1、生殖医学杂志2 0 2 3年10 月第32 卷第10 期:158 3.DO1:10.3969/j.issn.1004-3845.2023.10.022MTHFR基因多态性与贵阳地区原发性不育症的关系研究汤贤英*,杨杰,刘美,金平,李玉权(贵阳市妇幼保健院优生遗传科,贵阳550 0 0 3)【摘要】目的研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因6 7 7 和12 9 8 位点多态性与贵阳地区原发性男性不育症的关系。方法选取2 0 18 年1月至2 0 2 1年12 月期间就诊于贵阳市妇幼保健院的2 54例原发性男性不育患者为病例组,以配偶自然受孕且生育过正常新生儿的2 38 例健康男性为对照组。
2、采用Taqman探针法检测两组MTHFR基因6 7 7 和12 9 8 位点的基因型,并统计分析其基因型分布特点、等位基因分布频率以及 MTHFR基因型与男性不育症的相关性。结果基因检测结果显示,MTHFR677位点包括CC、C T、T T 三个基因型;12 9 8 位点包括AA、A C、C C 三个基因型。病例组和对照组MTHFR基因6 7 7 位点TT基因型频率分别为14.17%、14.7 1%,T等位基因频率分别为37.6 0%、36.13%;病例组和对照组1298位点CC基因型频率分别为5.51%、3.7 8%,C等位基因频率分别为2 3.43%、2 2.2 7%;两组间各位点基因型频
3、率和等位基因频率比较均无统计学差异(P0.05)。结论MTHFR基因6 7 7 和12 9 8 位点多态性与贵阳地区原发性男性不育症无明显关系。【关键词】原发性男性不育;亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR);基因多态性【中图分类号】R698+.2【文献标识码】A(JReprodMed2023,32(10):1583-1586)生殖健康一直是全球关注的热点。在不孕不育夫妇中,约50%为男性不育 1。男性不育与损害精子发生的先天性、后天性或特发性因素有关,而大多数的男性不育原因不明,为特发性男性不育,表现为无精子症或少精子症。在人类精子形成过程中,精子头部染色质的适当浓缩可促使精子成熟并具有受精能力
4、以及胚胎的发育,这一过程有赖于DNA的正确甲基化,而异常的DNA甲基化导致精子变异引发不育 2 。5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydofolate reductase,MTHFR)通过促进5-甲基四氢叶酸酸的合成,为甲硫氨酸和同型半胱氨酸(Hcy)的合成与代谢提供原料,在DNA合成与甲基化中发挥着重要作用 3。MTHFR基因的多态性,尤其是C677T与多种疾病有关,如心血管疾病、癌症、血管疾病、先天性唇聘裂、流产等,其原因可能与该多态性导致的高水平Hcy相关 3-4。现有的研究显示,MTHFR基因的多态性可能是男性不育的遗传性危险因素之一 5-6 ,但
5、有文献报道二者之间并无相关性门,究其原因,可能与地区、种族差异等有关。本研究通过检测贵阳地区男性不育症患者的 MTHFR基因多态性,探讨 MTHFR基因多态性是否是贵阳地区原发性男性不育症的遗传危险因素。一、资料与方法1.研究对象:参照2 0 12 年欧洲泌尿外科学会男性不育症诊疗指南 8 选取2 0 18 年1月至2 0 2 1年12月期间就诊于贵阳市妇幼保健院生殖中心的2 54例原发性男性不育患者为病例组,年龄19 50 岁。纳人标准:(1)婚后1年或1年以上、有正常性生活、未采取避孕措施未能使配偶怀孕;(2)两次精液常规检测确诊为少弱精子症。排除标准:(1)女方不孕因素;(2)隐睾及睾丸
6、发育不良等生殖器发育异常者;(3)严重精索静脉曲张、附睾损伤、生殖系统感染、染色体异常等因素所致不育者。同时,选取配偶自然受孕且有正常生育史的健康男性2 38 例为对照组,均为同期就诊于贵阳市妇幼保健院的体检人员,年龄2 0 47 岁。所有入组人员均签署知情同意书。2.MTHFR基因6 7 7、12 9 8 位点多态性检测:EDTA 抗凝管采集病例组和对照组外周血 2 3 ml。【收稿日期】22023-05-08;【修回日期】2 0 2 3-0 7-0 4【基金项目】2016年贵阳市科技局基金项目(筑科合同20161001);2 0 19 年贵州省卫生健康委科学技术基金项目(gzwjkj201
7、9-1-198)【作者简介】汤贤英,女,贵州遵义人,博士,副主任技师,产前诊断学专业.(*通讯作者,Email:t a n g x y 3349 16 3.c o m):158 4:严格按血液基因组DNA提取试剂盒(北京天根生化科技)说明提取DNA,按照叶酸代谢能力(MTHFR)基因检测试剂盒(江西诺德)操作程序检测MTHFR基因6 7 7 和12 9 8 位点的基因型。PCR扩增程序:95变性10 min,9 5变性15s、6 0 退火45s,40个循环。3.统计学分析:采用SPSS17.0软件进行数据分析。以百分数(%)表示基因型、等位基因频率,组间比较采用检验。以P0.05);两组间T等
