超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法同时测定肋柱花药材中5种活性成分含量.pdf

2023 年 9 月 5 日 第 32 卷第 17 期Vol.32，No.17，September 5，2023China Pharmaceuticals中图分类号：R932；R284.1；R286.0文献标志码：A文章编号：1006-4931（2023）17-0063-06doi:10.3969/j.issn.1006-4931.2023.17.015*基金项目：内蒙古自治区自然科学基金 2020MS08107。第一作者：兰婷，女，大学本科，主管药师，研究方向为临床药学与药物分析，（电子信箱）。通信作者：王巍嵩，男，硕士，副主任药师，研究方向为临床药学与药物分析，（电子信箱）。检验检测Inspection and Test超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法同时测定肋柱花药材中 5 种活性成分含量*兰婷1，朱贲贲2，陈圆2，杨鹏杰2，王巍嵩1（1.内蒙古医科大学附属医院，内蒙古 呼和浩特010050；2.北京大学肿瘤医院内蒙古医院 内蒙古医科大学附属肿瘤医院，内蒙古 呼和浩特010040）摘要：目的建立同时测定肋柱花药材中 5 种活性成分含量的超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法。方法色谱柱为 ThermoHypersil GOLD C18柱（100 mm 2.1 mm，1.9 m），流动相为甲醇-含 5 mmol/L 甲酸铵的 0.1%甲酸水溶液（梯度洗脱），流速为0.25 mL/min，柱温为 30，进样量为 5 L；离子源为电喷雾电离（ESI），电离模式为 ESI-（木犀草素、芒果苷）和 ESI+（异荭草苷、獐牙菜苦苷、当药黄素），多反应监测（MRM）模式，喷雾电压为 3 500 V（正离子模式）和 3 000 V（负离子模式），雾化温度为 300。采用SIMCA 14.1 软件进行主成分分析。结果木犀草素、异荭草苷、獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素的质量浓度分别在 0.404 112.931 2 mg/L、0.392 212.550 4 mg/L、0.283 89.081 6 mg/L、0.305 59.776 0 mg/L、0.356 711.414 4 mg/L 范围内与峰面积线性关系良好（R2 0.999 0）；检测限分别为 0.521 0，1.319 8，0.813 3，1.219 4，2.083 0 g/L，定量限分别为 1.510 9，3.931 2，2.709 6，4.024 1，6.736 5 g/L；精密度、稳定性、重复性试验结果的 RSD 均小于 3.5%（n=6）；加样回收率分别为 94.83%，92.30%，100.47%，95.13%，95.53%，RSD 分别为 1.49%，2.50%，0.92%，0.91%，1.48%（n=6）。12 批不同产地的药材样品中 5 种活性成分的总含量为39.8567.82 mg/g，獐牙菜苦苷的含量最多（33.8761.44 mg/g）。主成分分析结果显示，第一主成分、第二主成分的方差贡献率分别为 36.30%和 31.70%，筛选出的主要贡献成分为木犀草素（0.623 0）、獐牙菜苦苷（0.520 5）和芒果苷（0.753 3）。结论该方法操作简便、专属性强、结果准确、灵敏度高，可用于肋柱花药材中活性成分的定量分析，木犀草素、獐牙菜苦苷、芒果苷可作为肋柱花药材的质量控制标志物。关键词：超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法；肋柱花；活性成分；含量测定Content Determination of Five Active Components in Lomatogonii Rotati Herba by UPLC-QQQ-MS/MSLAN Ting1，ZHU Benben2，CHEN Yuan2，YANG Pengjie2，WANG Weisong1（1.Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University，Hohhot，Inner Mongolia，China010050；2.Peking University Cancer Hospital InnerMongolia HospitalAffiliated Cancer Hospital of Inner Mongolia Medical University，Hohhot，Inner Mongolia，China010040）AbstractAbstract：ObjectiveTo establish an ultra-high performance liquid chromatography triple-quadrupole-tandem mass spectrometry（UPLC-QQQ-MS/MS）method for the simultaneous