重组乙型肝炎疫苗.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,重组乙型肝炎疫苗,动物细胞工程制药,制作者：黄玉玲,背景,乙型肝炎是由病毒引起的，约占所有病毒性肝炎的,40,，它可以急性发病，也可以形成慢性肝炎，并进而引发肝硬化，肝癌，而其中很大一部分人可以是健康的病毒携带者，不出现症状，但表面抗原（,HbsAg,）阳性，或者同,e,抗原（,HbeAg,）阳性，常常是重要的传染源。在我国，人口众多，而这样的慢性病毒携带者约有一亿人，是对公共卫生的一个重要威胁。,乙肝病毒属,DNA,病毒科，有三种外壳的基因编码。乙肝病毒具有五种抗原抗体系统：即表面抗原抗体,(HBsAg,与抗,-HBs),、,e,抗原抗体,(HBeAg,与抗,-HBe),、核心抗原抗体,(HBcAg,与抗,-HBc),、,x,抗原抗体,(HBxAg,与抗,-HBx),和,HBv-DNA,。有临床意义的主要有,HBsAg,与抗,-HBs,、,HBeAg,与抗,-HBe,和抗,-HBc,，简称,“,两对半,”,。,临床主要表现为食欲减退、恶心、厌油、乏力、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等。,简介,重组乙型肝炎疫苗是由重组酵母或重组,CHO,工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原，经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。前者为重组酵母乙型肝炎疫苗，后者为重组,CHO,乙型肝炎疫苗。其性状为白色混悬液，静置形成可摇散的沉淀。,疫苗用法,(2),注射部位为上臂三角肌肌内。,(1),本疫苗注射时要充分摇匀。,(3),新生儿第,1,针在出生后,24,小时内注射，,1,个月及,6,个月后注射第,2,、,3,针,;,其他人群免疫程序为第,0,、,1,、,6,个月，剂量均为,5ug/,支,。,疫苗制备,取国家批准的重组酵母乙型肝炎疫苗的原始菌种，经一代扩增，制成生产菌种，逐级扩增后接种于发酵罐，在适宜温度和时间内进行三级发酵，收集细胞，经破碎，吸附粗提，疏水色谱法精提乙型肝炎表面抗原，再经硫氰酸盐处理，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加入硫柳汞作为防腐剂。,取国家批准的重组,CHO,乙型肝炎疫苗的细胞株，用静置培养或旋转法培养细胞，当乙型肝炎表面抗原的分泌量达到每,1.0mg/L,时，收获培养液，经硫酸铵盐析，,2,3,次密度梯度离心和色谱法纯化后，再经浓缩，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加硫柳汞作为防腐剂，分装制成。,鉴别与检查,【,鉴别,】,取本品，照,中国生物制品规程,酶联免疫吸附法，与已知乙型肝炎表面抗体确证其为乙型肝炎表面抗原。,【,检查,】,照,中国生物制品规程,规定的方法检查如下项目。,纯度 不得低于,98%,。,氢氧化铝 每,1ml,不得过,1mg,。,硫柳汞 不得过,0.01%,。,甲醛 不得过,0.01%,。,异常毒性 取本品，依法检查，应符合规定。,热原 取本品，依法检查，应符合规定。,无菌 取本品，用直接接种法检查，应符合规定。,【,效价测定,】,取本品，照,中国生物制品规程,测定，应符合规定。,酵母乙型肝炎疫苗的,ED50,不得过,1.5g,。体外相对效力试验抗原含量与参比苗的抗原比值不低于,0.5,。,CHO,乙型肝炎疫苗的,ED50,与参比苗的,ED50,比值不低于,1.0,。,【,类别,】,亚单位疫苗。,【,规格,】,酵母乙型肝炎疫苗,0.5ml:5g,CHO,乙型肝炎疫苗,1ml:10g,【,贮藏与效期,】,在,2,8,的暗处保存。