cTfh细胞对乙型肝炎疫苗长期免疫的调控作用.pdf

58http:/ E-mail:May 2023,Vol.26 No.S1论著cTfh 细胞对乙型肝炎疫苗长期免疫的调控作用洪茜，唐豪*，倪进东，周桑玉，熊泳珍，余水岸，尹明娟，黎峻余【摘要】目的分析主要辅助 B 细胞的是滤泡辅助性 T（TfhB）细胞对乙型肝炎疫苗长期免疫的调控作用，以提升疫苗免疫应答，遏制乙型肝炎传播。方法经医院伦理学会批准，选择东莞市莞城医院 2017 年至 2019 年诊治的乙型肝炎疫苗接种者 100 例。采用随机数字分组法将其分成对照组和观察组，均 50 例。对照组患者接受常规乙型肝炎疫苗注射方案。观察组患者使用 20g 重组乙型肝炎疫苗（含 cTfh 细胞）。比较两组接种者免疫应答情况、乙型肝炎表面抗体（HBsAb）浓度、外周血 cTfh 细胞和 B 细胞、浆细胞和记忆性 B 细胞含量。结果观察组患者中或强免疫应答率高于对照组（P0.05），弱或无应答率低于对照组（P0.05）。观察组在接种后 14、28dHBsAb 浓度高于对照组（P0.05）。观察组接种者在接种 14、28d 的 cTfh 细胞含量高于对照组（P0.05），B 细胞含量低于对照组（P0.05）。观察组接种者在接种14、28d的浆细胞含量多于对照组（P0.05），记忆性B细胞含量低于对照组（P0.05）。结论cTfh 细胞能提升乙型肝炎疫苗长期免疫的调控作用，促使机体免疫应答，增加 HBsAb 浓度，建议使用。【关键词】免疫接种规划；HBsAb 浓度；cTfh 细胞；乙型肝炎疫苗；免疫；调控；作用【中图分类号】R19【文献标识码】AModulation of Long-term Immunity to Hepatitis B Vaccine by cTfh CellsHONG Qian，TANG Hao*，NI Jindong，ZHOU Sangyu，XIONG Yongzhen，YU Shuian，YIN Mingjuan，LI JunyuDongguan Guancheng Hospital，Dongguan 523000，China*Corresponding author：TANG Hao【Abstract】ObjectiveToinvestigatethemodulationoflong-termimmunitytohepatitisBvaccinebycirculatingT-follicularhelper（cTfh）cells.MethodsOnehundredcasesofhepatitisBvaccinatedpatientsinDongguanGuanchengHospitalfrom2017to2019wereselectedwiththeapprovalofthehospitalethicscommittee，andwereclassifiedintotwogroupsbyrandomnumbertablemethod，bothwith50cases.ControlgroupreceivedaconventionalhepatitisBvaccination，whileobservationgroupweregiven20ugofrecombinanthepatitisBvaccinecontainingcTfhcells.Thentheimmuneresponse，hepatitisBsurfaceantibody（HBsAb）concentration，peripheralbloodcTfhcellsandBcells，plasmacellsandmemoryBcellswerecomparedbetweenthetwogroups.ResultsPatientsinobservationgrouphadahigherrateofmoderateorstrongimmuneresponsethancontrolgroup（P0.05）andalowerrateofweakornon-responsethancontrolgroup（P0.05）.HBsAbconcentrationsinobservationgroupwerehigherthanthoseincontrolgroupatthe14dand28dofvaccination（P0.05）.ThecTfhcellatthe14dand28dofvaccinationwashigherinobservationgroupthanincontrolgroup（P0.05），andBcellcontentwaslowerthanthatincontrolgroup（P0.05）.Atthe14dand28dofvaccination，observationgrouphadsignificantlyhigherlevelsofplasmacellandlowerBcellcontent（P0.05），具有可比性。本研究通过本院伦理委员会审批。1.2诊断、纳入及排除标准1.2.1诊断标准无或弱免疫应答标准，抗-HBsS/C 值 10mU/m 中或强免疫应答标准，抗-HBsS/C 值 10mU/m。1.2.2纳入标准（1）能追溯到5年内疫苗接种的受试者；（2）知情同意的受试者；（3）接种者均无乙肝病毒感染病史；（4）常规指标检查正常；（5）HBV-DNA 阴性受试者。1.2.3排除标准（1）伴有严重性基础疾病患者；（2）乙肝疫苗注射禁忌证患者；（3）先天性免疫疾病患者；（4）精神疾病患者；（5）妊娠期、哺乳期患者。1.3方法对照组患者接受常规乙肝疫苗注射方案，按照 0、1、6 个月方案肌肉注射接种基因重组乙肝疫苗，10g/针。观察组患者使用 20g 重组乙型肝炎疫苗（含 cTfh 细胞）按照 0、1、6 个月方案肌肉注射接种基因重组乙肝疫苗，10g/针。1.4评价指标1.4.1免疫应答情况在注射结束后 2 个月评定两组接种者的免疫应答情况。1.4.2乙型肝炎表面抗体（HBsAb）浓度在接种前和接种结束后 14d 和 28d 抽取两组接种者空腹外周肘静脉血 5mL，离心处理后留下血清，使用 ELISA 法检测 HBsAb 浓度。1.4.3外周血 cTfh 细胞和 B 细胞在在接种前和接种结束后第 14d 和第 28d 抽取两组接种者空腹外周肘静脉血，离心处理后留下血清，使用流失细胞仪检测 cTfh 细胞和 B 细胞含量。1.4.4浆细胞和记忆性 B 细胞在在接种前和接种结束后 14d和 28d 抽取两组接种者空腹外周肘静脉血，离心处理后留下血清，使用流失细胞仪检测浆细胞和记忆性 B 细胞含量。1.5统计学方法本文所有数据使用SPSS21.00处理。年龄、外周血 cTfh 细胞和 B 细胞、浆细胞和记忆性 B 细胞等计量资料以（s）形式表示，组间比较采用独立样本t检验；而性别、免疫应答情况等计数资料使用相对数表示，组间比较采用 2检验。以 P0.05 表示差异有统计学意义。2结果2.1两组接种者免疫应答情况比较观察组患者中或强免疫应答率高于对照组，弱或无应答率低于对照组，差异均有统计学意义（2=14.620，P0.05）。观察组在接种后 14、28dHBsAb 浓度高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）。见表 2。表 2两组接种者乙型肝炎表面抗体浓度（s，U/mL）组别例数接种前接种 14d接种 28d对照组5057.262.06201.5811.58458.6928.65观察组5057.212.04263.4111.51654.2928.51t 值0.12226.77730.215P 值0.9020.0010.05）。观察组接种者在接种 14、28d 的cTfh 细胞含量高于对照组，B 细胞含量低于对照组（P0.05），差异均有统计学意义（P0.05）。观察组接种者在接种 14、28d 的浆细胞含量多于对照组，记忆性 B 细胞含量低于对照组，差异均有统计学意义（P0.05）。见表 4。3讨论HBV 感染是一个全球性严重公共卫生问题。据世界卫生组织估计，全球有 24 亿乙肝慢性感染者，每年因急性、慢性HBV 感染引起死亡人数达 78 万人。疫苗接种前我国是 HBV高流行地区6-8。通过乙肝疫苗接种目前降至 HBV 中度流行地区，但人群乙肝表面抗原（HBsAg）携带率仍高达 7.18%9。