地氯雷他定干混悬剂(袋装)配制液使用期限研究方案.doc

PROTOCOL NUMBER/文件编号: XX-XX-XXX-XX-XX
HAINAN POLY PHARM. CO., LTD.

PROTOCOL TITLE文件标题:
地氯雷他定干混悬剂（袋装）配制液使用期限研究方案

批准执行签名

下面的签名表示批准本文件及其附件，且表明已经为执行作好了准备。在批准后，对本文件的目的或验收标准进行的任何改变或修正都必须进行变更控制，在执行以前就必须取得批准。

Version/版本：00

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HAINAN POLY PHARM. CO., LTD.

PROTOCOL TITLE文件标题:
地氯雷他定干混悬剂开瓶后使用期限研究方案

目 录
1. 适用范围 2
2. 目的 2
3. 介绍 2
4. 参考书目和SOP 2
5. 责任方及其责任 2
6. 程序 3
7. 结果判断 5
8. 混悬液有效期的确定 5
9. 附件 6
附件1：培养基和试液记录 6
附件2：标准菌种确认记录 6
附件3：细菌和真菌计数记录 6

1. 适用范围
本方案适用于用地氯雷他定干混悬剂制备的混悬液。
2. 目的
确认用地氯雷他定干混悬剂制备的混悬液的置存条件和期限。
3. 介绍
地氯雷他定干混悬剂（规格：0.5g：2.5mg）增加6-11月用法用量补充申请，拟修订【用法与用量】如下：
取本品1袋，倒入附带的塑料瓶中，用附带的注射器加水9.5ml，摇匀使成混悬液，每次用注射器吸取4ml（1.0mg），口服，每日一次。
剩余混悬液（盖紧瓶盖）置冰箱内(2-8℃)保存，用前摇匀，第2天吸取4ml（1.0mg），服用，剩余药液应丢弃。

制备好的混悬液在使用和贮存过程中有可能被外来微生物污染，本方案拟在制备好的混悬液中接种少量的挑战微生物，确定在设定的贮存条件和时间下混悬液是否会促进挑战菌生长，为制定合理的使用期限提供依据。
4. 参考书目和SOP
4.1 《中国药典》2010年版 微生物限度检查法
4.2 《中国药典》2010年版 抑菌剂效力检查法指导原则
4.3 Microbiological Quality of Drug Products after Penetration of the Container System for Dose Preparation Prior to Patient Administration, John W. Metcalfe, Ph.D., Review Microbiologist, CDER/OPS/New Drug Microbiology
5. 责任方及其责任
5.1 验证小组人员名单
组 长
姓名
职务/职称
部 门
职责
董荣斌
QC副经理
质量控制部
负责起草验证方案和验证报告。
成 员
林恒
微生物QC
质量控制部
负责验证方案的实施，协助验证报告的完成。
孙一准
微生物QC
质量控制部
负责验证方案的实施，协助验证报告的完成。
张勇平
QC经理
质量控制部
负责验证方案及验证报告的审核。
杨小霞
验证工程师
验证部
负责验证方案及验证报告的审核。
尹飞
验证部经理
验证部
负责验证方案及验证报告的批准。
5.2 相关部门职责
5.2.1验证部人员职责