8、位基因频率相似,分别为37.6 0%和36.13%,亦无统计学差异(P0.05)(表1)。病例组及对照组中均未发现同一个体发生两个位点纯合突变的情况,即无MTHFR677TT基因型复合12 9 8 CC基因型的情况。3.MTHFR基因12 9 8 位点基因型及等位基因频率分布情况:病例组MTHFR基因12 9 8 位点CC基因型频率5.51%,高于对照组(3.7 8%),但差异无统计学意义(P0.05);两组间C等位基因频率亦无统计学差异(P0.05)(表2)。基因型频率CCCT99(38.98)119(46.85)101(42.44)102(42.86)基因型频率AAAC149(58.66)
9、91(35.83)141(59.24)88(36.97)男性不育的原因之一L-41,亦是MTHFR基因多态性与原发性男性不育症相关性研究的热点之一。近年来,不断有相关的研究或荟萃分析报道MTHFR基因多态性与原发性男性不育的可能关系 5-6.9-13,MTHFRC677T与无精子症和少精子症的关系存在着种族和地域的差异:如在亚洲、印第安及土耳其人群中,MTHFRC677T是无精子症和少精子症的遗传危险因子 6.1-1;而在波兰及巴基斯坦人中,MTHFR C677T并不是非梗阻性男性不育症的主要遗传危险因子 9.13;一项C677T多态性与男性不育症的关联分析7 发现,在东亚人和西亚人等位基因频
10、率TTC36(14.17)317(62.40)35(14.71)304(63.87)等位基因频率CCA14(5.51)389(76.57)9(3.78)370(77.73)合成与甲基化、DNA修复等,影响精子的成熟与受精能力,这可能是MTHFR基因多态性导致原发性T191(37.60)172(36.13)C119(23.43)106(22.27)生殖医学杂志2 0 2 3年10 月第32 卷第10 期种族中MTHFRC677T与男性不育风险增加有关,而在其他种族(如高加索人和非洲人)不存在这种相关性。Yang等 141的研究报告指出,我国汉族人群中MTHFR677T等位基因频率显示自北向南逐渐
11、降低的趋势,山东最高为6 3.1%、海南最低为2 4%,TT基因型分别为40.8%、6.4%,这为解释国内各地6 7 7 TT基因型与原发性男性不育症相关性存在地区差异提供了一种可能。但也有研究显示,各地区原发性男性不育症与 MTHFR基因多态性的关系并未遵循这一趋势,如四川、湖北、徐州、宁夏(汉族)等地区的研究显示MTHFRC677T与无精子症和少精子症有相关性 15-2 0 1,而在中国中部和东部省份MTHFR C677T与汉族特发性男性不育症无关联 2 1-2 3。本研究结果显示,MTHFRC677T、A1298C基因多态性在贵阳地区贵州籍原发性男性不育症(无精子症和少子精症)患者与那些
12、有证实生育力的对照男性之间并无显著性差异,说明MTH-FR基因多态性与原发性男性不育症的相关性存在不一致性,并不能单纯地用地域差异来解释,而是提示可能存在多种遗传因素或环境因素影响疾病的遗传风险。导致这种差异的可能相关因素如下:(1)其他与男性不育有关的尚未确定的致病基因的存在掩盖了 MTHFR基因多态性的影响;(2)基因与基因间的相互作用,如与其他Hcy代谢相关的基因多态性因素互相叠加或干扰有关;(3)种族、民族因素:现有研究显示在欧洲人、北美人和中国人,以及国内多个民族中均观察到MTHFR677T等位基因频率差异 2 4-2 5,这种差异可能对疾病遗传危险因素的判定产生影响;(4)饮食因素
13、:有研究提示饮食也是一种与男性不育及其他疾病相关的环境因素。在具有MTHFRC677T多态性T等位基因的男性中,足量的维生素B9(叶酸)和B12(钴胺素)摄人在降低同型半胱氨酸水平、改善精子浓度和活力方面发挥关键作用 2 6 ,提示MTHFR基因多态性与微量营养素之间的相互作用,可影响同型半胱氨酸代谢途径的效率,进而影响 MTHFR基因多态性与相关疾病遗传风险的评估;(5)其他环境因素。本研究的研究对象均来自于贵阳地区常住人口,由于样本量小,不排除结论存在偏倚性;其次,贵州地处西南,饮食结构多样化,富含叶酸食物种类繁多,可能降低了MTHFR基因C677T多态性对男性不育的影响。随着经济的发展、
14、生活水平日益改:158 5.善,人们对生殖健康的关注或重视日益提高,对微量元素的足量摄人亦逐渐重视,本研究不排除对照组人员摄人足量微量元素可能影响了MTHFR基因C677T多态性与男性不育相关性的判断。此外,贵州是多民族聚居地区,不同民族间可能存在基因多态性的差异、人口迁移等因素。本研究中亦有少数民族样本存在,但因样本量小不足以探讨MTHFR基因多态性在不同民族男性不育症间的差异。因此,后续研究有必要进一步加大样本量,并增加民族、饮食结构以及影响DNA甲基化的其他基因的调查,进而深人探讨MTHFR基因多态性与贵州地区原发性男性不育的关系以及相互作用的机制,指导男性不育症的预防和治疗。【参考文献
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