determination of five active components in Lomatogonii Rotati Herba.MethodsThe chromatographic column was Thermo Hypersil GOLD C18column（100 mm 2.1 mm，1.9 m），the mobile phasewas methanol-0.1%formic acid aqueous solution containing 5 mmol/L ammonium formate（gradient elution），the flow rate was0.25 mL/min，the column temperature was 30，and the injection volume was 5 L.The ion source was electric spray ionization（ESI），the ionization mode was ESI-（luteolin，mangiferin）and ESI+（isoorientin，swertimarin and swertisin），the multi-reactionmonitoring（MRM）mode was adopted with spray voltages of 3 500 V（positive ion mode）and 3 000 V（negative ion mode），andthe atomization temperature was 300.SIMCA 14.1 software was used for principal component analysis（PCA）.ResultsThelinear ranges of luteolin，isoorientin，swertimarin，mangiferin and swertisin were 0.404 1-12.931 2 mg/L，0.392 2-12.550 4 mg/L，0.283 8-9.081 6 mg/L，0.305 5-9.776 0 mg/L，0.356 7-11.414 4 mg/L（R2 0.999 0），respectively.The limits ofdetection（LOD）were 0.521 0，1.319 8，0.813 3，1.219 4 and 2.083 0 g/L，respectively.The limits of quantitation（LOQ）were 1.510 9，3.931 2，2.709 6，4.024 1 and 6.736 5 g/L，respectively.The RSDs of precision，stability，and repeatability testresults were all lower than 3.5%（n=6）.The average recoveries of luteolin，isoorientin，swertimarin，mangiferin and swertisin were94.83%，92.30%，100.47%，95.13%，and 95.53%，with RSDs of 1.49%，2.50%，0.92%，0.91%，and 1.48%（n=6），respectively.Thetotal content of five active components in 12 batches of samples from different different producing areas was in the range of 39.85-67.82 mg/g，and the content of swertimarin was the highest（33.87-61.44 mg/g）.The PCA results showed that the variancecontribution rates of the first principal component and the second principal component were 36.30%and 31.70%，respectively.Themain contribution components screened were luteolin（0.623 0），swertimarin（0.520 5），and mangiferin（0.753 3）.ConclusionThe632023 年 9 月 5 日 第 32 卷第 17 期Vol.32，No.17，September 5，2023China Pharmaceuticals肋柱花为龙胆科肋柱花属植物肋柱花Lomatogoniumrotatum（L.）Fries ex Nym 的干燥全草，分布于我国东北、内蒙古、陕西、四川、新疆、甘肃、青海等地1-2。蒙药名为哈比日干地格达，亦称查干特木日地格达、扎格地格 嘎日布3。味苦，性寒，效钝、糙、轻、燥，具有平息协日、清热、愈伤、健胃等功效，主治协日热、肝胆热、瘟疫、伤寒、黄疸、消化不良、中暑头痛、伤热等症，是蒙医用于治疗肝胆疾病的传统药物4。