分子诊断策略与常用技术.pptx

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第十二章 分 子 诊 断,分子诊断策略与常用技术,第1页,一、分子诊疗概念和特点,概念：,利用当代分子生物学和分子遗传学技术和方法，经过检测基因结构或其表示水平是否正常，从而对人体健康状态和疾病作出诊疗方法。,传统诊疗：表现型基因型,基 因 诊 断：基因型表现型,（逆向诊疗）,分子诊断策略与常用技术,第2页,特点,特异性强,灵敏度高,早期诊疗性,适应性强,一、分子诊疗概念和特点,检测致病基因突变；分析与疾病连锁遗传标志；建立多基因疾病表型克隆；定量分析致病基因表示水平,已明确疾病表型与基因型关系,分子诊疗前提,分子诊断策略与常用技术,第3页,二、分子诊疗策略,直接诊疗,直接检测致病基因突变,基因突变类型,缺失、点突变、重复、插入等,间接诊疗,应用,DNA,多态性为遗传标识进行连锁分析，确定待测者是否得到带有致病染色体，从而间接地作出诊疗,DNA,多态,RFLP,、,VNTR,、,SNP,4,分子诊断策略与常用技术,第4页,DNA,多态（,DNA Polymorphism,）,群体中每个个体,DNA,区域中等位基因（或片段）存在两种或两种以上形式，对基因功效没有影响，称,DNA,多态,。,DNA,分析中惯用遗传性多态性标识有,3,类：,1,）,RFLP,：,称限制性片段长度多态性，为第一代多态性标识；,2,）,重复序列多态性（,VNTR,）,：如,STR,其重复次数在人群中存在变异，形成多态即,VNTR,，为第二代多态性标识；,3,）,单碱基多态性（,SNP,）,：发生在基因组中单个核苷酸替换，为第三代多态性标识。,二、分子诊疗策略,分子诊断策略与常用技术,第5页,三、分子诊疗惯用技术,核酸分子杂交技术,等位基因特异寡核苷酸探针,(allele specific oligonucleotide,ASO),DNA,限制性长度多态性,(restriction fragment length polymorphism,RLFP),分析,PCR-SSCP,DNA,测序,DNA,芯片技术,分子诊断策略与常用技术,第6页点突变（,C to,T,）,5,3,3,5,G,5,3,引物,1,引物,2,探针,1,探针,2,A,等位基因特异寡核苷酸探针（,ASO,）,分子诊断策略与常用技术,第7页,原理,指,DNA,序列上发生一个变异后取得或丢失了一限制性识别位点，使,DNA,限制性片段长度发生改变，在人群中形成两种或两种以上限制性类型,利用特定限制性识别位点进行基因分析,限制性片段长度多态性分析（,RFLP,）,分子诊断策略与常用技术,第8页,RLFP,分析法,分子诊断策略与常用技术,第9页,RFLP,分析,优点,分辩率高，无需标识,重复性好，简便快速直观,主要用于核酸变异分析比较,微生物分群分型，癌基因分析，遗传病诊疗等。,局限,只能应用突变引发限制性酶切位点改变筛选，检测效率低。,分子诊断策略与常用技术,第10页,原理,将经扩增,DNA,片段变性形成单链，因为序列不一样，单链构象就有差异，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳迁移率不一样，经过与标准物对比，即可检测出有没有变异。,优点,检测基因变异，含有操作简便、快速特点，不需特殊设备，适合用于大样本筛选。,己广泛应用于检测各种病原体基因点突变及缺失突变，基因多态性分析等。,PCR/,单链构象多态性分析（,SSCP,）,分子诊断策略与常用技术,第11页,（,PCR-SSCP,）示意图,分子诊断策略与常用技术,第12页,DNA,测序,分子诊断策略与常用技术,第13页,DNA,自动测序结果举例,分子诊断策略与常用技术,第14页,DNA,芯片技术,分子诊断策略与常用技术,第15页,四、分子诊疗应用及举例,遗传疾病,肿瘤,感染性疾病,判断个体疾病易感性,器官移植组织配型,法医学中个体识别、亲子判定,分子诊断策略与常用技术,第16页,Mst,酶切位点,(CCTNAGG),5,3,正常基因,5,3,突变基因,1.15kb,1.35kb,镰状红细胞贫血患者基因组限制性酶切分析,G,A,G,G,T,G,谷,Aa,缬,Aa,分子诊断策略与常用技术,第17页,+,0.2kb,1.15kb,1.35kb,正常人,突变携带着,患者,镰状红细胞贫血患者基因组限制性酶切分析,分子诊断策略与常用技术,第18页,Normal,Gene Probe,与正常,Probe ,杂交稳定,Mutation,S,Gene Probe,与异常,S,杂交 稳定,镰状红细胞贫血患者基因组,ASO,探针杂交,分子诊断策略与常用技术,第19页,斑点杂交结果：,镰状红细胞贫血患者基因组,ASO,探针杂交,/S S/S,正常探针,异常探针,20,分子诊断策略与常用技术,第20页,正常人,纯合突变,杂合突变,Leber,病患者,PCR/SSCP,分析,+,分子诊断策略与常用技术,第21页,