超高效液相色谱-四极杆_静电场轨道阱质谱快速测定保健食品中13种β-受体阻滞剂.pdf

年 月 技术与应用：收稿日期：通讯联系人：基金项目：河南省医学科技攻关计划联合共建项目（）：（）超高效液相色谱四极杆 静电场轨道阱质谱快速测定保健食品中 种 受体阻滞剂李彤辉，冯 峰，申一鸣，张 峰（中国检验检疫科学研究院食品安全研究所，北京；河南省食品和盐业检验技术研究院，国家市场监管重点实验室（食品安全快速检测与智慧监管技术），河南 郑州）摘要：建立了基于超高效液相色谱四极杆 静电场轨道阱质谱快速测定保健食品中 种 受体阻滞剂的分析方法，并对其质谱裂解规律进行了分析研究。实验对质谱条件、色谱条件、提取溶剂及基质效应等进行了详细探究，使用甲醇对样品进行稀释提取，高速离心、超声处理，用 柱（，）分离，以乙腈和 （）甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱，采用正离子模式检测，数据采集使用一级母离子全扫描和数据依赖的二级离子扫描（）模式，在 内实现了保健食品中 种 受体阻滞剂的分离和高精度一级、二级扫描，得到准确的质量数和准确碎片离子信息。通过方法学验证，种 受体阻滞剂在 内线性关系良好，相关系数（）均 ，检出限为 。空白加标样品中 种 受体阻滞剂的平均回收率为 ，相对标准偏差为 （）。用本方法对市售的 批次保健食品进行筛查，均未检出 种 受体阻滞剂。该方法检测速度快，准确性强，灵敏度高，可用于保健食品中 受体阻滞剂的快速测定。关键词：超高效液相色谱四极杆 静电场轨道阱质谱法；受体阻滞剂；保健食品中图分类号：文献标识码：，（，；，）：，（，）（），（），第 期李彤辉，等：超高效液相色谱四极杆 静电场轨道阱质谱快速测定保健食品中 种 受体阻滞剂 ，（），（），引用本文：李彤辉，冯峰，申一鸣，张峰 超高效液相色谱四极杆 静电场轨道阱质谱快速测定保健食品中 种 受体阻滞剂 色谱，（）：，（）：；当前，随着健康意识的增强，人们更倾向通过饮食来达到降血压的目的，许多声称具有降血压功能的保健食品也不断涌向市场。然而，为了追求利益，部分不法生产者会在一些保健食品中非法添加 受体阻滞剂类药物以吸引消费者而获利。不当食用含有 受体阻滞剂类药物的食品将会导致心肌耗氧量和血管阻力增加，氧自由基和心肌细胞凋亡，对人体带来严重的健康风险。因此，开发一种保健食品中 受体阻滞剂类药物的检测方法，并对市售的相关产品展开风险监测，以确保市场流通保健食品的质量安全成为当务之急。当前，对于 受体阻滞剂的检测，报道的方法主要有气相色谱质谱法（）、毛细管电泳法，、荧光光谱法、酶联免疫法、液相色谱串联质谱法（）、高效液相色谱法（），、解吸附电晕束离子源耦合离子阱质谱法（）等，这些方法覆盖的 受体阻滞剂范围较少，且在应用于食品样品检测时都面临着基质干扰无法有效消除的难题。近年来，高分辨质谱作为一种食品中非法添加物筛查的有效手段，已在食品检测中广泛使用，但目前还少有报道使用高分辨质谱进行保健食品中 受体阻滞剂检测的方法，难以满足实际检测的需要。本研究通过优化色谱及质谱条件，建立了一种超高效液相色谱四极杆 静电轨道阱高分辨质谱快速测定食品中 种 受体阻滞剂的分析方法，并成功应用于实际样品的测定，方法快速便捷，准确率高，为监管部门对保健食品中非法添加的分析检测提供了重要支撑。实验部分 仪器、试剂与材料 四极杆 静电场轨道阱质谱系统及 超高效液相色谱系统（美国 公司）；分析天平 （瑞士 公司）；超纯水机（美国 公司）。