稀释液配制操作规程.doc

稀释液配制操作规程

１、        配制稀释液的药品要求选用分析纯试剂，对含有结晶水的试剂要按摩尔浓度进行换算（如含水葡萄糖和无水葡萄糖）；
２、        按稀释液配方，用称量纸、电子天平准确称量药品；
３、        按1000ml、2000ml剂量称量稀释粉，置于密封袋中；
４、        使用前将称量好的稀释粉溶于定量的双蒸水中，可用磁力搅拌器助其溶解；
５、        用滤纸过滤，以尽可能除去杂质；
６、        用1N稀盐酸或1N氢氧化钠调整BTS稀释液的PH值为7.2(6.8-7.4)左右,渗透压为330mOsm；稀释液配好，应及时贴上标签，标明品名、配制日期和时间、经手人等；
７、        要认真检查已配制好的稀释液成品，发现问题及时纠正；
８、        液态状稀释液冰箱4℃保存，不超过24小时，超过有效贮存期的变质稀释液应废弃。

精液品质的检查操作规程

１、            精液量：以电子天平称量精液，按每克1毫升计，避免以量筒等转移精液盛放容器的方法测量精液体积；
２、            颜色：正常的精液是乳白色或浅灰白，精子密度越高，色泽愈浓，其透明度愈低。如带有绿色或黄色是混有脓液或尿液，若带有淡红色或红褐色是含有血液。这样的精液应舍弃不用，会同兽医寻找原因；
３            气味：猪精液略带腥味，如有异常气味，应废弃；
４、            pH值（酸碱度）：以PH计测量（PH计使用见说明书）；
５、            精子活率检查：活率是指呈直线运动的精子百分率，在显微镜下观察精子活率，一般按0.1-1.0 的十级评分法进行，鲜精活率要求不低于0.7;
６、            精子密度：指每毫升精液中所含的精子数，是确定稀释倍数的重要指标。要求用血细胞计数板进行计数或精液密度仪测定。血细胞计数板计数方法：①以微量加样品取具有代表性原精液100μl，3%NaCl 900μl,混匀，使之稀释10倍；②在血细胞计数室上放一盖玻片，取1滴上述精液放入计数板的槽中，靠虹吸将精液吸入计数室内；③在高倍镜下计数5个中方格内的精子总数，将该数乘以50万，即得原精液每毫升的精子数（即精液密度）。精液密度仪使用见其说明书；
７、            精子畸形率：畸形率是指异常精子的百分率，一般要求畸形率不超过18％，其测定可用普通显微镜,但需伊红或姬姆沙染色,相差显微镜可直接观察活精子的畸形率,公猪使用过频或高温环境会出现精子尾部带有原生质滴的畸形精子;畸形精子种类很多,如:巨型精子、短小精子、双头或双尾精子，顶体膨胀或脱落、精子头部残缺或与尾部分离、尾部变曲。要求每头公猪每两周检查一次精子畸形率；
８、            按要求做好精液品质检查登记表；
９、            实事求是地填写种公猪健康状况登记表，从而真实地反应种公猪健康状况。

精液的稀释操作规程

1、  精液采集后应尽快稀释，原精贮存不超过30分钟；
2、  未经品质检查或检查不合格（活力0.7以下）的精液不能稀释；
3、  稀释液与精液要求等温稀释,两者温差不超过1℃,即稀释液应加热至33℃-37℃,以精液温度为标准,来调节稀释液的温度,绝不能反过来操作；
4、  稀释时,将稀释液沿盛精液的杯(瓶)壁缓慢加入到精液中,然后轻轻摇动或用消毒玻璃棒搅拌,使之混合均匀；
5、  如作高倍稀释时,应进行低倍稀释（1：1-2）,稍待片刻后再将余下的稀释液沿壁缓慢加入,以防造成“稀释打击”；
6、  稀释倍数的确定：活率≥0.7的精液,一般按每个输精剂量含40亿个总精子,输精量为80-90ml确定稀释倍数,例如: 某头公猪一次采精量是200ml ,活力为0.8,密度为2亿/ ml,要求每个输精剂量是含40亿精子,输精量为80ml,则总精子数为200ml×2亿/ml=400亿,输精头份为400亿÷40亿=10份，加入稀释液的量为10×80ml-200ml=600ml；
7、  稀释后要求静置片刻再作精子活力检查,如果稀释前后活力一样,即可进行分装与保存,如果活力下降,说明稀释液的配制或稀释操作有问题,不宜使用,并应查明原因加以改进；
8、  不准随便更改各种稀释液配方的成分及其相互比例,也不准几种不同配方稀释液随意混合使用；
9、  稀释液的配方见附表。

