乙肝病毒检测.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2021/10/1,#,乙肝病毒检测,方法学评价,乙肝病毒检测,1/34,乙肝病毒结构,乙肝病毒检测,2/34,（一）乙型肝炎病毒结构特点,HBsAg：,是HBV感染主要标志,HBsAb：,保护性抗体,HBcAg：,仅存于感染肝细胞核内，,普通不存在于血循环中,HBcAb:,非保护性抗体，HBcAb-IgM,提醒HBV处于复制状态,HBeAg：,HBV复制及强感染性指标,HBeAb：,有一定保护作用，预后良好,乙肝病毒检测,3/34,患者血清中存在三种基本形态,大球型颗粒，又称Dane颗粒；小球型颗粒；管型颗粒小球型颗粒；管型颗粒,管型颗粒,乙肝病毒检测,4/34,乙型肝炎病毒试验室诊疗,（一）血清学检验,（二）生化学检验,（三）HBV DNA、基因型和变异检验,乙肝病毒检测,5/34,血清学检验,项目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBc IgM,方法,ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay，最惯用，定性),乙肝病毒检测,6/34,HBsAg,感染标志,Anti-HBs,既往感染/接种疫苗,Anti-HBc IgM,急性感染标志,Anti-HBc IgG,既往或慢性感染,HBeAg,急性病毒复制，有传染性,Anti-HBe,病毒不再复制,HBV-DNA,急性病毒复制，比HBeAg更准确；主要用于监测治疗反应,乙肝病毒检测,7/34,HBV血清学标志物临床意义,感染模式,HBsAg,HBeAg,HBc(IgM),抗,HBc(IgG),抗HBe,抗HBs,临床意义,1,+,-,-,-,-,-,急性乙肝潜伏期后期，携带者。,2,+,+,-,-,-,-,急性乙肝早期或潜伏期,3,+,+,+,-,-,-,急性乙肝早期,4,+,+-,+,+,-,-,急性乙肝后期,5,+,+-,+-,-,-,-,急性或慢性乙肝，有HBV复制,6,+,+,+-,+-,+,-,急性或慢性乙肝。急性期或无症状携带者,7,+,-,+-,+,+,-阴性慢性乙肝,8,+,-,-,-,+,-,慢性乙肝，无或低度HBV复制，乙肝恢复期，既往感染，隐匿性,9,-,-,-,+,-,+,乙肝恢复期，既往感染，隐匿性,10,-,-,-,-,-,+,慢性乙肝，接种过乙肝疫苗。,乙肝病毒检测,8/34,两对半意义,乙型肝炎诊疗,判断传染性,判断预后,筛查献血员,流行病学调查,乙肝病毒检测,9/34,乙肝三系定性检验是用来判断是否感染乙肝或粗略预计病毒复制水平初步检验，对患者病情程度评定参考性不大，所以乙肝患者在做乙肝三系定性检验时候，应结合肝功效检验、乙肝病毒DNA检验、B超检验等来判定病情轻重，,乙肝病毒检测,10/34,ELISA检测灵敏低原因及局限,ELISA法受其本身敏感性和特异性限制;,HBV S和前C基因区出现位点突变造成HBsAg和HBeAg表示缺点。,影响原因多,如加样时间,试剂平衡时间,样本溶血程度等等。尤其是低浓度样本易造成假阴性结果,使弱阳性样本漏检。,急性感染窗口期;HBsAg检测方法灵敏度不足;血清亚型漏检等。,标本中病毒颗粒少;,乙肝病毒检测,11/34,血清学检测不足,HBV含有“检测窗口期,假阴性结果,无法检测突变株及抗体,乙肝病毒检测,12/34,乙肝病毒定量检测,1,、乙肝表面抗原（HBsAg）定量检测：,1）参考值：0-0.05IU/mL,2）临床意义：,（1）可作为HBV携带者乙肝病毒复制参考指标,（2）评价拉美呋定治疗效果,（3）监测应用alpha-干扰素治疗病人乙肝病毒复制,（4）确定肝移植病人免疫球蛋白使用剂量,乙肝病毒检测,13/34,2,.乙肝表面抗体（抗-HBs）定量测定：,是HBsAg刺激机体产生特异性抗体，是一个保护性抗体，能中和HBV。,（1）抗-HBs含量在0-10mIU/ml，表示不含有保护性，需要注射乙肝疫苗（3针：0-1-6方案）。,（2）抗-HBs含量在10-100mIU/ml，表示含有保护性，但较弱，需要乙肝疫苗强化注射（1针）。,（3）抗-HBs含量大于100mIU/ml，表示含有很强保护性，不需要注射乙肝疫苗。,乙肝病毒检测,14/34,3,、乙肝病毒e抗原（HBeAg）,HBeAg,增高说明病毒复制，含有很强传染性。,4,、乙肝病毒e抗体（抗-HBe）,抗-HBe,阳性说明病毒复制降低，传染性弱，但并非没有传染性。抗HBe不是保护性抗体。,乙肝病毒检测,15/34,5,、乙肝病毒关键抗体（抗-HBc）,抗-HBc,：不是中和抗体，有IgG和IgM两种形式。IgM在早期出现，而IgG在恢复期出现，可连续多年或终生存在。,乙肝病毒检测,16/34,乙肝五项定量检测,优点,因为乙肝病毒轻易发生变异，再加上乙肝定性检测方法不足，会出现假阴性结果，造成不能及时发觉乙肝感染，也就不能得到及时治疗，对医护人员和其它患者也存在着被感染威胁。,乙肝五项定量应用当前最先进化学发光法检测，防止了假阴性和漏检问题，而且准确，尤其对乙肝病人疗效观察提供了依据，这是检验发展趋势。