补肾益智方对SAMP8小鼠海马和内嗅皮层神经元修复及突触可塑性的影响.pdf

4摇 参考文献1摇 中华医师协会神经内科分会认知障碍专业委员会中国血管性认知障碍诊治指南编写组 郾 2019 年中国血管性认知障碍诊治指南也J页.中华医学杂志,2019;99(35):2737鄄44郾2摇 魏丽娜,钟镝,陈洪苹,等 郾 血管性认知功能障碍发病机制的研究进展也J页.中风与神经疾病杂志,2019;36(3):286鄄8郾3摇 Nicolas CS,Amici M,Bortolotto ZA,et al.The role of JAK鄄STAT sig鄄naling within the CNS也J页.JAKSTAT,2013;2(1):e22925郾4摇 Tsurumi A,Zhao C,Li WX郾 Canonical and non鄄canonical JAK/STATtranscriptional targets may be involved in distinct and overlapping cel鄄lular processes也J页.BMC Genomics,2017;18(1):718郾5摇 Bao MH,Lv QL,Li HG,et al.A novel putative role of TNK1 in ather鄄osclerotic inflammation implicating the Tyk2/STAT1 pathway 也 J页.Mediators Inflamm,2020;2020:6268514郾6摇 Liu Y,Du H,Wang S郾 Grass carp(Ctenopharyngodon idella)TNK1modulates JAK鄄STAT signaling through phosphorylating STAT1也J页.Dev Comp Immunol,2021;116:103951郾7摇 李长生,李军,关新华,等 郾 首乌益智胶囊治疗血管性痴呆 80 例临床研究也J页.中国老年学杂志,2008;28(4):369鄄71郾8摇 王蕾,李长生,郭洪志,等 郾 首乌益智胶囊对 Notch 通路的调控作用的研究也J页.临床神经病学杂志,2014;27(4):283鄄5郾9摇 Wu J,Hu W,Gong Y,et al.Current pharmacological developments in2,3,4忆,5鄄tetrahydroxystilbene 2鄄O鄄茁鄄D鄄glucoside(TSG)也J页.Eur JPharmacol,2017;811:21鄄9郾10摇 Zhang M,Yan H,Li S,et al.Rosmarinic acid protects rat hippocam鄄palneurons from cerebral ischemia/reperfusion injury via the Akt/JNK3/caspase鄄3 signaling pathway 也 J页.Brain Res,2017;1657:9鄄15郾11摇 Guo F,Lou J,Han X,et al.Repetitive transcranial magnetic stimula鄄tion ameliorates cognitive impairment by enhancing neurogenesis andsuppressing apoptosis in the hippocampus in rats with ischemicstroke也J页.Front Physiol,2017;8:559郾12摇 Xu J,Wang F,Guo J,et al.Pharmacological mechanisms underlyingthe neuroprotective effects of alpinia oxyphylla miq郾 on Alzheimer忆sdisease也J页.Int J Mol Sci,2020;21(6):2071郾13摇 Zhang J,Wu C,Gao L,et al.Astragaloside 郁 derived from Astraga鄄lus membranaceus:a research review on the pharmacological effects也J页.Adv Pharmacol,2020;87:89鄄112郾14摇 Shi M,Huang F,Deng C,et