巴旦杏组织培养快速繁殖技术研究.doc

巴旦杏组织培养快速繁殖技术研究
陶秀东 吴春兰 王越铭 汪志军 王玉兰
Tao Xiu-dong Wu Chun-lan Wang Yue-ming Wang Zhi-jun Wang Yu-lan
新疆林科院经济林研究所
Institute of Economic Forestry, Xinjiang Forestry Academy Urumqi 830000 China

摘要：采用水培芽作为组织培养的外植体材料，并获得具根、茎、叶完整的巴旦杏试管苗，其中增殖培养接种在MS+6-BA1.0mg+NAA0.01mg/LR的培养基上，增殖倍数3倍左右。不定芽的生根培养接种在 MS+IBA0.3-0.5mg/L培养基上，或用100ppm的生长素IBA、IAA侵泡不定芽基部，接种在不加激素的培养基上，两种生根培养法，生根率都达95%以上。
关键词：巴旦杏；组织培养；快速繁殖；
巴旦杏又名扁桃（Amygdalus Communis l），属于蔷薇科、扁桃属的一种中等落叶乔木，高4-10米。它是世界著名的四大干果之一，在市场上售价很高，有着广阔的发展前景。新疆栽培巴旦杏历史悠久，是我国巴旦杏栽培面积较大的地区，并且成为我区的特产。巴旦杏的繁殖主要以嫁接和实生两种方法进行，采用嫁接方法进行繁殖能够保持品种的优良特性 ，遗传性状稳定，但可利用的优良品种穗条少，繁殖速度慢，限制了巴旦杏产业的发展。实生繁殖虽然数量大，但变异也较大。而组织培养能用较少的材料，在短时间内批量繁殖出优良的巴旦杏品种苗木。为此我们从1986年开始对新疆经济树种的组织培养技术进行了研究，经过科技人员近十年的努力取得了较好的研究结果。其中巴旦杏的研究被与会专家评为国际先进水平，该项研究成果荣获1996年自治区科技进步三等奖。现将巴旦杏的组织培养技术总结归纳如下。
一、 材料与方法：
2月底-3月初从巴旦杏良种繁育基地采集未发芽的优质品种条。采回的种条经剪截处理后，在室内进行水培发芽。待芽长至2厘米左右时将嫩芽采下，在超净工作台上进行灭菌处理，先用70%的酒精处理一次，再用0.1%的升汞灭菌，经无菌水冲洗后剪切接种在全量MS增殖培养基上。当增殖培养基上的芽长至1厘米左右时，将其剪下接种至生根培养基中诱导生根，或将试管苗基部用生长素浸泡后，接种到无激素的培养基中诱导生根。生根的试管苗经自然光照锻炼后移栽到不同介质的苗床中，保温、保湿25天左右成活。
二、结果与分析：
（一） 外植体的取材与灭菌：
1、 外植体灭菌时间不同对成活率的影响：
通过试验发现外植体灭菌时间不同，成活也不同。这是因为外植体是经水培后萌发的嫩芽，灭菌时间越长对芽造成的伤害就越大，成活率低，反之时间过短芽上的细菌灭不干净，造成接种后污染，成活率也低。根据试验得出水培芽用升汞灭菌4-6分钟即可，超过这一时间芽的成活率很低，当灭菌8分钟时芽全部死亡。
2、 取材季节不同外植体成活率对比研究：
组织培养前期外植体成活率的高与低，决定着试管苗扩繁的数量及
生产周期的长短，因此外植体成活数量决定着试管苗的繁殖速度。试验
中我们对不同季节取材外植体的成活情况进行了对比研究，如表 1 ：

表1不同季节取材外植体成活对比研究
Table 1 collected in different season Study on the survival contrast of explants
取材时间
collecting tine
外植体
explants

接种数
inoculate number
成活数
survival number
成活率%
survival rate
2月28日
February 28th
水培芽
buds cultured in water
30
22
73
5月8日
May 8th
春季萌发芽
buds germinate in the spring
50
19
38
7月16日
July 16th