精液的常温保存的操作规程

1、          精液稀释后，检查精液活率，若无明显下降，按每头份80-90 ml分装；
2、          瓶上加盖密封，并在输精瓶上写清楚公猪的品种、耳号，采精日期（月、日、时）；
3、          置22℃-25℃的室温1小时后(或用几层毛巾包被好后)直接放置17℃冰箱中；
4、          保存过程中要求每12小时将精液混匀一次,防止精子沉淀而引起死亡
5、          每天检查精液保存箱温度并进行记录，若出现停电应全面检查贮存的精液品质；
6、          尽量减少保存精液保存箱关开次数,以免造成对精子的打击而死亡。

发情鉴定技术的操作规程

1、    母猪发情周期平均21天（19--23天），大多数经产母猪一般在仔猪断奶后的一周内（3--7天），可再次发情排卵，配种受胎；
2、    母猪发情周期可分为发情前期、发情期、发情后期和间情期，母猪只有在发情才允许公猪爬跨或称之为站立反应，此性行为表现可作为母猪适时输精的指标；
3、    各期特征，略述如下：①发情前期：母猪举动不安，外阴肿胀，并由淡黄色变为红色这种变化在后备母猪较为明显；阴道有粘液分泌，其粘度渐渐增加。在此期母猪不允许人骑在背上，平均可有2.7天，不宜输精配种。②发情期：平均约2.5天，特征为母猪阴部肿胀及红色开始减退，分泌物也变浓厚，粘度增加。此时母猪允许压背而不动，压背时，母猪双耳竖起向后，后肢紧绷。③发情后期：1-2天,发情母猪的阴部完全回复正常，不允许公猪爬跨；④间情期:13-14天,完全恢复正常状态;
4、    发情鉴定：每日最少要做两次试情（每天上午6：30-8：30和下午16：00-17：30进行发情检查），即在安静的环境下，有公猪在旁时，压背，以观察其站立反应。试情公猪一般选用善于交谈、唾液分泌旺盛行动缓慢的老公猪；
5、    作好发情检查的完整记录：包括发情母猪耳号、胎次、发情时间、外阴部变化、压背反应等，尤其是后备母猪的记录。

输精操作规程

１、            输精次数：①第1次自然交配、第2、3次人工授精；②2次人工授精；③3次人工授精；
２、            输精时间：①断奶后3-6天发情的经产母猪，发情出现站立反应后6-12小时进行第1次输精配种；②后备母猪和断奶后7天以上发情的经产母猪，发情出现站立反应，就进行配种（输精）；
３、            精液检查：从17℃保存箱取出的精液,轻轻摇匀,用已灭菌的滴管取1滴放于预热的载玻片,置于37℃的恒温板上片刻,用显微镜检查活力，精液活力≥0.7，才可进行输精；
４、            将试情公猪赶至待配母猪栏之前，使母猪在输精时与公猪口鼻部接触；
５、            输精人员消毒清洁双手；
６、            用0.1％高锰酸钾水溶液清洁母猪外阴、尾根及臀部周围,再用温水浸湿毛巾，擦干外阴部；
７、            从密封袋中取出没受任何污染的一次性输精管（手不应接触输精管前2/3部分），在其前端涂上精液作为润滑液；
８、            将输精管45度角向上插入母猪生殖道内，输精管进入3-4cm之后，顺时针旋转，当感觉有阻力时，继续缓慢旋转同时前后移动，直到感觉输精管前端被锁定（轻轻回拉不动），并且确认真正被子宫颈锁定；
９、            从精液贮存箱取出品质合格的精液，确认公猪品种、耳号；
１０、    缓慢颠倒摇均精液，用剪刀剪去瓶嘴，接到输精管上，开始进行输精；
１１、    用针头在输精瓶底部扎一个小孔，抚摸母猪的乳房或外阴、压背刺激母猪，使其子宫收缩产生负压，将精液吸纳；输精时勿将精液挤入母猪生殖道内，防止精液倒流；
１２、    控制输精瓶的高低来调节输精时间，输精时间要求3-5分钟，输完一头母猪后，应在防止空气进入母猪生殖道的情况下，把输精管后端一小段折起，放在输精瓶中，使其滞留在生殖道内3-5分钟，让输精管慢慢滑落；
１３、    从17℃精液保存箱中取出的精液，无需升温至37℃,摇匀后可直接输精,但检查精液活力需将玻片预热至37℃；
１４、    经产母猪用一次性海绵头输精管，输精前检查海绵头是否松动；后备母猪用一次性螺旋头输精管。为防止子宫炎发生，每头母猪每次输精都应使用一条新的输精管；
１５、    每头母猪在一个发情期内要求至少输精两次，最好三次，两次输精时间间隔8小时左右；
１６、    认真登记母猪生产卡、配种记录