al.Bioactivities,biosynthesis and bio鄄technological production of phenolic acids in Salvia miltiorrhiza也J页.Crit Rev Food Sci Nutr,2019;59(6):953鄄64郾15摇 Jia L,Wang F,Gu X,et al.Propofol postconditioning attenuates hip鄄pocampus ischemia鄄reperfusion injury via modulating JAK2/STAT3pathway in rats after autogenous orthotropic liver transplantation也J页.Brain Res,2017;1657:202鄄7郾16摇 Quoc Trung L,Espinoza JL,Takami A,et al.Resveratrol induces cellcycle arrest and apoptosis in malignant NK cells via JAK2/STAT3pathway inhibition也J页.PLoS One,2013;8(1):e55183郾也2022鄄07鄄19 修回页(编辑摇 李和旭)补肾益智方对 SAMP8 小鼠海马和内嗅皮层神经元修复及突触可塑性的影响张彩霞摇 周泰冰摇 陈丹丹摇 接琳琳摇 卢强摇 吴君摇(山东中医药高等专科学校,山东摇 烟台摇 264199)摇 摇 也摘摇 要页摇 目的摇 探讨补肾益智方对 7 月龄 SAMP8 小鼠海马区和内嗅皮层神经元修复和突触可塑性作用的影响。方法摇 将 90 只 SAMP8 小鼠随机分为模型组、补肾益智方低剂量组和补肾益智方高剂量组,每组 30 只。选择 30 只 SAMR1 小鼠作为对照组。分别将补肾益智方免煎颗粒配成低剂量 2郾 68 g/(kgd)和高剂量 5郾 36 g/(kgd)浓度药液,模型组和对照组给予等量生理盐水灌胃。连续灌胃 42 d。应用免疫荧光染色、RT鄄聚合酶链反应(PCR)和 Western 印迹法分别检测各组海马区和内嗅皮层中生长相关蛋白(GAP)鄄43 和神经生长因子(NGF)表达变化。结果摇 与对照组比较,模型组海马区和内嗅皮层中 GAP鄄43 及 NGF 平均光密度值、mRNA 和蛋白表达均显著降低(P0郾 05,P0郾 01)。与模型组比较,补肾益智方低剂量组与高剂量组海马区和内嗅皮层中 GAP鄄43 及 NGF 平均光密度值、mRNA 和蛋白表达均显著增强(P0郾 05,P0郾 05)。结论摇 补肾益智方可通过上调 SAMP8 小鼠海马区和内嗅皮层中 GAP鄄43 和 NGF 的平均光密度值、mRNA 和蛋白量,影响神经元修复和轴突可塑性,进而减轻 SAMP8 小鼠的空间学习记忆功能损伤。也关键词页摇 阿尔茨海默病;补肾益智方;海马区;内嗅皮层;突触也中图分类号页摇 R741郾 02摇 也文献标识码页摇 A摇 也文章编号页摇 1005鄄9202(2023)17鄄4240鄄07;doi:10郾 3969/j郾 issn郾 1005鄄9202郾 2023郾 17郾 040基金项目:山东省自然科学基金(ZR2020MH350);山东省中医药科技发展计划项目(20190276)通信作者:吴君(1981鄄),男,博士,副教授,主要从事中药复方药理研究。第一作者:张彩霞(1986鄄),女,硕士,讲师,主要从事神经发育与神经退行性疾病研究。摇 摇 阿尔茨海默病(AD)是一种随着年龄增长认知功能逐渐下降最终导致死亡的神经退行性疾病,好发于65 岁以上的老年人也1页,目前尚无有效的治疗方法。中医认为 AD 的认知功能减退主要与老年衰惫、肾精失充有关。补肾类中药复方具有多靶点、多途径的优0424中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷势,在延缓脑组织的衰老、改善学习记忆障碍等能力方面有着独特的优势也2页。研究表明,连续补肾益智方灌胃的 AD 模型鼠,脑内兴奋性氨基酸明显降低,而抑制性氨基酸 酌 氨基丁酸和甘氨酸的含量升高,有预防及缓解记忆力衰退的功效也3页。水迷宫实验表明,补肾益智方能显著提高 AD 模型鼠学习记忆能力也4页。生长相关蛋白(GAP)鄄43 和神经生长因子(NGF)均是与轴突生长、突触可塑性和神经修复密切相关的基因也5,6页。