肋柱花药材主要含有獐牙菜苦苷、木犀草素、异荭草苷、当药黄素、芒果苷等活性成分，具有清肝利胆、抗菌消炎、解热镇痛等药理活性5-9。其现行标准收载于 中华人民共和国卫生部药品标准 蒙药分册，但未测定其中活性成分的含量。目前，多采用高效液相色谱（HPLC）法对肋柱花药材中少数活性成分进行定量分析10-13，难以反映药材的整体质量。超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱（UPLC-QQQ-MS/MS）法不仅能提供充足的化合物结构信息，且特有的多反应监测（MRM）模式具有较高的选择性、专属性和灵敏度，在色谱峰不需要完全达到基线分离的情况下即可实现多种含量差异较大化合物的同时定量分析14-15。本研究中采用 UPLC-QQQ-MS/MS 法同时测定肋柱花药材中木犀草素、异荭草苷、獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素的含量，并结合主成分分析（PCA），以高效、准确、全面地对蒙药材肋柱花进行质量分析和控制，为其进一步开发利用奠定药效物质基础。现报道如下。1仪器与试药1.1仪器Thermo U3000 型超高效液相色谱仪，Thermo TSQULTRA EMR型三重四极杆质谱仪，均购自美国Thermo公司；CPA225D 型分析天平（精度为十万分之一），BSA423S-CW型分析天平（精度为万分之一），均购自德国Sartorius公司；KQ2200DE型台式超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率为500 W，频率为40 kHz）。1.2试药木犀草素对照品（C1，批号为111520-202107，纯度为 96.3%），异荭草苷对照品（C2，批号为 111974-201401，纯度为94.0%），獐牙菜苦苷对照品（C3，批号为110785-201404，纯度为98.3%），芒果苷对照品（C4，批号为111607-201704，纯度为 98.1%），均购自中国食品药品检定研究院；当药黄素对照品（C5，上海融禾医药科技发展公司，批号为210710，纯度为98.0%）；甲醇（美国 Fisher Scientific公司，色谱纯、分析纯）；超纯水（美国Millipore公司）；其余试剂均为分析纯；肋柱花药材信息见表1，每个产地分别收集3批，经内蒙古锡林郭勒盟蒙医医院敖德毕力格主任药师鉴定均为正品。表1肋柱花药材信息Tab.1Information of Lomatogonii Rotati Herba samples序号1234收集地点内蒙古克什克腾旗内蒙古锡林郭勒盟东乌旗青海省门源回族自治县甘肃省定西市彰县收集时间2021年8月2021年8月2021年9月2021年9月批号NK01，NK02，NK03NX01，NX02，NX03QM01，QM02，QM03GD01，GD02，GD032方法与结果2.1试验条件2.1.1色谱条件色谱柱：Thermo Hypersil GOLD C18柱（100 mm 2.1 mm，1.9 m）；流动相：甲醇（A）-含 5 mmol/L甲酸铵的 0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脱（02 min 时5%A，25 min 时 5%A 95%A，510 min 时 95%A，1010.1 min 时 95%A 5%A，10.112 min 时5%A）；流速：0.25 mL/min；柱温：30；进样量：5 L。2.1.2质谱条件扫描模式：MRM；离子源：电喷雾电离（ESI）；电离模式：ESI-（木犀草素、芒果苷），ESI+（异荭草苷、獐牙菜苦苷、当药黄素）；喷雾电压：3 500 V（正离子模式）、3 000 V（负离子模式）；雾化温度：300；吹扫气压力：40 psi；辅助气压力：10 psi；毛细管温度：350。其他质谱条件见表2。表2肋柱花药材中5种活性成分的质谱条件Tab.2MS parameters of five active components in LomatogoniiRotati Herba成分木犀草素异荭草苷獐牙菜苦苷芒果苷当药黄素保留时间（min）6.149.437.459.457.66定量离子对质荷比扫描范围285.01 133.10 M-H-449.48 431.11 M-H+392.14 192.53 M+NH4+421.41 300.69 M-H-477.22 267.18 M+H+碰撞能量（eV）3240283529透镜补偿电压（V）1001101001001102.2溶液制备取肋柱花药材（批号为 NK01）适量，粉碎，过 4 号筛，取粉末0.2 g（精确至0.000 1 g），加甲醇25 mL（精确至0.01 mL），密塞，称定质量，超声处理 30 min，冷却至室温，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，经0.22 m滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取干燥至恒定质量的木犀草素、异荭草苷、獐牙菜苦检验检测Inspection and Testmethod is simple，specific，accurate