纤维形态实验方案.doc

测定纤维形态的实验方案（2011年4月4日）

一、纤维形态的测定
方法1（冯利群）：离析试样：采用1年、2年、3年生枝条的不同部位进行纤维形态分析。选取的试样制成火柴杆状，首先排气，然后用硝酸及氯酸钾混合液蒸煮离析，若为了进一步观察可制得永久切片标本。（采用硝酸法将试材解离，将解离的纤维稀释至0.1%的浓度，然后制片观察）
方法2（郭爱龙）：采用舒尔兹法，用番红染色，加少量甘油固定制成临时切片，在装有螺旋测微仪的显微镜下测量，共测定100根完整的木纤维，测定其长充，宽度和长宽比等。
方法3（王欣）：主要对纤维的长度、宽度、壁厚及胞腔直径进行测定。试样以煮沸法排除空气后，放入按比例配置的离析液中（30%双氧水与99.5%冰醋酸体积比为1:1）煮沸，直至木质膨大变白甚至透明即可取出。把离析的纤维用清水冲洗数次，直至无酸性，经番红染色后制成临时性试片，在OlmpusBX51光学显微镜下观察，每试样随机测定50根纤维，取其平均值。
方法4（李晓平）：纤维形态研究：将各样品做成火柴杆大小，在沸水中煮数小时，直至样品沉于水底。用体积比为1：1的双氧水（30%）和冰醋酸（分析纯）混合液在60℃的水中煮数小时，直至样品变白。将煮好的样品用水洗数遍，直到用pH试纸试之不呈酸性为止。将样品置于试管中，加适量的水后，剧烈震荡，直到样品都分离成单根纤维。用10g/L的番红溶液进行染色，制成临时载玻片[107-110]，利用Motic Images Plus 2.0图像处理系统测量纤维的尺寸，先在40倍显微镜下量取纤维的长度，后在400倍的显微镜下找到对应纤维，量取其宽度和细胞腔宽，每个样品取50根纤维进行测量；共对4株蓖麻秆进行了研究即每个部位共有4个样品，共需测量纤维200根。

方法5（聂玉静）：
2.2红麻芯杆纤维形态
2.2.1实验方法
实验设备和药剂：水浴锅，试管，培养皿，30%硝酸，氯酸钾，盖玻片，载玻片，光学显微镜（OLYMPUS BX-51）。
方法：将不同部位的红麻芯杆试样劈成火柴杆大小，长约1-2cm，放入试管中注入适量的水。将试管在水浴锅中加热蒸煮至试样下沉。将水倒出，再加入30%的硝酸，微热至发出黄色气体，再加入少许氯酸钾固体，与硝酸反应，在水浴锅中加热约10分钟左右，至红麻杆颜色变浅。倒出药液，用水反复冲洗数次至无酸为止。将离析好的浆液放入培养皿中，加入几点番红溶液进行染色。制成临时切片，在光学显微镜下观察红麻芯杆细胞形态并利用计算机显微图像分析系统对每个部位100根纤维的长度、宽度、壁厚等进行测量，求平均值。

方法6（吴芹）：《速生黑杨枝桠材纤维形态、化学组分及APMP制浆性能的研究》2010年6月（林产化学与工业）
1 材料及方法
1. 1 材料
速生黑杨枝桠材及相应主干材由山东省林科院提供，树龄7 a，规格为φ ( 10~20)mm×35mm, 包括ZY- a、ZY- b、ZY- c 3个品种。选取部分有代表性的原料试样，去皮，并适量切成体积为1 cm3 的小立方体，用于生物结构观察及壁腔比值的测定。选取部分有代表性的原料试样，去皮，将其沿纵向切成规格为1mm×2mm×30mm的小木条, 用于纤维质量性能分析。将原料去皮，然后进行手工削片，用Willey磨粉碎, 取粒径245~ 350μm 的木粉, 平衡水分, 用于化学组分分析。将原料切成规格为35mm×( 10~ 20) mm×3mm 的木片, 用于化学机械法( APMP)制浆实验。
1. 2 方法
1. 2. 1 生物结构观察及壁腔比值的测定[ 8 ] 试样经过排气、软化处理后横向切片、染色和制片, 用THM SE 600热台偏光显微镜对其生物结构进行观察。通过采用计算机测量软件及Excel工具的分析，测定纤维细胞的壁厚、腔径及壁腔比值。
1. 2.2 纤维形态的测定[ 8 ] 在60℃下, 试样经冰醋酸和过氧化氢(体积比1：1)浸泡约30~ 48 h， 以使试样变白、纤维分散。采用FQA 纤维质量分析仪(加拿大Optes,t 型号Ka jaan i FS- 100)测定试样纤维的长度、宽度、粗度及细小纤维含量。
1. 2. 3 化学组分的分析 1% NaOH 抽提物的测定参见GB /T 2677. 5 1993，聚戊糖的测定参见GB /T2677. 9- 1994，苯-乙醇抽提物测定参见GB /T 2677. 6 – 1994，酸不溶木质素测定参见GB /T 2677. 8-1994，纤维素的测定采用硝酸-乙醇纤维素的测定方法[ 8] , 灰分的测定参见GB /T 2677. 3- 1993。

问题：为什么王欣和李晓平测纤维形态的方法与冯老师的不同？是因为她们测的都是草本植物与木材测纤维形态的方法有所不同吗？
王欣老师的回答：用双氧水与冰醋酸混合液浸泡试件得到的纤维形态好，但时间较长。

确定最终的实验方案：
一、按照王欣老师和李晓平的实验方案需准备的试材和实验药品为：
1、30%双氧水与99.5%冰醋酸（分析纯）体积比为1:1
2、PH试纸
3、番红溶液（配成10g/L）进行染色：染色方法查一下论文。
4、载玻片、盖玻片：制作切片的方法查一下。
5、水浴锅
6、试管
7、培养皿
8、聂子（是否需要滤纸？）
9、光学显微镜及图像处理系统
10、试材：按年份、按部位（上、中、下、皮、芯），每个部位测200根、100根、50根？？
（试材部位的确定参照《木材PH值测定方法GB/T6043-2009》中的试材取样方法：关键的问题是：下部、中部、梢部的位置如何确定？根据《木材PH值测定方法GB/T6043-2009》中的试材取样方法：下部（树高1/5处），中部（全长1/3处），梢部直径大于10cm，下部、中部没问题，梢部如何确定其位置？）
最后定出最终的取样部位：首先看一下年轮，能否界定出年轮的差别，（如果有差别的话，需按生长年限的年轮不同，进行区分。）如果没差别的话，对枝条从上到下选取近7-8个部位，并将木质部、髓心（也可考虑髓心和木质部放在一起）、皮部分开，取样部位和样品要记录清楚。
芯部做成火柴杆大小，皮部就直接剥下来，长度做成火柴杆长，大约30mm就行。

附：《木材PH值测定方法GB/T6043-2009》中的试材取样方法：

二、按照冯利群老师和聂玉静的实验方案需准备的试材和实验药品为：
1、硝酸（30%）及氯酸钾
2、PH试纸
3、番红溶液进行染色
4、载玻片
5、水浴锅
6、试管
7、培养皿
8、聂子（是否需要滤纸？）
9、光学显微镜及图像处理系统
10、试材：按年份、按部位（上、中、下、皮、芯），每个部位测200根、100根、50根？？
试材部位的确定参照《木材PH值测定方法GB/T6043-2009》中的试材取样方法：