种 受 体 阻 滞 剂 标 准 物 质：阿 替 洛 尔（，号）、醋丁洛尔（，号）、普萘洛尔（，号）、纳 多 洛 尔（，号）、拉贝洛尔（，号）、比索洛尔（，号）、塞利洛尔（，号）、卡维地洛（，号）、阿 罗 洛 尔（，号）、艾司洛尔（，号）、美托洛尔（，号）、奈必洛尔（，号）、贝凡洛尔（，号），纯度均大于，均购自天津阿尔塔科技有限公司；甲醇、乙腈（级，德国 公司）；甲酸（级，赛默飞世尔科技有限公司）。批食品样品：年 月分别从电商及实体店铺购买，其中 批次为固态片剂食品，批次为色谱第 卷液态口服液类样品。实验条件 溶液配制 分别准确称取 移取 种 受体阻滞剂标准物质适量，用甲醇溶解并定容至 ，配制成质量浓度为 的标准储备液，避光保存。分别准确吸取 种标准储备液适量，用甲醇定容至 ，配制成质量浓度为 的混合标准溶液，避光保存。标准工作液：根据需要吸取适量混合标准溶液，用甲醇稀释成所需浓度，现配现用。样品制备 对于固态片剂样品，取适量混匀研磨后，精密称取 （精确至 ），置于 具塞离心管中，加入甲醇 ，涡旋 使其混合均匀，在 下通过超声波（，）提取 ，放冷至室温。提取后，混合物以 离心，收集上清液至 容量瓶中，用上述方法重复提取一次，合并 次提取液，定容至刻度，摇匀。过 有机滤膜后上机测定。对于液态样品，经充分混匀后准确吸取 置于 具塞离心管中，加甲醇 ，在 下超声（，）提取 ，放冷至室温。用甲醇定容，过 有机滤膜后上机测定。色谱条件 色谱柱：（，）；流动相：（）甲酸水溶液（）乙腈（）；流速 ，进样体积，柱温 。梯度洗脱程序：，；，；，；，。质谱条件 离子源：加热电喷雾离子源（），正离子模式；喷雾电压：；毛细管温度：；加热器温度：；鞘气：氮气，流速为 ；辅助气：氮气，流速为 ；扫描模式：一级母离子全扫描和数据依赖的二级子离子扫描（）模式。一级母离子全扫描分辨率：半峰宽（）；质谱扫描范围：；自动增益控制（）及最大注入时间（）分别为、。数据依赖二级子离子扫描分辨率：；触发阈值：；归一化碰撞能量设定为、。种 受体阻滞剂的质谱分析参数见表。结果与讨论 质谱条件的优化 本研究采用 高分辨质谱的 模式进行 种 受体阻滞剂的分析，这些化合物的一级离子及二级碎片离子信息见表。通过使用目标化合物的精确分子离子质量数，结合二级碎片离子谱的分析，能够实现在没有标准品的情况下，对样品中有无上述 种 受体阻滞剂类化合物进行快速筛查。使用超高效液相色谱四极杆 静电场轨道阱质谱对 种 受体阻滞剂的分子离子提取色谱图见图。流动相及提取溶剂的选择实验考察了 （）甲酸水溶液甲醇、（）甲酸水溶液乙腈、乙酸铵溶液乙腈、乙酸铵溶液（含 （）甲酸）乙腈等流动相体系在最优的分离条件下各化合物的峰形及分离情况，发现 （）甲酸水溶液乙腈作为流动相，梯度洗脱后 种化合物在 内能够得到较好的分离。参考已有相关文献报道，实验考察了以甲醇、乙腈、（）甲醇水溶液、（）乙酸甲醇、（）乙酸乙腈为提取溶剂时空白加标样品中 种 受体阻滞剂类的加标回收率，如图 所示。结果表明，甲醇作为提取溶剂时样品中 种 受体阻滞剂的回收率在 范围内，提取效果整体较优，故本实验选择甲醇为提取溶剂。基质效应考察 选择典型空白样品基质，制备质量浓度为 的空白基质加标溶液，上机测定，制备同样浓度的标准品溶液，通过二者响应强度的百分比来确定基质效应。结果表明，种 受体阻滞剂的基质效应在 范围内，空白基质对目标物定量影响较小。灵敏度、准确度和精密度 以质量浓度（）为横坐标，峰面积为纵坐标制作标准曲线，种 受体阻滞剂在 范围内呈良好的线性关系，相关系数（）均 。向空白样品中添加逐级稀释的标准品溶液，经前处理后，上机测定，确定有信号检出的最低含量为该目标物的检出限，为 ，详细结果见表。