乙肝疫苗免疫效果主要依赖于激发机体产生足够水平的抗体、并保持有效的免疫记忆。关于乙肝疫苗长期免疫保护时限及是否需要加强免疫问题，一直存在分歧与争议10-12。体液免疫应答中，主要 TfhB，突破了传统的对 Th 细胞的认识，为深入探讨乙肝疫苗长期免疫调控机制提供了崭新的研究思路。基于此，本项目将通过对乙肝疫苗接种人群随访，研究表 3两组接种者外周血 cTfh 细胞和 B 细胞含量比较（s，%）组别例数cTfh 细胞B 细胞接种前接种 14d接种 28d接种前接种 14d接种 28d对照组506.021.126.250.366.471.189.741.369.540.449.250.55观察组506.031.167.260.317.981.119.731.338.680.478.760.58t 值0.03615.03216.3020.02514.02313.518P 值0.9010.0010.0010.9540.0010.00160http:/ E-mail:May 2023,Vol.26 No.S1表 4两组接种者浆细胞和记忆性 B 细胞含量比较（s，%）组别例数浆细胞记忆性 B 细胞接种前接种 14d接种 28d接种前接种 14d接种 28d对照组5020.362.5821.740.3624.691.0619.872.2518.641.0217.680.33观察组5020.312.5123.580.3127.061.0319.822.2417.061.0616.470.36t 值0.71527.00620.4870.8148.31221.036P 值0.4130.0010.0010.3320.0010.001Tfh 细胞与乙肝疫苗激发抗体衰减、记忆反应缺失之间关联及其作用机制，从一个全新视角阐述乙肝疫苗长期免疫的调控机制13。同时，项目研究中将鉴定乙肝疫苗长期免疫中辅助 B 细胞的效应 Tfh 细胞亚群和关键调控基因14-15，可为进一步乙肝疫苗佐剂研发提供参考靶标。既往研究结果表明，乙肝疫苗激发机体的免疫保护效果依赖于有效的免疫应答产生足量的抗体，以及形成记忆淋巴细胞克隆，当机体再次暴露于 HBV 时能迅速凭借免疫记忆，引起再次免疫应答，阻断感染发生。Tfh 细胞是主要辅助 B 细胞反应的 T 细胞亚群16。KUROSE 等17曾认为 cTfh 细胞只能是一种近期激活状态存在的 T 细胞，后续研究发现在破伤风抗毒素疫苗加强接种后 23 年，外周血中仍能检测到破伤风抗毒素特异性CXCR5+CD4+T 细胞。随研究的深入，发现 Tfh 细胞包含不同亚群，根据表型与功能，可分为能表达 Th1 细胞特征性转录因子 T-bet、表型 CXCR3+CCR6-的 Tfh1；表达 Th2 细胞特征性转录因子 GATA3、表型 XCR3-CCR6-的 Tfh2；表达 Th17细胞特征性转录因子 RORT、表型为 CXCR3-CCR6+的Tfh17 三个亚群18-19。不同亚群对 B 细胞的辅助功能、效率存在差异，不同抗原激发不同的抗原特异性Tfh细胞亚群活化，相比与 cTfh2、cTfh17 细胞，cTfh1 细胞辅助 B 细胞反应功效偏低20-21。本文研究结果显示，接受重组的乙肝疫苗注射的接种者中或强免疫应答情况增加，弱或无应答情况减少。乙肝疫苗注射后机体出现中或强免疫应答免疫应答预示疫苗接种效果较好，有利于疫苗成活率提升。同时观察组患者种后 14、28dHBsAb 浓度明显升高，接种 14、28d 的 cTfh 细胞含量、浆细胞含量较高，记忆性 B 细胞和 B 细胞含量较低。以上结果提示，cTfh 细胞能够辅助提升乙肝疫苗长期免疫的调控作用。而鉴定发挥主要辅助作用的效应 cTfh 细胞亚群，明确其在记忆反应中的激活状态变化情况，不仅为识别乙肝疫苗长期免疫提供生物标记，更为进一步阐明乙肝疫苗长期免疫调控机制奠定基础。Th 细胞在乙肝疫苗免疫应答中的关键性作用一直受到大家高度重视，但既往一度认为 Th2 是 T 细胞辅助 B细胞的主角，导致关于乙肝疫苗免疫应答机制研究走了很多弯路，相关研究也始终不能获得一致的结论22-23。直到最近才确定 Tfh 是主要负责辅助 B 细胞的 T 细胞亚群，打破了传统理论认识的局限。