审核和批准原始文件附录
监督验证过程
执行文件附录时提供支持
审核和批准原始文件附录
审核和批准完成的文件包和最终报告
5.2.2质量控制部人员责任
起草验证方案
准备最终报告
准备方案中所需的物品及材料
按验证计划组织实施验证工作
提供原始记录，保证记录的真实性
6. 程序
6.1 人员要求
执行研究方案的人员需有相关无菌知识背景，经过专门的无菌操作及微生物实验室相关的管理规范和操作规程，具有微生物限度检查资格。
6.2 试验环境
环境要求为C级区域内局部A级的单向流空气区进行，其中全过程必须严格遵守无菌操作。试验组加菌液和阳性组操作在负压的菌种鉴定室（阳性实验室）内进行。
6.3 仪器和设备
超净工作台 型号：SW-CJ-1BU ； 厂商：苏州苏净集团。
超净工作台 型号：SW-CJ-1CU； 厂商：苏州苏净集团。
生化培养箱 型号：LRH-250A ； 厂商：广东省医疗器械厂。
霉菌培养箱 型号：PYX-190M-A ； 厂商：广东韶光科力仪器有限公司。
脉动真空蒸汽灭菌器 型号：DMQ-0.3Ⅲ ； 厂商：连云港千樱医疗器械有限公司。
6.4 培养基
大豆酪蛋白肉汤培养基：按其使用说明配制，调节pH值分装，灭菌。
沙氏葡萄糖液体培养基：按其使用说明配制，调节pH值分装，灭菌。
大豆酪蛋白琼脂培养基：按其使用说明配制，调节pH值分装，灭菌。
沙氏葡萄糖琼脂培养基：按其使用说明配制，调节pH值分装，灭菌。
6.5 供试品信息
地氯雷他定干混悬剂（0.5g：2.5mg），批号：120908。
6.6 稀释剂及冲洗液
1）pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
按其使用说明配制。
2）0.9％无菌氯化钠溶液
氯化钠9.0g，加纯化水1000ml，加热使溶解分装，灭菌。
3）含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液
氯化钠9.0g，加0.5ml聚山梨酯80，纯化水999.5ml，加热使溶解分装，灭菌。
6.7 菌种及菌液制备
6.7.1菌种
验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
大肠埃希菌(Escherichia coli) [CMCC(B) 44102]
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B) 26003]
铜绿假单胞菌(Bacillus subtilis) [CMCC(B) 10104]
白色念珠菌(Candida albicans) [CMCC(F) 98001]
黑曲霉(Aspergillus niger) [CMCC(F) 98003]

6.7.2菌液制备
(1)接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的新鲜培养物至大豆酪蛋白肉汤培养基中，30-35℃培养18～24小时。接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，30-35℃培养24～48小时。上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数约1xl05cfu的菌悬液。
(2) 接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，培养5～7天，加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80 的0.9%氯化钠溶液将孢子洗脱，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80 的0.9%氯化钠溶液制成每1ml含孢子数约1xl05cfu的孢子悬液。

6.8微生物挑战试验
6.8.1混悬液制备
取地氯雷他定干混悬剂（0.5g:2.5mg）40袋，每袋分别倒入塑料瓶中（共40瓶），加入凉开水9.5ml，最终体积约为10ml，摇匀使成混悬液。
6.8.2 挑战菌接种
取上述制备好的混悬液，分5组（分别接种5种挑战菌），每组8瓶，每瓶中接种对应的一种挑战菌，混悬液接种量不超过1000cfu/ml，接种菌液的体积不能超过混悬液体积的1%。接种后的混悬液分别置以下2个条件：
（1）2-8度冰箱贮存。 每组4瓶，共20瓶。
（2）室温保存（25±2℃）。 每组4瓶，共20瓶。
说明：本试验采用平皿法计数，为保证可测量性和重复性，接种量为不超过1000cfu/ml。
6.8.3存活菌数测定
分别在0小时、24小时、48小时、72小时取接种后的混悬液1ml，加pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至10ml，混匀，作为1：10的供试液，采用平皿法测定每份混悬液所含的菌数，测定细菌使用大豆酪蛋白琼脂培养基，测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基，每种培养基两个平行。大豆酪蛋白琼脂培养基置于32.5±2.5℃条件下培养3天；沙氏葡萄糖琼脂培养基置于22.5±2.5℃条件下培养5天。
6.8.4结果计算
根据菌数测定结果，计算1ml混悬液各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg值。
7. 结果判断
各间隔时间的菌数lg值与初始值菌数lg值(0小时)相比，若试验菌增加数量不超过0.5 lg,则说明菌数不增加，即混悬液不支持试验菌生长。
说明：《中国药典》2010年版——抑菌剂效力检查法指导原则中，“不增加”是指对前一个测定时间，试验菌增加的数量不超过0.5 lg。
8. 混悬液有效期的确定
试验菌不增长的最长间隔时间应为混悬液使用期限的至少2倍。
9. 附件
附件1：培养基和试液记录
附件2：标准菌种确认记录
附件3：细菌和真菌计数记录