本研究拟通过观察补肾益智方对 7 月龄SAMP8 小鼠海马和内嗅皮层中 GAP鄄43 和 NGF 表达的影响,研究中药复方对神经元的作用机制,以期为中医中药防治 AD 的临床应用提供更多实验依据。1摇 材料与方法1郾 1摇 实验动物摇 7 月龄快速老化模型 SAMP8 雄性小鼠 90 只,7 月龄雄性 SAMR1 小鼠 30 只,均购自北京华阜康生物科技有限公司,动物许可证号SCXK(京)2019鄄0008。SPF 级,动物实验室内通风良好,自然光照,室温(22依2)益。适应性喂养后进行灌胃试验。1郾 2摇 实验药物摇 补肾益智方:熟地黄 15 g、枸杞子20 g、山茱萸 12 g、盐益智仁 6 g、丹参 15 g、当归10 g、郁金10 g、石菖蒲10 g、川芎10 g、远志6 g 等,以上药物经山东天江药业制成免煎颗粒。补肾益智方剂量设定根据成人临床给药剂量 1郾 34 g/(kgd)的 2 倍、4 倍确立也7页,低剂量也2郾 68 g/(kgd)页、高剂量补肾益智方药液终浓度也5郾 36 g/(kgd)页连续灌胃 6 w。药液配制完成后放置于 4 益冰箱冷藏备用,用前 37 益温水浴后摇匀。1郾 3摇实 验 试 剂 摇兔 抗 GAP鄄43 多 克 隆 抗 体(ab75810)和兔抗 NGF 多克隆抗体(ab52918)均购自 Abcam 公司;荧光素鄄5鄄异硫氰酸盐(FITC)标记羊抗兔 IgG(111鄄095鄄003)购自美国 Jackson ImmunoResearch;TRIzol(15596鄄026)购自美国 Invitrogen 公司;cDNA 第一链合成试剂盒(RR036B)购自日本TaKaRa,;One Step TB GreenTMPrimeScriptTMRT鄄聚合酶链反应(PCR)Kit 域(SYBR Green)购自日本TaKaRa,生产批号:RR086B。1郾 4摇 给药与取材摇将 SAMP8 小鼠随机分成 3 组:模型组、补肾益智方低剂量组和补肾益智方高剂量组。对照组为同月龄 SAMR1 小鼠。补肾益智方低剂量 组 和 高 剂 量 分 别 给 予 小 鼠 终 浓 度 为2郾 68 g/(kgd)和5郾 36 g/(kgd)补肾益智方药液连续灌胃42 d。模型组和对照组均给予等量生理盐水灌服,乌拉坦麻醉。随机选取部分小鼠经心脏灌注 4%多聚甲醛固定,取小鼠大脑,制作石蜡切片,进行免疫荧光染色。一部分剥离小鼠海马和内嗅皮层,TRIzol 匀浆器冰上充分匀浆,提取总 RNA,一部分提取小鼠海马和内嗅皮层总蛋白。1郾 5摇 免疫荧光染色摇 切片脱蜡,封闭内源性过氧化物酶;37 益封闭非特异性抗原。甩去多余血清,滴加一抗兔抗 GAP鄄43(1 颐150)或兔抗 NGF(1 颐200),将切片置于湿盒,孵育过夜(4 益)。滴加荧光二抗(1 颐400),37 益,避光孵育 50 min;4忆,6忆鄄二脒基鄄2鄄苯基吲哚(DAPI)核染,将切片置于暗盒,孵育 5 min。荧光防淬灭封片剂封片。激光共聚焦显微镜观察、摄片。1郾 6摇RT鄄PCR摇分别提取小鼠海马和内嗅皮层总RNA,进行 RT鄄PCR 实验,实验步骤参照 Zhou 等也8页。扩增条件:预变性 95 益,5 min;变性 95 益,15 s,58 益退火20 s,延伸72 益,40 s,进行40 循环;95 益,8 min。引物序列:GAP鄄43 上游引物:5忆鄄GCTGT鄄GCTGTATGAGAAGAACC鄄3忆,下游:5忆鄄AATTTTGGT鄄CGCAGCCTTATGA鄄3忆;NGF 上游引物:5忆鄄GTCTGG鄄GCCCAATAAAGGTTTT鄄3忆,下游:5忆鄄GAAGTTTAGT鄄CCAGTGGGCTTC鄄3忆;磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)上游引物:5忆鄄GAAGGTGGTGAAGCAGGCATCT鄄3忆,下游:5忆鄄CGGCATCGAAGGTGGAAGAGTG鄄3忆。1郾 7摇 Western 印迹检测摇 分别提取小鼠海马和内嗅皮层组织总蛋白。十二烷基硫酸钠(SDS)鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),转膜,5%脱脂奶粉溶液室温封闭 60 min;一抗(兔抗 GAP鄄431 颐15 000 或兔抗NGF1 颐12 000),4 益 过夜;羊抗兔二抗(1 颐5 000)37 益摇床孵育 55 min;电化学发光(ECL)反应3 min,暗室胶片曝光。1郾 8摇统计学处理摇采用 SPSS20郾 0 软件进行 t 检验。