. 北京：中国农业出版社，2006（3）：91.
[5] 乔宪凤. 猪日本脑炎的诊断. 猪业科学，2008（6）：24.
[6] 张飞波. 猪流行性乙型脑炎的诊断与防治. 山东畜牧兽医, 2009（8）：34.
[7]李精碧，倪定琴，文明，等． 凯里地区几种猪繁殖与呼吸障碍性疾病的血清学调查［J］． 贵州畜牧兽医，2008，32 ( 3 ) :19－ 21.

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