败酱草提取液对仔兔脂多糖肠炎模型的修复作用.pdf

312023.9试验研究0 引言伴随着规模化养兔业不断壮大，家兔的疾病也呈上升势头，尤其是断奶仔兔的肠炎和腹泻，成为一些兔场的最主要疾病。研究表明，幼兔死亡率高达收稿日期：2023-08-17基金项目：塔里木大学校长基金科研条件项目（TDZKKY202203）作者简介：刘金辉（1976-），男，新疆人，本科，从事畜牧兽医、草原监理、农产品检验检测等工作。*通信作者简介：陈荣（1977-），男，新疆人，博士，副教授，硕士生导师，从事动物营养代谢病与中毒病的研究。刘金辉，李平，祖克热古丽苏力坦，等败酱草提取液对仔兔脂多糖肠炎模型的修复作用J现代畜牧科技，2023，100（9）：31-34doi：10.19369/ki.2095-9737.2023.09.009LIU Jinhui，LI Ping，ZukereguliSulitan，et alRepair Effect of Patrinia Extract on Lipopolysaccharide Enteritis Model in Young RabbitsJModern Animal Husbandry Science&Technology，2023，100（9）：31-34败酱草提取液对仔兔脂多糖肠炎模型的修复作用刘金辉1，李平2，祖克热古丽苏力坦2，陈荣2*（1.新疆昌吉州农畜产品检验检测中心，新疆 昌吉 831100；2.塔里木大学动物科学与技术学院，新疆 阿拉尔 843300）摘要：为研究败酱草提取液对脂多糖所致的仔兔肠炎的修复作用。选取40只仔兔，随机分为5组，空白组、模型组、败酱草提取液低、中、高剂量组。空白组腹腔注射2 mg/kg的生理盐水，其余各组仔兔通过腹腔注射2 mg/kg脂多糖（LPS）建立仔兔肠炎模型，连续3 d，每天注射1次。败酱草提取液低、中、高剂量组依次按1、3、5 mL/kg在饮水中添加败酱草提取液，其余组正常饮水，连续给药15 d，每天1次。通过苏木精伊红（HE）染色从小肠的绒毛高度、隐窝深度和绒隐比（V/C）来研究败酱草提取液对脂多糖诱导仔兔肠炎的修复作用。结果表明，与空白组相比，模型组小肠的绒毛高度、V/C值均显著低于空白组且隐窝深度均显著高于空白组（P0.05）。高剂量组小肠的绒毛高度和绒隐比均显著高于中剂量组（P0.05）。研究表明，按5 mL/kg在饮水中添加败酱草提取液可有效修复仔兔脂多糖模型。关键词：败酱草提取液；脂多糖；肠炎；免疫器官；小肠黏膜免疫中图分类号：S829.1文献标识码：Adoi：10.19369/ki.2095-9737.2023.09.009Repair Effect of Patrinia Extract on Lipopolysaccharide Enteritis Model in Young RabbitsLIU Jinhui1，LI Ping2，ZukereguliSulitan2，CHEN Rong2*（1.Changji Agricultural and Livestock Products Inspection and Testing Center，Changji Xinjiang 831100，China；2.College of Animal Science and Technology，Tarim University，Alar Xinjiang 843300，China）Abstract：In order to study the repairing effect of patrinia extract on lipopolysaccharide-induced enteritis in young rabbitsForty young rabbits were randomly divided into 5 groups：blank group，model group，low dose group，medium dose group and high dose groupThe blank group was intraperitoneally injected with 2 mg/kg normal saline，rabbits in the other groups were intraperitoneally injected with 2 mg/kg lipopolysaccharide（LPS）to establish enteritis model，for 3 consecutive days，once a dayLow dose group，medium dose group and high dose group were added to drinking water at the rate of 1，3，5 mL/kg respectively，and the other groups were given normal