and sensitive，which can be used for the quantitative analysis of the active components inLomatogonii Rotati Herba.Luteolin，swertimarin，and mangiferin can be used as quality control markers of Lomatogonii Rotati Herba.Key wordsKey words：UPLC-QQQ-MS/MS：Lomatogonii Rotati Herba；active components；content determination642023 年 9 月 5 日 第 32 卷第 17 期Vol.32，No.17，September 5，2023China Pharmaceuticals苷、芒果苷、当药黄素对照品各适量，精密称定，分别加甲醇制备成质量浓度分别为12.9，12.6，9.1，9.8，11.4 mg/L的单一对照品贮备液，用于优化质谱条件。其他梯度浓度的对照品溶液由甲醇稀释单一对照品贮备液获得。2.3方法学考察专属性试验：取 2.2项下供试品溶液适量，按 2.1项下试验条件进样测定，木犀草素、异荭草苷、獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素均能有效分离，色谱峰峰形对称，表明方法专属性强。详见图1。线性关系考察：取2.2项下各单一对照品贮备液适量，用甲醇逐级稀释成系列混合对照品溶液，按2.1项下试验条件进样测定，以峰面积（Y）为纵坐标、待测化合物质量浓度（X，mg/L）为横坐标进行线性回归。结果见表3。检测限与定量限确定：取线性关系考察项下混合对照品溶液适量，按2.1项下试验条件进样测定，以信噪比（S/N）为3时的质量浓度为检测限，以S/N为10时的质量浓度为定量限。结果见表3。精密度试验：取线性范围低、中、高质量浓度混合对照品溶液，按2.1项下试验条件1 d内连续进样测定6次及连续测定6 d，根据回归方程计算质量浓度，并记录峰面积和保留时间。结果见表3，表明仪器精密度良好。稳定性试验：取药材（批号为 NK01）粉末适量，按2.2项下方法制备供试品溶液，分别于室温下放置0，2，4，8，16，24 h时按2.1项下试验条件进样测定，根据回归方程计算质量浓度。结果木犀草素、异荭草苷、獐牙菜 苦 苷、芒 果 苷、当 药 黄 素 峰 面 积 的 RSD 分 别 为1.83%，0.92%，1.15%，1.86%，1.58%（n=6），表明供1.木犀草素2.异荭草苷3.獐牙菜苦苷4.芒果苷5.当药黄素A.总离子流图B1-B5.二级质谱图图1超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱图1.Luteolin2.Isoorientin3.Swertimarin4.Mangiferin5.SwertisinA.TIC chromatogramsB1-B5.Second order mass spectrumFig.1UPLC-QQQ-MS/MS spectrumAB1相对丰度1008060402000510t/min16.143.1311.602345678910B2B3B4B5相对丰度100806040200151015t/min4.668.2129.43相对丰度100806040200051015t/min2.4057.66相对丰度100806040200051015t/min1.846.2537.45相对丰度100806040200151015t/min2.278.4349.454.369.24 11.294.7012.31表3线性关系考察、检测限与定量限确定、精密度试验结果Tab.3Results of the linear relation test，LOD，LOQ and the precision test成分木犀草素异荭草苷獐牙菜苦苷芒果苷当药黄素回归方程Y=389 654 X-1 389Y=351 920 X-1 505Y=1 352 854 X-2 967Y=253 093 X-7 088Y=609 540 X+4 594R20.999 00.999 10.999 50.999 20.999 4线性范围（mg/L）0.404 112.931 20.392 212.550 40.283 89.081 60.305 59.776 00.356 711.414 4检测限（g/L）0.521 01.319 80.813 31.219 42.083 0定量限（g/L）1.510 93.931 22.709 64.024 16.736 5日内精密度试验的RSD（%，n=6）峰面积2.051.832.651.992.37保留时间0.230.200.300.510.42日间精密度试验的RSD（%，n=6）峰面积2.131.693.152.673.46保留时间0.290.220.330.560.601.992.703.483.734.474.655.025.575.946.146.486.787.668.148.359.079.229.439.459.6710.7910.137.4510080604020相对丰度t/min检验检测Inspection and Test652023 年 9 月 5 日 第 32 卷第 17 期Vol.32，No.17，September 5，2023China Pharmaceuticals试品溶液室温下放置24 h内稳定性良好。