采用 ImageJ 图像分析光密度值。2摇 结摇 果2郾 1摇 GAP鄄43 定位于海马和内嗅皮层区且补肾益智方灌胃后表达升高摇 各组大脑切片的海马和内嗅皮层区中均可检测到 GAP鄄43 阳性细胞。与对照组比较,模型组海马区和内嗅皮层中 GAP鄄43 平均光密度值、mRNA 及蛋白表达明显降低(P 0郾 01,P 0郾 05)。与模型组比较,补肾益智方低剂量组与高剂量组海马区和内嗅皮层中 GAP鄄43 平均光密度值、mRNA 及蛋白表达均显著增强(P 0郾 01,P 0郾 05)。见图 1、图 2、表 1、图 3、图 4。1424张彩霞等摇 补肾益智方对 SAMP8 小鼠海马和内嗅皮层神经元修复及突触可塑性的影响摇 第 17 期图 1摇 各组海马区 GAP鄄43 表达(免疫荧光,伊400)图 2摇 各组内嗅皮层 GAP鄄43 表达(免疫荧光,伊400)2424中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷表 1摇 各组海马区及内嗅皮层 GAP鄄43 免疫阳性细胞平均光密度值、mRNA 和蛋白表达比较(x依s,n=10)组别海马区平均光密度值mRNA蛋白内嗅皮层平均光密度值mRNA蛋白对照组23郾 52依1郾 230郾 94依0郾 160郾 98依0郾 2022郾 39依3郾 310郾 87依0郾 151郾 21依0郾 23模型组19郾 39依1郾 442)0郾 69依0郾 142)0郾 74依0郾 181)18郾 17依2郾 871)0郾 56依0郾 092)0郾 89依0郾 201)补肾益智方低剂量组24郾 81依1郾 794)1郾 11依0郾 224)1郾 57依0郾 244)23郾 87依2郾 494)0郾 69依0郾 153)1郾 17依0郾 183)补肾益智方高剂量组25郾 64依2郾 634)1郾 17依0郾 214)1郾 88依0郾 254)25郾 90依1郾 574)0郾 80依0郾 194)1郾 20依0郾 203)摇 与对照组比较:1)P0郾 05,2)P0郾 01;与模型组比较:3)P0郾 05,4)P0郾 01;下表同1 4:对照组、模型组、补肾益智方低剂量组、补肾益智方高剂量组;图 4 同图 3摇 Western 印迹检验各组海马区 GAP鄄43 和NGF 蛋白表达2郾 2摇 NGF 定位于海马区且补肾益智方灌胃后表达升高摇 补肾益智方灌胃 42 d 后,各组海马区和内嗅皮层切片中均可检测到 NGF 阳性细胞。与对照组比较,模型组海马区和内嗅皮层中 NGF 平均光密度值、mRNA及蛋白表达均明显降低(P0郾 01,P0郾 05)。与模型组比较,补肾益智方低剂量组与高剂量组海马区和内嗅皮层中 NGF 平均光密度值、mRNA 及蛋白表达均显著增强(P0郾 01,P0郾 05)。见图 3 图 6、表 2。图 4摇 Western 印迹检验各组内嗅皮层 GAP鄄43 和NGF 蛋白表达图 5摇 各组海马区 NGF 表达(免疫荧光,伊400)3424张彩霞等摇 补肾益智方对 SAMP8 小鼠海马和内嗅皮层神经元修复及突触可塑性的影响摇 第 17 期图 6摇 各组内嗅皮层 NGF 表达(免疫荧光,伊400)表 2摇 各组海马区及内嗅皮层 NGF 免疫阳性细胞平均光密度值、mRNA 和蛋白表达比较(x依s,n=10)组别海马区平均光密度值mRNA蛋白内嗅皮层平均光密度值mRNA蛋白对照组18郾 64依1郾 320郾 92依0郾 171郾 66依0郾 3316郾 72依2郾 190郾 91依0郾 171郾 04依0郾 23模型组13郾 18依1郾 792)0郾 74依0郾 081)1郾 24依0郾 301)14郾 16依1郾 531)0郾 66依0郾 142)0郾 58依0郾 191)补肾益智方低剂量组19郾 90依2郾 474)1郾 05依0郾 214)1郾 83依0郾 294)17郾 34依1郾 943)0郾 87依0郾 213)0郾 94依0郾 204)补肾益智方高剂量组21郾 42依2郾 184)1郾 12依0郾 174)1郾 97依0郾 324)18郾 74依2郾 124)0郾 90依0郾 223)0郾 95依0郾 214)摇3摇 讨摇 论摇 摇 AD 可影响人体多个系统,随着病情加重,会导致患者失去自主生活能力并带来严重的并发症,最终死亡。研究发现,内嗅皮层是 AD 患者大脑中最早最明显的受损区,AD 早期内嗅皮层中会出现神经元凋亡、神经纤维缠结、淀粉样斑块和突触损伤丢失等现象,随后逐渐扩展至海马等周围结构也9页。