drinking water for 15 days，once a dayThe repair effect of Parvalium extract on lipopolysaccharide-induced enteritis in young rabbits was studied by hematoxylin-eosin（HE）staining from villus height，crypt depth and pile crypt ratio（V/C）of small intestineThe results showed as follows：Compared with blank group，villus height and V/C value of small intestine in model group were significantly lower than those in blank group，and crypt depth was significantly higher than that in blank group（P0.05）The villus height and pile to hide ratio of small intestine in high-dose patrinia treatment group were significantly higher than those in medium-dose patrinia treatment group（P0.05）The results showed that the lipopolysaccharide model of young rabbits could be effectively repaired by adding the extract of Patrinia in drinking water at the rate of 5 mL/kgKeywords：patrinia extract，lipopolysaccharide，enteritis，immune organs，intestinal mucosal immunity32 2023.9试验研究50%70%，其中腹泻占到80%以上1。生产中采用传统方法以抗生素等药物控制腹泻，不仅造成药物的残留，对人体健康也造成极大的威胁，同时带来一系列的弊端，且仔兔腹泻病因复杂，治愈率低，仔兔腹泻是兔养殖行业的一大棘手问题。败酱草也叫鹿肠、泽败、苦菜等，是一种属于败酱科的多年生植物黄白花败酱的一种连根的全草，在新鲜时没有其他变化，干枯后会有一股浓烈的酱汁味，因此而得名。神农本草经中记载，败酱草具有清热解毒、祛瘀止痛的功效，可以用来治疗肠痛、肺痈、燥热便秘、痢疾、产后瘀血症等2，广泛应用于临床。叶志雄等3研究表明黄花败酱的甲醇提取物对小鼠的试验性结肠炎有良好的疗效。朱加进等4研究表明黄花败酱草中单宁、多糖和果胶等物质能明显减少小鼠的排便次数，延长排便时间，对便秘和腹污具有双向调节作用。小肠是机体中最主要的消化吸收器官，起着吸收营养和排出代谢废物的作用。在病原菌、毒素或内毒素进入到肠道之后，可以在绒毛中进行大量的聚集，通过破坏绒毛结构，来抵抗病原菌、毒素和内毒素的入侵5。肠道绒毛高度、隐窝深度和绒隐比（V/C）被用来评价肠道健康水平的常用指标。其中V/C比值是评价小肠功能状态的一个较好指标，比值降低，表明肠道黏膜受到了损伤，消化和吸收能力降低，往往伴有痢疾，发育迟缓等症状；而比率升高，胃肠道黏膜得到改善，胃肠道的消化和吸收得到加强，腹泻的发生率降低，增长的速度就会加快6。败酱草中的活性成分种类丰富，具有应用广泛、分布广、资源丰富等优点，是一种具有很高开发利用价值和药用价值的野生植物资源7。目前有关败酱草提取物对兔子小肠组织病理学变化的研究较少。因此，本试验通过在仔免肠炎模型中添加不同剂量的败酱草提取液，旨在探究败酱草提取液对仔兔LPS所致肠炎肠道的变化，为败酱草提取液对仔兔腹泻的预防和资料奠定基础。1 材料与方法1.1 试验动物与材料1.1.1 试验动物40日龄仔兔（40035）g购自塔里木大学动物科学与技术学院试验动物中心。1.1.2 试验主要试剂与仪器伊红染液购自上海尚宝生物科技有限公司；苏木素染液购自成都钠钶锂生物科技有限公司；脂多糖LPS（abs47014848）购自上海爱必信生物科技有限公司；4%多聚甲醛固定液购自西安齐岳生物科技有限公司；败酱草购自豪州豪林堂生物科技有限公司；二甲苯溶液购自山东豪客新材料有限公司。数显恒温水浴锅（HH-11-1）购自杭州瑞诚仪器有限公司；石蜡包埋机（TJ-300）购自济南来宝医疗器械有限公司；解剖器材（ZK-SD）购自江苏荣畅牧野发展有限公司。