,乙肝病毒检测,17/34,两对半定量检测极大地提升了检测灵敏度，LiCa技术检测HBsAg灵敏度可达05ng/ml，而ELISA检测HBsAg到达2ng/ml时才会阳性。,急性乙肝早期定量能及早检出HBsAg，确证HBV感染，几乎能与PreSi同时检测，在病程观察中大大缩短了“窗口期”，而酶标检测在乙肝早期往往HBsAg呈阴性。,慢性乙肝一些患者因为机体常缺乏对HBV包膜蛋白免疫应答，HBsAg表示较低，酶标检测可出现HBsAg和HBsAb均阴性情况，而定量检测则可防止这些情况出现为正确判断病情提供依据。,灵敏度如病毒发生变异后，表示量较低，常规ELISA测不出抗原，而定量检测含有极高灵敏度，可发觉极有可能同时检测出HBsAg和HBsAb，血清中HBsAg含量与病人对HBsAg细胞免疫成反比关系，而肝功效改变则与此种细胞免疫成正比。定量HBsAg是反应这一关系唯一伎俩。可发觉低浓度HBsAg携带者，尤其是一些群体如医务工作者及病人家眷等。,乙肝病毒检测,18/34,定量检测意义,监测疾病发展,评定药品疗效,指导疫苗接种,乙肝病毒检测,19/34,国内疫苗评价标准,无应答者:无抗体产生(5%)-加强计量复种,低应答者:100 IU/L(20%)-无须复种,乙肝病毒检测,20/34,PCR技术在乙肝方面应用,乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae），基因组长度3.2kb,当前感染人类最小DNA病毒,部分双链环状DNA。,乙肝病毒检测,21/34,定量PCR特点,可定量结果，准确灵敏地反应了病原体感染和治疗恢复情况,光谱分析仪直读结果，自动分析，增强了灵敏性和客观性。,乙肝病毒检测,22/34,乙肝病毒检测,23/34,HBV基 因 及 编 码 蛋 白,乙肝病毒检测,24/34,HBV-DNA定量检测临床应用,慢性乙肝诊疗,治疗监测和疗效评价,跟踪随访,预后判断,乙肝病毒检测,25/34,（二）,HBV-DNA,与“两对半”,1.“两对半”机体免疫反应状态；,FQ-PCR：检测是HBV本身遗传物质DNA，是,病毒存在和复制最可靠、最直接指标。,2.“携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学指标不能,反应体内病毒复制水平与感染程度。,乙肝病毒检测,26/34,3.血清学指标()不能排除HBV感染,。,4.也可能出现HBsAg()，HBV-DNA()。,5.HBsAb()、HBcAb()、HBeAb()三抗体阳性,与HBV DNA 2.5,103 copy,/ml 结果解释。,乙肝病毒检测,27/34,HBV-DNA检测临床意义,诊疗方面：,HBV DNA是HBV存在最直接依据,HBV DNA是HBV复制标志,HBV DNA是患者含有传染性标志,对HBV-M起补充作用：,HBeAg()/抗HBe()乙型肝炎,（前C区变异）,HBsAg()乙型肝炎,（S区变异）,低水平感染,单项抗HBc()乙型肝炎,乙肝病毒检测,28/34,疗效判断：,HBV DNA是当前判断乙肝抗病毒药品疗效最敏感指标,预后判断,HBV DNA水平与病情有一定关系,乙肝病毒检测,29/34,一、乙肝病毒DNA检验可检验乙肝病毒复制情况。如乙肝病毒DNA测定值1000copies/ml，就提醒乙肝病毒有复制，而且病毒数量高低与病毒复制程度成正相关。若结果阴性，则表明病毒处于不活跃阶段，病情比较平稳。,二、乙肝病毒DNA检验还是判断乙肝病毒传染性主要指标假如乙肝病毒DNA测定值1000copies/ml，常提醒含有传染性，且检测值越高就说明乙肝病毒复制越活跃，传染性越强。,乙肝病毒检测,30/34,三、乙肝病毒DNA检验能够作为肝病患者确诊病情主要依据。乙肝病毒DNA阳性者，即使肝功效正常，必要时也应考虑进行抗病毒治疗。乙肝抗病毒治疗标准就是乙肝病毒DNA1000copies/ml，且患者转氨酶超出正常值两倍，此时是肝病患者抗病毒治疗最正确时机。,四、乙肝病毒DNA检验结果还能够在一定程度上辅助判断乙肝病毒是否产生了变异，如在治疗过程中乙肝病毒DNA检测结果由阴性转为阳性时，则提醒病毒已发生变异，应结合详细病情重新选择抗病毒药品。,乙肝病毒检测,31/34,基因检测在乙肝诊疗各阶段应用,药品治疗方案确实定,（用药：干扰素、拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦）,药品治疗,（疗效评价）,前,C,区,1896,位点突变检测,跟踪随访,乙 肝 病 毒 定 量检测,确,诊,病毒学分析,乙肝病毒分型检测,拉米夫定耐药检测,阿德福韦耐药检测,共价闭合环状DNA,(cccDNA)检测,恩替卡韦耐药检测,乙肝病毒检测,32/34,FQ-PCR检测优势,灵敏度高能够到达 pg 级而 ELISA 只能检测 ng级，能够检测包含乳汁其它低含量标本;,不受病毒变异影响，而前C和S变异后ELISA难以检测;,荧光定量PCR 技术采取闭管检测,无须凝胶电泳,防止了交叉污染,实现了对HBV DNA 定量测定,其实时监测技术使药品选择和疗效观察成为可能;,漏检率低。,乙肝病毒检测,33/34,谢谢！,乙肝病毒检测,34/34,