内嗅皮层连接海马与新皮层,被称为皮层记忆的枢纽,内嗅皮层神经元在记忆的恢复中起着重要作用也10页。神经元的记忆功能活动需要依靠突触连接来实现,因此突触的损伤或缺失是影响认知功能神经生物学的重要因素也11页。GAP鄄43 是一种在大脑海马中表达丰富的磷蛋白,可影响神经发育和突触重塑。在正常海马和记忆相关区域,GAP鄄43 高水平表达,而 GAP鄄43 缺失会导致小鼠空间记忆功能障碍也12页。当神经系统受损时,损伤部位周围的神经元可通过反应性轴突和侧枝再生进行补偿。受损区域中的 GAP鄄43 表达水平随损伤修复时间的增加而增加,然后逐渐降低。因此,GAP鄄43 被认为是研究神经可塑性、修复和再生的首选探针也13页。本实验两组海马区和内嗅皮层中均检测到 GAP鄄43 阳性细胞的存在。历代名老中医常以“肾鄄髓鄄脑冶为轴线,以补肾为先的理念论治 AD 临床证明可取得满意疗效。补肾益智方中枸杞子、熟地黄和山茱萸可补肾填精,郁金、石菖蒲和远志可活血化痰开窍。因此补肾益智方具有补肾益气、活血健脑和开窍醒神的功效,与AD 发病机制相契合也14页。本实验以补肾益智方饮片4424中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷为原料,通过现代化制药技术制成免煎颗粒。免煎颗粒不但方便服用而且可以明确地控制质量,能够很好保留中药饮片的药性和药效,在一定程度可以作为中药水煎剂的替代也15页。临床实践证明,补肾益智方在老年遗忘型轻度认知功能障碍方面有疗效也16页。前期水迷宫实验发现补肾益智方能有效改善 6 月龄 SAMP8 小鼠的学习记忆能力也17页。本研究结果提示,补肾益智方免煎颗粒可上调 GAP鄄43 的表达。GAP鄄43 在大脑突触功能的维持和神经处理中起关键作用,出生 1 w 时在神经元内表达最高,成年之后除了海马和新皮质区表达较高,脑部其他区域表达较低也18页。本研究结果说明,AD 的记忆丧失可能与突触的修复或神经功能障碍有关。适度GAP鄄43 蛋白表达,有利于记忆增强,而过度的 GAP鄄43 表达反而有可能损伤记忆也19页。经过补肾益智方灌胃治疗 42 d 后,GAP鄄43 蛋白在海马的表达明显高于模型组,这提示上调的 GAP鄄43 可能有利于海马区突触修复和神经元再生,进而有改善小鼠学习记忆的作用。NGF 广泛存在于成年人中枢神经系统和周围神经系统,是一种十分重要的神经营养因子,有促进神经元发育、分化、成熟、再生和突触可塑性的作用也20页。当皮质和海马区 NGF 的供应量减少时,基底前脑胆碱能神经元形态和功能出现障碍,导致 AD 认知功能下降也21页。本研究结果提示,补肾益智方可上调 SAMP8 小鼠海马区和内嗅皮层中NGF,可能与神经元或突触的修复有关。在缺血脑卒中动物模型中,NGF 过表达可通过上调 GAP鄄43,使 GAP鄄43 稳定性提高,诱导神经元形态和功能恢复,进而缓解动物的认知障碍也22页。由此推测,补肾益智方也可能通过上调 NGF,提高 GAP鄄43 神经元和突触的修复作用,进而改善 SAMP8 小鼠的认知障碍。本研究发现,不同剂量补肾益智方在GAP鄄43、NGF 蛋白和 mRNA 表达方面尚未发现明显变化,分析原因可能与所选剂量或实验动物月龄等因素有关。综上所述,补肾益智方免煎颗粒可通过改善SAMP8 小鼠海马区和内嗅皮层中 GAP鄄43、NGF 蛋白和 mRNA 表达,减轻其空间学习记忆功能损伤,这可能与其调控神经元修复和轴突可塑性密切相关,具体机制有待深入研究。4摇 参考文献1摇Soria Lopez JA,Gonz佗lez HM,L佴ger GC郾 Alzheimer忆s disease也J页.Handb Clin Neurol,2019;167:231鄄55郾2摇 于涛,赖世隆 郾 补肾益智方对实验性阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆水平的影响也J页.中国老年学杂志,2015;35(4):1030鄄1郾3摇 侯小梅,魏晶晶,陈志琼 郾 补肾益智方对老年痴呆症大鼠脑内氨基酸类神经递质含量的影响也J页.中成药,2016;38(5):1151鄄4郾4摇 侯雪芹,陈云波,程淑意,等 郾 补肾益智提取物对 AD 小鼠空间学习记忆及氧化应激鄄凋亡相关机制的研究也J页.