夏季萌发芽
buds germinate in the summer
60
9
16
由表1可知冬季水培芽成活率最高达73%，其次是春季萌发芽成活率38%，夏季萌发芽最低16%。这是因为水培芽未受室外杂菌的严重侵染，芽本身含菌少，而且水培芽营养储藏丰富健壮，自身抗性强，萌发能力强，生长快，因而成活率高。春季萌发的芽，因环境温度不是很高，空气湿度较大，浮尘及细菌也少，相应对芽的浸染程度降低，灭菌较容易，所以成活率也相对较高。夏季采取打顶萌发取芽，因这时苗木处于生长旺盛期，植物体营养主要用于生殖生长，取芽后萌发不好，又因此时环境温度很高，杂菌多，灭菌非常困难，所以成活率低。
（二）不同激素浓度对试管苗增殖倍数的影响：
1、外植体的增殖诱导：
灭菌后的外植体接种在全量MS附加糖3%，琼脂0.45%，PH5.8，6-BA0.5mg/L，NAA0.01mg/L的培养基上，经20天左右的培养外植体基部略有膨大，腋芽大多数未萌发，高2厘米左右，这是可将外植体在超净台上剪切后接种到较高浓度的激素中，进行继代扩大培养。
2、 诱导增殖培养基的筛选：
试验中我们对培养基中附加不同浓度激素，试管苗增殖情况进行了研究对比，从而选出了适合巴旦杏增殖的培养基。
试验结果表明，激素浓度6-BA为10.-1.5mg/L，NAA为0.01mg/L，试管苗增殖倍数高，丛生芽萌发好；而激素浓度6-BA为0.5mg/L, NAA为0.01mg/L，高生长明显，叶芽不萌发；激素浓度6-BA为2.0-3.0mg/L，NAA为0.01mg/L，高生长明显降低，丛生芽萌发不好繁殖倍数降低，试管苗生长形态出现了变异。因此巴旦杏试管苗的增殖培养不适宜在激素浓度较高的培养基中进行。
（三）试管苗的生根与移栽：
1、壮苗培养：
增芽试管苗在用于生根之前，要进行壮苗培养。即把试管苗从高浓度激素中转入低浓度激素中培养。壮苗培养不仅可以加快芽的高生长速度，还能起到降低或减少芽细胞中6-BA的含量，避免了因芽中含有过高的激素而影响试管苗的生根及生根率。壮苗培养基选用全量MS、附加糖3%，琼脂0.45%，激素6-BA0.5mg/L，NAA0.01mg/L，经25天左右的培养剪下嫩芽用于生根。
2、 试管苗的生根培养：
2.1培养基中的附加激素生根法：
试管苗经壮苗培养，当高生长至2厘米左右时，可将健壮的芽剪下接种到生根培养基中，经20天左右的培养就可生根。生根培养基采用1/2MS，附加糖3%，琼脂0.45%，IBA或IAA0.5mg/L，生根率达95%以上。
2.2培养基中不加激素生根法：
首先将生长激素IAA或IAA配制成100pmm的浓度，分装后灭菌。然后在洁净台上剪取试管苗，取出摆放到灭过菌的50毫升的烧杯中并加入无菌的生长素浸泡基部30分钟，浸泡结束把试管苗接种到无激素的1/2MS培养基中，统计结果生根率达95%以上。
3、 试管苗的移栽：
生根试管苗移栽前，需移入温室进行自然光照锻炼一周，然后取出试管苗洗净根部附着的培养基，移栽到基质中，盖上塑料薄膜保温、保湿30天左右成活。
三、讨论与建议：
1、 外植体选择对试管苗生根的影响：
巴旦杏外植体取材部位不同，生根率及难易程度不一样。经试
验研究发现，一年生枝，根部萌生条，树茎萌生条，抪种一年生苗易生根，生根率高。结果枝生根较难。
2、 试管苗的变异：
试管苗长期在高浓度的激素中进行增殖培养，易出现试管苗外
部形态特征的变异，如茎变成扁粗，矮壮，叶变小等，试管苗玻璃化严重，繁殖能力及速度降低，所以巴旦杏试管苗不适宜在高浓度的激素中培养繁殖。
3、 生根培养基中不加激素亦可获得高生根率：
试验表明培养基中加入激素和不加激素的生根率都达95%以上。因此建议巴旦杏生根培养不加激素，这样即可获得高生根率，又可降低成本。

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