重复性试验：取药材（批号为NK01）粉末0.2 g，精密称定，共6份，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下试验条件进样测定，记录峰面积，并计算含量。结果木犀草素、异荭草苷、獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素含 量 的 RSD 分 别 为 1.62%，2.00%，0.89%，1.96%，1.02%（n=6），表明方法重复性良好。加样回收试验：分别取6份已知含量的药材（批号为NK01）粉末0.1 g，精密称定，等量精密加入混合对照品溶液，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下试验条件进样测定，记录峰面积，并计算回收率。结果均符合AOAC Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals 对供试品中回收率限度的要求。详见表4。表4加样回收试验结果（n=6）Tab.4Results of the recovery test（n=6）成分木犀草素异荭草苷獐牙菜苦苷芒果苷当药黄素样品含量（g）64.5164.7065.8664.6465.4164.3872.5872.7974.0972.7273.5872.434 954.324 969.065 057.544 964.155 023.134 944.49102.82103.12104.96103.02104.24102.61393.12394.29401.31393.90398.58392.34加入量（g）70.2270.2270.2270.2270.2270.2278.6478.6478.6478.6478.6478.645 030.535 030.535 030.535 030.535 030.535 030.53110.38110.38110.38110.38110.38110.38360.39360.39360.39360.39360.39360.39测得量（g）132.36130.18131.68130.57132.26131.97143.89145.01146.08148.54144.37145.7910 050.1510 029.3310 047.3710 032.9210 029.1510 048.00209.36208.03208.51207.98209.50207.44738.49742.21739.06740.96736.68741.85回收率（%）96.6293.2593.7393.8995.2096.2590.6891.8491.5496.4190.0293.29101.30100.5999.19100.7699.51101.4596.5295.0493.8195.0995.3694.9795.8396.5493.7296.3093.8296.98X（%）94.8392.30100.4795.1395.53RSD（%）1.492.500.920.911.482.4样品含量测定分别取12批不同产地药材样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下试验条件进样测定，记录峰面积，带入回归方程计算含量。结果见表5。表5肋柱花药材样品中5种活性成分含量测定结果（mg/g）Tab.5Results of the content determination of five active components in Lomatogonii Rotati Herba（mg/g）批号NK01NK02NK03NX01NX02NX03QM01QM02QM03GD01GD02GD03木犀草素0.640.590.810.710.980.880.610.540.660.540.770.52异荭草苷0.720.540.650.770.540.890.610.950.710.790.910.84獐牙菜苦苷49.1548.6446.8854.0850.2361.4436.4940.1233.8745.2140.1936.84芒果苷1.021.310.960.980.870.750.880.810.660.960.720.88当药黄素3.902.434.774.625.113.864.782.143.955.334.553.90合计55.4352.5154.0761.1657.7367.8243.3744.5639.8552.8347.1442.982.5PCA以12批药材样品中5种活性成分的含量为变量，导入SIMCA 14.1软件进行PCA，前2个主成分累积方差贡献率为68%，其中第一主成分（PC1）的方差贡献率为 36.30%，第 二 主 成 分（PC2）的 方 差 贡 献 率 为31.70%。