有效期,2,年。,重组乙型肝炎疫苗的种类及生产现状,血源,乙肝疫苗,经过十年上亿人份人群接种，证明具有良好的安全性的免疫原性，但存在对生产者和献血者健康有潜在危险性，生产成本高等缺陷，我国已经完成同重组乙肝疫苗对血源疫苗的替代工作。,目前重组乙肝疫苗主要分为酵母，（酿酒酵母和甲基营养型酵母）以及中国仓鼠卵巢细胞（,Chinese Hamster Ovary cell,CHO,）表达疫苗。,（一）酿酒酵母,1982,年,Valenzuela,首先在酿酒酵母中成功表达乙型肝炎病毒表面抗原（,HBsAg,），,1986,年,9,月美国默克公司的重级酵母乙肝疫苗首次取得专利并得到美国,FDA,的批准。,1989,年,7,月比利时史克比成公司的另一重组酵母乙肝炎疫苗也取得专利。目前重组酵母乙肝疫苗的生产厂家除默克公司史克公司外，我国北京天坛生物，深圳康泰公司也大量生产该种疫苗。其优点为：酵母为低等真核微生物，易于在营养成份简单的培养基中高密中发酵培养，利用工业化生产，表达量高，目前世界上大规模生产和上市的疫苗大多数由该表达系统制备而成。,（二）甲基营养型酵母,共有,4,种表达系统。甲基营养型酵母生产,HbsAg,具有培养基廉价，目的基因与酵母染色整合的优点，不仅可克服质粒丢失，还可提高表达量。汉逊酵母（,Hansenula Polymorpha,，,H.P.,）和毕赤酵母（,Pichia Pastoris,，,P.P.,）系统已应用于工业化生产。已上市的酿酒酵母和甲基营养型酵母表达乙肝疫苗为含,HbsAg,成份的疫苗。,（三）,CHO,疫苗,本疫苗系用基因工程技术将乙型肝炎表面抗原基因片段重组到中国仓鼠卵巢细胞,(CHO),内，通过对细胞培养增殖，增殖分泌乙肝表面抗原,(HBsAg),于培养液中，经纯化加佐剂氢氧化铝后制成。疫苗外观有轻微乳白色沉淀。,国产酵母乙肝疫苗的效果,研究证明：国产血源乙肝疫苗的保护效果至少维持,9-10,年，国产重组乙肝疫苗（主要为酵母疫苗）的免疫效果和免疫持久性如何，是人们关心的重点。因为乙肝病毒缺乏易感动物模型，乙肝疫苗的免疫效果考核只能应用人体考核来评价，既往研究证明应用乙肝苗阻断,HbsAg,、,HbeAg,双阳性母亲的新一儿传播,HBV,是评价乙肝疫苗的效力的最直接指标，且,1-10,岁儿童对乙肝疫苗反应较好。我们选择新生儿和儿童作为疫苗考核对象，进行国产酵母乙肝疫苗的免疫效果和持久性研究。阶段结果报告如下：,免疫效果,新生儿,（,1,）母婴传播阻断保护率：应用,6,批国产量,5 g,酵母疫苗对,163,例,HbsAg,，,HbeAg,双阳性母亲的新生儿进行母婴传播阻碍断效果考核，结果保护率在,81.48-92.07%,之间，远高于文献报道的,10 g,（,59.2%,）和,20 g,（,74.3%,）血源乙肝疫苗,与,30 g,血源乙肝疫苗的保护率,(85.1%),相当,而进口,5 g M,苗,(46,例,)10 gA,苗,(58,例,),和10 g S,酵母疫苗,(30,例,),的保护率分别为,90.33%,、,86.59%,和,92.58%,。表明国产酵母疫苗免疫效果达到国外同类产品和,30 g,国产血源乙肝疫苗的保护水平。,2,）抗体,GMT,：未发现第一针免后,3,、,9,、,12,月时，,HbsAg,、,HbeAg,双阳性孕妇所生新生儿的抗体,GMT,与,HbsAg,单阳性及健康孕妇所生新生儿抗体,GMT,有显著差异,。,小学生：,（,1,）抗体阳性率：第一针免后,1,年时，进口酶母疫苗，国产酵母疫苗和国产,CHO,疫苗抗体阳性率在第一针免疫后,3,、,9,、,12,月均无显著差异。,（,2,）抗体,CMT,比较：第一针免后一年时，进口酶母疫苗（,10 g,）和国产,CHO,疫苗（,10 g,）抗体,GMT,峰值较高，国产酵母疫苗（,5 g,）较低。