1.2 试验方法1.2.1 败酱草提取液的制备采用水煎法制备败酱草提取液：称取败酱草80 g，加10倍量的蒸馏水使其浸泡30 min，加热至沸腾，文火保持30 min，用6层纱布过滤第1次的滤液，将过滤后的败酱草药渣再加8倍量的蒸馏水，加热至沸腾后文火保持30 min，之后再用6层纱布对第2次水煎的药渣液进行过滤，2次过滤结束后，合并2次过滤好的滤液，将滤液用80 恒温水浴锅浓缩至原生药量1 g/mL后放入冰箱5 保存备用。1.2.2 败酱草提取对LPS所致仔兔肠炎修复试验设计将40只仔兔分为5个组（每组8只），除空白组外，其余各组仔兔通过腹腔注射2 mg/kg脂多糖（LPS）建立仔兔肠炎模型，空白组腹腔注射2 mg/kg的生理盐水，连续3 d，每天注射1次。后败酱草提取液低剂量组、中剂量组和高剂量组依次按1、3、5 mL/kg在饮水中添加败酱草提取液，空白组和模型组正常饮水，连续给药15 d，每天1次。试验结束后，禁饲12 h，利用空气栓塞处理法处死仔兔。每组随机各取3只仔兔的十二指肠、空肠和回肠约（35 cm）并保存于4%多聚甲醛溶液备用于HE染色，通过观察各组仔兔十二指肠、空肠和回肠的肠绒毛高度、隐窝深度和绒隐比（V/C）来研究败酱草提取物对仔兔脂多糖模型修复。1.3 数据处理试验数据采用SPSS16.0软件处理，结果以“平均值标准差”表示，组间差异性比较采用单因素方差分析，P0.05为差异显著，P0.01为差异极显著。2 结果与分析2.1 仔兔肠炎模型组精神状态及粪便的观察空白组仔兔整体状态良好，体形状况、生长情况较好。模型组仔兔均精神状态极差并伴有腹泻症状。高剂量LPS模型处理组仔兔的腹泻情况相比低剂量LPS模型处理组跟明显。以2 mg/kg LPS处理来建立LPS所致仔兔的肠炎模型。2.2 不同剂量败酱草处理组对仔兔脂多糖模型小肠相关指标分析各组十二指肠、空肠和回肠的HE切片依次见图1、图2和图3。由图1可知，空白组十二指肠并没有明显的病理变化，肠绒毛完整，肠黏膜结构清晰可见，整体情况良好。模型组十二指肠与空白组相比，固有层充血，肠上皮出现散在出血点，并出现肠绒毛断裂的情况，有332023.9试验研究大量的炎性细胞浸润。低剂量组的十二指肠有少量的出血，肠绒毛断裂情况相较于空白组严重。中剂量组十二指肠没有出血点，肠绒毛比较完整。高剂量组十二指肠肠绒毛没有出现断裂的情况，固有层也并没有出现充血现象，没有出血点，整体情况跟空白组相似，没有明显的病理变化。由图2可知，模型组空肠与空白组相比固有层充血，肠绒毛断裂情况严重，并出现了多个出血点，空白组肠绒毛没有断裂，没有明显的病理变化。低剂量组有少量的出血点以及出现肠绒毛断裂的情况。中剂量组固有层充血情况减少，基本没有出现肠绒毛断裂的情况。高剂量组空肠整体情况良好，没有明显病理变化。由图3可知，模型组回肠与空白组相比出现了多个出血点，肠绒毛断裂情况非常严重，空白组没有出现出血点，肠绒毛也没有断裂。低剂量组有少量的出血点，高剂量组固有层充血情况基本没有。图1 不同处理组仔兔十二指肠组织病理变化（HE染色，40）A：空白组；B：模型组；C：低剂量组；D：中剂量组；E：高剂量组图2 不同处理组仔兔空肠组织病理变化（HE染色，40）A：空白组；B：模型组；C：低剂量组；D：中剂量组；E：高剂量组图3 不同处理组仔兔回肠组织病理变化（HE染色，40）A：空白组；B：模型组；C：低剂量组；D：中剂量组；E：高剂量组各组十二指肠、空肠和回肠的HE切片中绒毛高度、隐窝深度和V/C分析结果见表1、表2和表3。模型组十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度和绒隐比均显著低于空白组（P0.05）；模型组十二指肠、空肠和回肠的隐窝深度均显著高于空白组（P0.05）。低剂量败酱草处理组十二指肠、空肠和回肠中绒毛高度、绒隐比均高于模型组但差异不显著（P0.05），隐窝深度低于模型组但差异不显著（P0.05）。中剂量和高剂量败酱草处理组各段肠管中绒毛高度、绒隐比均显著高于模型组（P0.05），隐窝深度显著低于模型组（P0.05）。高剂量败酱草处理组十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度和绒隐比均显著高于中剂量败酱草处理组（P0.05）。表1 不同处理组仔兔十二指肠相关指标分析空白组模型组低剂量组中剂量组高剂量组绒毛高度（mm）0.5630.093c0.3980.036a0.4230.030a0.4700.037b0.5440.048c隐窝深度（mm）0.0410.004a0.0780.023b0.0640.009b0.0510.007a0.0430.005a绒隐比（V/C）值0.0130.004c0.0050.003a0.0070.003a0.0090.001b0.0120.002c注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。34 2023.9试验研究3 讨论多种炎性疾病在人与动物的多种疾病中发挥着极其重要的作用，而炎性反应是这些疾病最基本的致病机制。因此构建更接近动物感染后炎性反应过程稳定可靠的动物肠上皮细胞炎性反应动物模型，对动物肠上皮细胞炎性反应的防治和评价有着重要的现实意义。