木犀草素、当药黄素均在 PC1 方向上呈正相关，在PC2方向上呈负相关；獐牙菜苦苷、芒果苷在PC1和PC2 2个方向上均呈正相关；异荭草苷在PC1和PC22个方向上均呈负相关。PC1的最大贡献成分为木犀草素（0.623 0）和獐牙菜苦苷（0.520 5），PC2的最大贡献成分为芒果苷（0.753 3）。详见表6和图 2。表6肋柱花药材样品中5种活性成分对主成分的贡献值Tab.6The contribution values of five active components to theprincipal components in Lomatogonii Rotati Herba成分木犀草素异荭草苷獐牙菜苦苷芒果苷当药黄素PC10.623 0-0.389 10.520 50.128 80.415 8PC2-0.307 2-0.471 20.091 30.753 3-0.328 43讨论3.1色谱与质谱条件选择超声提取法广泛应用于天然药物的定量分析，较回流提取法具有方便、快速、消耗溶剂少的优点。预试验中采用甲醇超声提取法提取肋柱花，超声处理30 min、料液比为1 125（g mL）时提取效率最高。检验检测Inspection and Test662023 年 9 月 5 日 第 32 卷第 17 期Vol.32，No.17，September 5，2023China Pharmaceuticals流动相系统考察了甲醇-水和乙腈-水对各活性成分含量的影响，结果显示无差异。考虑甲醇价格低、毒性小，故流动相选择甲醇-水。在甲醇-水中添加0.1%甲酸可明显抑制拖尾现象，改善色谱峰峰形，且具有较高的离子化效率，便于质谱定量。加入5 mmol/L甲酸铵后环烯醚萜类成分獐牙菜苦苷即形成稳定的M-NH4+准分子离子峰，故最终确定流动相为甲醇-含5 mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸水溶液。5种活性成分的对照品溶液采用外接蠕动泵直接进样的方法，以子离子响应最强时的参数来优化待测离子对的扫描模式、碰撞能量及最优质谱条件。其中，异荭草苷、獐牙菜苦苷、当药黄素在正离子模式下更稳定、响应值更高；木犀草素、芒果苷在负离子模式下易失去1个质子，生成稳定的 M-H-的准分子离子峰。故采用MRM模式下正负离子切换扫描模式同时对5种活性成分进行定量分析。3.2样品含量测定结果分析由表5可知，肋柱花药材样品中5种活性成分的总含量为 39.8567.82 mg/g，不同产地肋柱花药材的含量差异明显，其中以8月收集于内蒙古锡林郭勒盟东乌旗的总含量最高；环烯醚萜类化合物獐牙菜苦苷含量最多（33.8761.44mg/g），其次为当药黄素（2.145.33mg/g），黄酮类成分芒果苷、木犀草素、异荭草苷在各个产地的药材样品中均含量较低，表明活性成分含量与原药材的产地及生长状态相关。PCA结果显示，PC1和PC2的方差累积贡献率大于50%，且5种活性成分在2个主成分方向上呈不同的相关性。筛选出的木犀草素、獐牙菜苦苷、芒果苷可作为肋柱花药材的质量控制标志物。3.3方法评价本研究中建立的UPLC-QQQ-MS/MS法操作简便、专属性强、结果准确、灵敏度高，可同时定量分析肋柱花药材中环烯醚萜类、黄酮类、酮类化合物，作为蒙药材肋柱花质量控制、药理活性、药代动力学等相关研究的参考依据，且对其进一步开发利用、推动民族医药事业的高质量发展有重要意义。参考文献1赵一之.内蒙古肋柱花属植物分类及其地理分布研究 J.植物研究，2004，24（1）：7-8.2李玉林，丁晨旭，王洪伦，等.辐状肋柱花的苷类成分 J.西北植物学报，2006，26（1）：197-200.3内蒙古自治区卫生厅 内蒙古蒙药材标准 M 赤峰：内蒙古科学技术出版社，1987：162-1634杨维霞，周乐，耿会玲，等 龙胆科药用植物化学成分的研究现状 J 西北植物学报，2003，23（12）：2235-22405罗成，李艳，龙建纲，等.异荭草素的药理作用 J.航天医学与医学工程，2016，29（5）：381-384.6王美丽，田香，白玉霞.RP-HPLC 法同时测定蒙药蓝盆花中木犀草素和芹菜素的含量 J.中国药房，2016，27（18）：2540-2542.t 2t 13210-1-2-3-4-5-4-3-2-101234Ap 2p 10.60.40.20-0.2-0.4-0.6-6-4-200.20.40.6Bp（corr）1.t（o）110.50-0.5-1.0-1.5p（corr）2.t（o）2-1.5-1.0-0.500.51.0CA.得分散点图B.载荷散点图C.双标散点图图2肋柱花药材样品中5种活性成分的主成分分析结果A.Scores plotB.Loading plotC.BiplotFig.2PCA results of five active components in LomatogoniiRotati Herba检验检测Inspection and Test672023 年 9 月 5 日 第 32 卷第 17 期Vol.32，No.17，September 5，2023China Pharmaceuticals7孙晨瑜，谢国勇，秦民坚.芒果苷在植物界的分布及药理活性研究进展 J.中国野生植物资源，2017，36（4）：39-45.8任晓光，李东伟，何彩梅，等.芒果苷药理活性研究进展 J.