中华中医药杂志,2015;30(5):1640鄄3郾5摇 Huang R,Xiao H,Zhao J,et al.GAP鄄43 is involved in the orientationof cell division by interacting with Galpha玉 during neurogenesis也J页.Int J Neurosci,2020;130(2):144鄄52郾6摇 潘江,陈武善,陈成,等 郾 电针督脉经穴对大脑中动脉梗阻脑缺血模型大鼠脑梗死体积及脑组织中神经生长因子的影响也J页.中华中医药学刊,2017;35(3):541鄄3郾7摇 Zhang S,Xu T,Li L,et al.Correction:bushen鄄yizhi formula amelio鄄rates cognitive dysfunction through SIRT1/ER stress pathway inSAMP8 mice也J页.Oncotarget,2020;11(27):2684鄄5郾8摇 Zhou F,Zhang C,Guan Y,et al.Screening the expression characteris鄄tics of several miRNAs in G93A鄄SOD1 transgenic mouse:altered ex鄄pression of miRNA鄄124 is 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受体(VEGFR)2;牙髓血运重建术;牙髓血管新生;牙周炎也中图分类号页摇 R781摇 也文献标识码页摇 A摇 也文章编号页摇 1005鄄9202(2023)17鄄4246鄄05;doi:10郾 3969/j郾 issn郾 1005鄄9202郾 2023郾 17郾 041基金项目:2021 年度河北省医学科学研究课题计划(20210456)第一作者:王芹(1984鄄),女,硕士,主治医师,主要从事口腔疾病治疗研究。摇 摇 牙髓血运重建术(REPs)为治疗年轻恒牙根尖周病的新方法,该术可刺激根尖周损伤并诱导血液进入根管,促进牙根继续发育也1页。近年来,因龋齿或者外伤等原因导致的年轻恒牙牙髓病和根尖周病的发病率逐年上升,REPs 诱导血管新生、促进牙髓修复再生、治疗牙髓病和根尖周病的潜在作用越来越受到临床研究的重视也2页。但 REPs 在细胞因子水平的研究少见,其促进牙髓血管再生修复的具体分子生物学机制也不甚明确。血管内皮细胞生长因子(VEGF)是一种促血管生成最强烈的细胞因子,可与 VEGF 受体(VEGFR)2 结合调控相关基因转录表达,参与炎症反应、创伤愈合及组织器官生长发育等过程也3页。但 VEGF/VEG鄄FR2 是否参与调控牙髓血管再生促进牙髓组织修复过程还不明确。本研究通过在根管显微镜下建立大 鼠 磨 牙 牙 髓 血 管 再 生 术 动 物 模 型,探 讨VEGF/VEGFR2 的动态表达及定位情况,推测其在牙髓血管再生术后修复中的价值。1摇 材料与方法1郾 1摇 动物摇取雄性 SD 大鼠 25 只,体质量 250 280 g,鼠龄 2 3 个月,口腔卫生状况良好,无龋齿及牙周疾病,动物合格证号为 SCXK(渝)2017鄄006。饲养于河北北方学院附属第一医院动物房内。本研究由河北北方学院附属第一医院动物伦理委员审核批准也审批号:IACUC鄄01(20160917)页。1郾 2 摇主 要 试 剂 与 仪 器 摇胰 蛋 白 酶 也 货 号:abs47047375,爱必信(上海)生物科技有限公司页;苏木素鄄伊红(HE)染色试剂盒(货号:R20570,厂家:上海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司);VEGF(货 号:ab69479)、VEGFR(货 号:ab39638)、骨 桥 蛋 白(OPN,货 号:ab8448)、整 合 素(琢v)茁3(货 号:ab119365)抗体(美国 abcam 公司);蛋白电泳仪(型号 1658033,美国 Bio鄄Rad 公司)。1郾 3摇 模型构建与分组摇 随机将 25 只大鼠分为正常对照组、根尖周炎组、REPs 术后 7、14、28 d 组,根尖周炎模型建立及 REPs 参照文献也4页进行。将大鼠用戊巴比妥钠麻醉后,仰卧固定,用 30 ml/L 的饱和过氧化氢液棉球清洁口腔,750 mg/L 乙醇消毒双侧磨牙区,取左右两侧下颌第一磨牙放置吸唾管,全程保6424中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