第 期李彤辉，等：超高效液相色谱四极杆 静电场轨道阱质谱快速测定保健食品中 种 受体阻滞剂表 种 受体阻滞剂的质谱参数 （），色谱第 卷图 种 受体阻滞剂的提取离子色谱图 图 不同提取溶剂对 种 受体阻滞剂回收率的影响 第 期李彤辉，等：超高效液相色谱四极杆 静电场轨道阱质谱快速测定保健食品中 种 受体阻滞剂表 种 受体阻滞剂的回归方程、相关系数、检出限和定量限 ，（），（）（）：；：，分别称取空白样品各 ，在低、中、高 个水平下分别添加 种 受体阻滞剂标准物质进行加标回收试验，每个水平进行 次平行分析，回收率结果见表。种 受体阻滞剂的平均回收率为 ，相对标准偏差（）为 （），其准确度和精密度能满足保健食品检测的要求，表明该分析方法准确、可靠，适合此类物质的定量分析。受体阻滞剂类化合物的质谱裂解规律 受体阻滞剂是一类以苯乙醇胺结构为母核、苯环连接碱性 轻胺（仲胺）的苯乙胺类药物。本实验选用的 受体阻滞剂为芳氧丙醇胺类化合物，含有以 为中心的碱性基团。由表 中各化合物的二级碎片离子可见，阿替洛尔、醋丁洛尔、普萘洛尔、比索洛尔、艾司洛尔和美托洛尔均产生了 和 的碎片离子，推断其裂解规律为这 种化合物在碳氧键处断裂失去其芳香结构，形成碎片离子（），再进一步脱水得到碎片离子（），以醋丁洛尔为例，其二级质谱裂解机理如图 所示。卡维地洛和贝凡洛尔因含有电负极性较强的间苯二醚结构极易从中间断裂，以卡维地洛为例，其二级质谱裂解机理如图 所示。塞利洛尔、纳多洛尔、拉贝洛尔、阿罗洛尔及萘必洛尔分子结构式中的特征官能团与其他目标物虽然各不相同，但其裂解规律相似。通过研究 受体阻滞剂的质谱裂解规律，找出表 种 受体阻滞剂的加标回收率及相对标准偏差（）（）（）其中的特征碎片离子，可以对未知的此类化合物实现非靶标筛查，这也有助于监管部门及时发现该类药物的结构类似物在保健食品中的非法添加。实际样品测定 利用本方法对随机抽取的 批次市售片剂、口服液类保健食品进行快速筛查检测，均未检出上述 种 受体阻滞剂。色谱第 卷图 醋丁洛尔二级质谱裂解机理 图 卡维地洛的二级质谱裂解机理 结论 采用超高效液相色谱四极杆 静电场轨道阱质谱技术，建立了食品中 种 受体阻滞剂的快速精准检测方法，与目前所报道的方法相比，本方法不仅灵敏度满足要求，同时抗干扰能力强，速度快，成本低，可应用于实际样品中非法添加 受体阻滞剂类药物的快速筛查，为监管部门提供了有效的技术支撑。参考文献：，（）：陈东洋，张昊，冯家力，等 色谱，（）：，（）：周亚兰，席彰，康靖，等 食品安全质量检测学报，（）：，（）：，（）：，（）：曹永春，冯燕娴 淮海医药，（）：，（）：范雯谡，张蕾，朱吉凯，等 职业与健康，（）：，（）：岳韩笑，雷雯，杜晓宁，等 质谱学报，（）：，（）：刘晓晶，张媛媛，刘彤彤，等 化学分析计量，（）：，（）：彭佳伟，徐蕾，李小晨，等 化工时刊，（）：，（）：王建军，郑国钧，王佳亮，等 分析化学，（）：，谭选平 硕士学位论文 重庆：西南大学，（）：蔡文金，应永飞，陆春波，等 中国兽药杂志，（）：，（）：胡胜杰，李优，周莹，等 色谱，（），（）：赵孔祥，柴铭骏，宋旭，等 食品安全质量检测学报，（）：，（）：刘新辉，史永晖，丁文慧，等 农产品质量与安全，（）：，第 期李彤辉，等：超高效液相色谱四极杆 静电场轨道阱质谱快速测定保健食品中 种 受体阻滞剂，（）：袁利杰，纵伟 食品安全质量检测学报，（）：，（）：曾曦，赵甜甜，刘春生，等 中国食品学报，（）：，（）：聂雪梅，董旭阳，许秀丽，等 色谱，（）：，（）：倪赞，张崇生，谢循策 药物分析杂志，（）：，（）：张旖，赵普贞，曲栗，等 食品科学，（）：，（）：王华，赵勇，廖鹏，等 高等学校化学学报，（）：，（）：刘斌，包懿，郎乐，等 食品安全质量检测学报，（）：，（）：徐红斌，张申平，杜茹云，等 色谱，（）：，（）：谭会洁，郭常川，邢晟，等 色谱，（）：