中成药，2011，33（5）：860-863.9李宏亮，白敏，宋秋艳，等.天然活性成分獐芽菜苦苷的研究进展 J.云南中医学院学报，2011，34（4）：66-70.10张召华，曾擎屹，林鹏程，等.RP-HPLC 法同时测定藏药肋柱花中三种成分的含量 J.湖北农业科学，2015，54（3）：687-689.11包同力嘎.HPLC 法测定不同产地肋柱花中獐芽菜苦苷的含量 J.辽宁中医杂志，2013，40（12）：2558-2559.12王秀梅，巴根那，白明纲.HPLC 法测定肋柱花中木犀草素的含量 J.中国民族医药杂志，2009，15（1）：38-39.13王振旺，龙平，张春红，等.HPLC 测定肋柱花中獐牙菜苦苷和当药黄素的含量 J .中国实验方剂学杂志，2013，19（10）：106-108.14李晨，姜子涛，李荣.高效液相色谱-串联质谱联用技术鉴定樱桃叶中的黄酮成分 J.食品科学，2013，34（16）：226-230.15段超慧，李洋，杨桂娥，等.基于 UPLC-MS/MS 技术同时测定蒙药材叉分蓼中多种活性成分 J.中药材，2018，41（10）：2381-2385.（收稿日期：2022-07-16；修回日期：2023-04-06）中图分类号：R932；R284.1；R286.0文献标志码：A文章编号：1006-4931（2023）17-0068-03doi:10.3969/j.issn.1006-4931.2023.17.016高效液相色谱法测定玳玳花中柚皮苷和新橙皮苷含量王启砚，刘冬梅，宋军（湖北省荆门市食品药品质量检验所，湖北 荆门448000）摘要：目的建立测定玳玳花中柚皮苷和新橙皮苷含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为 Akasil C18柱（250 mm 4.6 mm，5 m），流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液（2080，V/V），流速为 1.0 mL/min，检测波长为 283 nm，柱温为 30，进样量为 10 L。结果柚皮苷和新橙皮苷进样量分别在 0.110 41.766 4 g、0.118 11.890 0 g 范围内与峰面积积分值线性关系良好（r=1.000 0，n=5）；平均加样回收率分别为 97.85%和 98.43%，RSD 分别为 2.95%和 2.22%（n=6）。13 批样品中柚皮苷和新橙皮苷含量分别为2.85%4.18%和 8.05%9.36%（n=3）。结论所建立的方法操作简便、结果准确，可用于玳玳花的质量控制。关键词：高效液相色谱法；玳玳花；柚皮苷；新橙皮苷；含量测定Content Determination of Naringin and Neohesperidin in Citri Aurantii Flos by HPLCWANG Qiyan，LIU Dongmei，SONG Jun（Jingmen Institute for Food and Drug Control，Jingmen，Hubei，China448000）AbstractAbstract：ObjectiveTo establish a high-performance liquid chromatographic method for the content determination of naringin andneohesperidin in Citri Aurantii Flos.MethodsThe chromatographic column was Akasil C18column（250 mm 4.6 mm，5 m），themobile phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution（20 80，V/V），the flow rate was 1.0 mL/min，the detectionwavelength was 283 nm，the column temperature was 30，and the injection volume was 10 L.ResultsThe linear range ofnaringenin and neohesperidin were 0.110 4-1.766 4 g and 0.118 1-1.890 0 g（r=1.000 0，n=5），respectively.The averagerecoveries of naringenin and neohesperidin were 97.85%and 98.43%with RSDs of 2.95%and 2.22%（n=6），respectively.Thecontents of naringin and neohesperidin in the 13 batches of samples were in the ranges of 2.85%-4.18%and 8.05%-9.36%（n=3），respectively.ConclusionThe established method is simple，reliable and accurate，which can be use