本项目基于这一最新研究进展，探讨阐明乙肝疫苗长期免疫中 cTfh 细胞及其亚群作用，有望带来乙肝疫苗免疫机制研究的突破。综上所述，cTfh 细胞辅助提升乙肝疫苗免疫应答效果，实现强免疫和强抗体的临床期望。参考文献1赵虹，王黎明，王德春，等.云南省昌宁县 5 岁及以下儿童乙肝疫苗接种及感染现状调查分析J.医学动物防制，2019，35（4）：37-40.2曹秀贞，陈凤欣，曾湛，等.HBV 感染女性所生儿童 1 岁时感染状况和乙肝疫苗应答效果的真实世界研究J.中华实验和临床病毒学杂志，2021，35（4）：372-377.3谭静，叶晓林，王慧.妊娠中晚期应用替比夫定阻断 HBsAg阳性孕妇 HBV 母婴传播效果及对婴儿接种乙肝疫苗应答的影响J.实用肝脏病杂志，2019，22（1）：54-57.4VMULDERJST，WITHANAGE，etal.ImmunogenicityandsafetyofintradermaldeliveryofhepatitisBboostervaccineusingthenoveldrugdeliverydeviceVAX-ID（TM）J.Vaccine，2019，37（4）：581-586.5孙翠群，李娜，孙源，等.烟台市新生儿乙型肝炎疫苗接种前后病毒性乙型肝炎流行特征分析J.中国预防医学杂志，2020，21（4）：80-84.6张睿君，扆琳珠，武佳欣，等.TLR3 对乙型肝炎疫苗无弱应答婴儿脐血单个核细胞Th1/Th2 型细胞因子的影响J.中华疾病控制杂志，2020，24（6）：97-101，108.7王亚宁，范超，郝春秋，等.转录因子 Ascl-2 调控 Tfh 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ICART+PCI 术式降低了慢血流、无复流的发生率，降低了恶性心律失常的发生率，同时并没有增加出血的发生概率，从而减少了抢救的概率，从一定程度上缓解了双绕行对护理工作产生的压力，从而使 STEMI 患者救治更高效，并提高了成功率，目前已推广医院 20 余家，值得广泛推广，但仍需大量的研究支撑。参考文献1TOPOLEJ，CALIFFRM，GEORGEBS，etal.ArandomizedtrialofimmediateversusdelayedelectiveangioplastyafterintravenoustissueplasminogenactivatorinacutemyocardialinfarctionJ.NEnglJMed，1987，317：581-588.2田进文，彭利，刘谟焓，等.逆向精确溶栓联合支架植入术治疗急性冠状动脉闭塞病变 1 例J.中华老年多器官疾病杂志，2013，8：633-635.3农京国，田进文，彭亮，等.冠状动脉内逆向精确溶栓术在急性 ST 段抬高型心肌梗死患者行直接经皮冠状动脉介入治疗中应用的研究J.中国循环杂志，2016，31（12）：1160-1164.4农京国，白静，田进文，等.冠状动脉内逆向溶栓在急性 ST 段抬高型心肌梗死患者直接介入治疗术后 1 年的随访J.中华老年心脑血管疾病杂志，2016，18：905-908.5郭自同，刘伟，沈鑫，等.逆向溶栓联合 PCI 术治疗急性 ST段抬高型心肌梗死的年随访观察J.新疆医科大学学报，2017，40（7）：903-905.6农京国.冠脉内逆向溶栓术在急性 ST 段抬高型心肌梗死患者行直接经皮冠状动脉介入术中的应用D.北京：中国人民解放军医学院，2016.7马晓宇，郭晓华，杨征.选择性冠脉溶栓在急诊 PCI 中对TNF-的影响J.中西医结合心血管病杂志，2019，7（5）：47-48.8郭妍，刘玉春.逆向精确溶栓法结合支架植入术治疗急性 ST段抬高型心肌梗死的护理观察及干预J.中国医刊，2014，49（3）：100-102.（本文编辑：杨允利）rhumatodeJ.RevueduRhumatisme，2020，87：44-A45.14黄烈雨，洪宝林，吕敏，等.北京市 1992-2013 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