,免疫持久性,对应用,0,、,1,、,6,月程序免疫的小学生进行了随访观察。随访年及,3,年时，,2,批国产酵母疫苗具有保护性抗体（,10mIU/ml,）的阳转率分别为,81.48%,；,68.66%,和,92.11%,；,74.14%,，而进口,A,和,M,疫苗分别为,90.38%,；,69.56%,和,93.10%,；,78.05%,。,2,批国产酵母疫苗抗体,GMT,分别为,123.99,；,146.10,和,92.11,；,83.52,，,A,和,M,疫苗分别为,120.56,；,67.07,和,145.75,；,74.62,。,对应用,0,、,1,、,2,月程序免疫的,400,名小学生进行了免后,4,年的随访观察，结果,3,批国产酵产疫苗阳性率分别为,87.50%,；,77.33%,；,79.49%,，而对照,M,（,5 g,）疫苗为,91.89,抗体,GMT,分别为：,65.57,；,71.40,；,59.20,和,74.84,。由抗体峰值,6,月至,4,年时，,3,批国产疫苗抗体阴转率分别为,7.2,；,5.26,和,13.79%,，对照,M,苗为,5.17%,。无论抗体阳性一率，抗体,GMT,以及,4,年抗体阴转率，,3,批国产疫苗和M,苗间增无显著差异。,我们最近随该结果表明，,2,批国产酵母乙肝疫苗免后,5,年时抗体阳性率已降至,70%,以下，而同期血源乙肝抗体阳性率在,81-69%,之间。,结果表明：国产酵母重组乙肝疫苗的近期免疫效果达到了进口酵疫苗的免疫水平，但抗体阳性率和抗体,GMT,下降较快，考虑当前乙肝疫苗供应充足，酵母疫苗的加强接种应提到议事日程。,乙肝疫苗的发展,（一）联合疫苗：,联合疫苗具有减少注射针次、接种副反应及提高接种覆盖率的优点。已上市的联合疫苗如,SB,公司的百白破,-,乙肝四联疫苗、甲,-,乙肝联合疫苗，,MSD,公司的流感嗜血杆菌乙型肝炎偶联疫苗等。我国全细胞百白破,-,乙肝四联疫苗和无细胞百白破,-,乙肝四联疫苗已完成临床前研究，甲,-,乙肝联合疫苗的开发研究制也在进行。,（二）治疗性疫苗,1,）现有疫苗增加前,S,基因或替换现有铝佐剂,研究开发植物来源、细胞因子、人工合成和可生物降解的高分子聚合物等佐剂，目的在于提高细胞免疫效果，国外已有制品进行临床研究。,2,）,DNA,疫苗：可以肌肉细胞内表达乙肝表面抗菌原，诱导细胞免疫应答，同时具有长期表达抗原，可减少加强免疫及成本低，储存方便的特点。,3,）增大剂量酵母疫苗（,10 g/,支）的生产：,我国现阶段生产和使用的酵母乙肝疫苗均为,5 g/,支，由于以下原因：、实际应用反映,5 g,酵母疫苗的抗体阳性率和滴度较低。、我们对接种,5 g,疫苗的,120,例成人进行检测，发现免后抗体阳性率和滴度较低，第二针免后,1,个月时抗体阳性率为,70.00%,，抗体,GMT,为,9.83,；完成全程免疫后,1,个月时抗体阳性率为,80.77%,，抗体,GMT,为,151.46,。、,MSD,疫苗成人剂量为,10 g/,支。目前国内正进行,10 g,疫苗的临床考核。此外还应结合临床（血透析，肾脏移植等）和实际需要，生产不同剂量的乙肝疫苗。,（,三）对现有疫苗生产线的生产能力进一步开发，以及研制高表达量的新一代重组乙肝疫苗，以降低成本，提高疫苗的覆盖率。,（四）加强疫苗保护机制和免疫持久性的研究。,后记,重组乙型肝炎疫苗的制造，显然给众多患者带来了很大的福利。但总的来说，目前利用动物细胞的生产水平、生产成本、产品质量等方面，还存在不少缺陷，还有大量的工作要做。如何制备更安全，更有效的疫苗，如何减少疫苗存在的风险以及如何减少其抑制作用，如何利用有限的资源创造出更大的价值，都将需要我们进行更进一步的探索与研究。,