生化实验血糖的测定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,血糖的测定,实验四,1,血糖及血糖水平的概念：,血糖：指血液中的单糖：葡萄糖,血糖水平：血浆中葡萄糖浓度,血糖总维持在恒定水平：,3.96.7mmol/L,2,调节血糖水平的激素：,胰岛素,、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。,血糖水平异常：高血糖及糖尿病；低血糖,3,临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。,科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。,测定血糖的意义,4,测定方法,无机化学法：,Folin-Wu,法,有机化学法：邻甲苯胺法,酶法：,葡萄糖氧化酶法,血糖测定的常用方法,5,葡萄糖氧化酶,-,过氧化物酶法原理,（,1,）葡萄糖,O,2,H,2,O,（,2,）,H,2,O,2,4-,氨基安替吡啉苯酚,葡萄糖酸,H,2,O,2,葡萄糖氧化酶（,GOD,）,H,2,O,红色醌式物质,过氧化物酶,（,POD,）,Trinder,反应,505nm,光吸收法测定,相对血糖浓度,6,分光光度计的工作原理,7,朗伯,-,比尔定律,朗伯定律,：,A=k,1,L,比尔定律,：,A=k,2,C,朗伯,-,比尔定律,：如同时考虑液层厚度和溶液浓度对吸光度的影响，则吸光度与溶质的浓度和溶液的厚度的乘积成正比。,A=KLC,8,朗伯,-,比尔定律应用,A,标,=KC,标,L,A,样,=KC,样,L,标准品法测定未知样品含量,C,样,=,A,样,A,标,C,标,9,1.,接通电源，,调整波长,。,2.,比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，,注意：加入样品量不超过比色杯体积的,2/3,。,3.,调模式为“,透射比,”，,对空白对照进行调“,0,”,（开盖）和调“,100,”,（闭盖）。,4.,调模式为“,吸光度,”，,将空白对照调“,0,”,，测定待测样品的吸光度值。,分光光度计的使用,10,11,12,葡萄糖氧化酶,-,过氧化物酶法检测激素对血糖浓度的影响,方法,13,（,1,）,取,4,支试管，按下表加入试剂,:,试剂,标准管,(ml),测定管,1(ml),测定管,2(ml),空白管,(ml),血清样品,0.02,0.02,葡萄糖标准液,0.02,蒸馏水,0.02,酶酚混合试剂,3.00,3.00,3.00,3.00,实验步骤：,充分混匀，,37,水浴中保温,20min,；,冷却至室温后,，,505nm,处比色,比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。,14,（,2,）计算,：,依据,朗伯,-,比尔定律,：,A=,KL,C,标准管葡萄糖浓度：,5mmol/L,测定管,葡萄糖含量（,mmol/L,）,测定管光密度,标准管光密度,5,15,正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的,2/3,。,血糖测定应在取血后,2,小时内完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。,酶酚混合液一般现用现配。,注意事项,16,小结,1,、葡萄糖氧化酶,-,过氧化物酶比色法测定血糖的原理。,2,、分光光度计的正确使用。,3,、实验操作中存在的问题。,17,