大鼠源感染、犬源感染和兔子感染是最常见的模型。LPS是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分，在介导肠道炎症反应中起重要作用，因此常被用于构建肠炎模型进行更深入的科学研究8。徐佳萌等9研究发现，LPS可直接导致小肠上皮细胞的炎症，经LPS制炎后，小鼠空肠肠绒毛结构被破坏，黏膜层可见明显水中。因此本实验构建了LPS所致的仔兔肠炎模型，经过连续3 d给药，除空白组外，其余试验组仔兔均有腹泻症状。败酱草提取液对细菌、真菌有明显抑制作用。败酱草具有抗菌、抗病毒、止血等多种药理作用，研究发现败酱草提取液对多种疾病有明显疗效。崔文燕等10发现败酱草提取对大肠杆菌有抑制作用。肠道是机体与外界环境接触最为密切的部位，当病原菌入侵机体时会黏附在肠黏膜上生长繁殖，破坏肠道正常形态，诱导肠道局部黏膜免疫失调，是导致细菌性肠炎发生的主要原因。肠道形态结构、肠上皮细胞、肠黏膜黏液层、紧密连接等均属于肠道局部黏膜免疫的重要组成部分11-12，是评价肠道健康及免疫水平的重要指标。研究表明，隐窝深或浅标志着成熟细胞的减少或增多；V/C值则反映肠道形态结构是否完善13。本试验中模型组的仔兔出现十二指肠、空肠、回肠肠绒毛高度降低，隐窝深度加深和V/C比值变小等不同程度不良表现。而用败酱草提取液处理的中、高剂量组的仔兔十二指肠、空肠、回肠等与模型组相比肠绒毛高度和V/C比值等均显著升高且隐窝深度均降低。高剂量败酱草处理组十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度和绒隐比均显著高于中剂量败酱草处理组。以上试验结果表明败酱草提取液可以缓解肠炎仔兔肠黏膜损伤。因此，饲喂败酱草提取液可以修复LPS所致仔兔十二指肠、空肠和回肠的损伤且本试验发现按5 mL/kg饮水中添加败酱草提取液较明显的修复LPS所致仔兔十二指肠、空肠和回肠的损伤。参考文献1谷子林断乳仔兔腹泻发生机制及生物活性物质的调控研究D哈尔滨：东北农业大学，20042张一芳败酱草研究进展J中药材，2009，32（1）：148-1523叶志雄，苏俊芳，黄旭东，等黄花败酱甲醇提取物对小鼠溃疡性结肠炎影响的药效学研究J新中医，2013，45（9）：157-1594朱加进苦菜中单宁提取工艺及其抗便秘作用研究J农业工程学报，2003，19（2）：186-1895 利凯，王鹏，马利芹，等白头翁提取物对感染大肠杆菌仔兔十二指肠组织的影响J黑龙江畜牧兽医，2017，60（19）：195-197，297-2986胡艳欣，佘锐萍，张发明，等热应激对猪肠道结构及功能的影响C/中国畜牧兽医学会中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集（上册）中国农业出版社，20067曹授俊，华勇谋，乔立东，等中药“健脾消食散”对鸡小肠黏膜上皮细胞影响的研究J饲料研究，2013，36（7）：66-67，718刘颖，田旭，冯晓梦，等黄芪多糖对肠炎雏鸡小肠黏膜损伤的保护作用J中国畜牧兽医，2023，50（1）：76-859徐佳萌，孔祥峰，崔亚东，等中药复方制剂对LPS诱导的肠炎小鼠模型的保护作用J畜牧与兽医，2022，54（5）：128-13310 崔文燕，刘素香，宋晓凯，等黄花败酱草和白花败酱草的化学成分与药理作用研究进展J药物评价研究，2016，39（3）：482-48811 呙于明，刘丹，张炳坤家禽肠道屏障功能及其营养调控J动物营养学报，2014，26（10）：3 091-3 10012 雷春龙，董国忠肠道菌群对动物肠黏膜免疫的调控作用J动物营养学报，2012，24（3）：416-42213 梁小瑞，贾诚，王丹阳，等三味补益类中药水提物对鸡肠道形态结构和免疫功能的影响J黑龙江畜牧兽医，2021（4）：110-115，158表2 不同处理组仔兔空肠相关指标分析空白组模型组低剂量组中剂量组高剂量组绒毛高度（mm）0.5060.077c0.2910.066a0.3000.141a0.3530.029b0.4580.038c隐窝深度（mm）0.0460.003a0.0780.019c0.0760.012c0.0630.008b0.0440.005a绒隐比（V/C）值0.0890.033b0.0580.028a0.0620.022a0.0680.006a0.0720.007b表3 不同处理组仔兔回肠相关指标分析空白组模型组低剂量组中剂量组高剂量组绒毛高度（mm）0.5170.053c0.2760.024a0.3800.009a0.4660.046b0.4830.046c隐窝深度（mm）0.0480.008a0.0710.010b0.0700.004b0.0580.002a0.0520.002a绒隐比（V/C）值0.0110.002c0.0040.001a0.0050.001a0.0070.001b0.0090.001c编辑：方雅琪