lncRNA NEAT1通过竞争性结合机制调控卵巢癌细胞生物学行为的作用和机制.pdf

通过竞争性结合机制调控卵巢癌细胞生物学行为的作用和机制赵 达包利利李 波俞 岩王晓黎海南医学院海南 海口 海南省妇女儿童医学中心妇科海南 海口【摘要】目的:探讨 在卵巢癌进展中的确切作用和分子机制为卵巢癌的生物标志物的筛选及靶向治疗提供新的抑制 方法:采用实时荧光定量()检测 和 在卵巢癌细胞和组织中的表达水平 和 实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力 免疫印迹法()分析 的表达水平 双荧光素酶报告实验证实 和/之间的相互作用 结果:与癌旁组织比较卵巢癌组织中 表达升高而 的表达下降差异均具有统计学意义(.)的过表达抑制了卵巢癌细胞中 的表达而抑制 的表达后 在卵巢细胞中的表达增加(.)进一步发现 能够抑制卵巢癌细胞增殖和迁移差异具有统计学意义(.)此外 在卵巢癌组织中同样高表达且其促进卵巢癌细胞增殖和迁移、侵袭差异具有统计学意义(.)结论:能够通过 /通路调控卵巢癌细胞增殖及迁移这可能是卵巢癌早期筛查或靶向治疗的潜在靶点【关键词】卵巢癌 【中图分类号】.【文献标识码】:./.【文章编号】().【】:.:()./.:(.).(.).(.).(例卵巢癌分期(第 版)标准进行分期 期和 期 例 期和 期 例浸润深度 期 例 期 例有淋巴结转移 例无淋巴结转移 例 而正常组织来自卵巢楔形活检或附件切除术 卵巢切除术后所有样本均保存至 冰箱以供进一步分析使用 本研究得到了我院伦理委员会的批准所有患者均签署知情同意书.细胞培养和转染人上皮性卵巢癌细胞系 和 购自中科院典藏细胞库(中国上海)在 改良 培养基()(美国)中补充 的(美国)中培养 对于 的过表达和 细胞用 模拟物(中国)转染 对于 的过表达 细胞转染 表达构建体在所有的转染中使用了 试剂()根据制造商的说明进行.实时荧光定量()使用 试剂(中国)和 ()提取总 使用 试剂盒()进行 的反转录 在 实时 系统()上进行并使用 ()进行扩增检测 引物是由 (中国上海)制作的 的引物:正向 和反向 的引物:正向 和反向 的引物:正向 和反向 和 分别作为 和 表达检测的内参基因相对定量是通过 方法计算的.双荧光素酶报告基因检测将野生型或突变型 的 插入(美国)中 细胞与野生型或突变型 的质粒共转染 和 转移后 用双荧光素酶报告基因分析系统(中国)评估了萤火虫荧光素酶的活性/海肾荧光素酶的活性.细胞活力检测通过 细胞增殖试剂盒来确定细胞活力 按照制造商的操作说明各处理组在转染处理后检测相关细胞增殖情况.蛋白质印迹分析()将培养的细胞的总蛋白溶于 缓流液(日本)并使用 蛋白检测试剂盒(中国)然后蛋白质在 上进行电泳并转移到 膜上(美国)将膜在室温下用 脱脂奶粉在 中稀释 然后在 下用抗()及()孵育过夜 然后将膜与相应浓度的稀释二抗在室温下孵育 使用 软件对灰度值进行分析.迁移及侵袭实验分别对 上室涂有或不涂基质胶进行迁移和侵袭能力检测 将 个细胞与不含血清的培养基一起加入上室 下室含有 和 胎牛血清(美国:)然后将细胞在 、条件下培养 随后使用棉签去除上室中的细胞 下室固定后加入结晶紫染液进行染色 .统计学分析采用 .软件进行数据处理计量资料以平均值 标准差()表示两组比较采用 检验多组比较采用方差分析进一步两两比较采用 方法 以 .为差异有统计学意义 结果.调控 和 细胞系中 的表达赵 达等 通过竞争性结合机制调控卵巢癌细胞生物学行为的作用和机制与癌旁组织比较 在卵巢癌组织中的表达显著下降而 在卵巢癌组织中的表达显著升高(.图 )进一步采用 模拟物和 抑制剂转染 和 细胞探索 对卵巢癌进展的影响(.图 )结果显示 的过表达抑制了 的表达而抑制 的表达后 在卵巢癌细胞系中的表达增加(.图 )图 卵巢癌中 和 水平的表达情况验证:卵巢癌组织中的 的水平明显下降:卵巢癌组织中 水平明显上调 :用 模拟物来实现 的过表达而用 抑制剂来实现对 和 细胞系中 的抑制 :过表达抑制而 沉默增加 在 和 细胞系中的表达 .:.:.:.:.与 的靶向关系验证本研究采用 对靶向结合位点进行预测(图)与 组相比在 模拟物转染的细胞中 荧光素酶载体的荧光素酶活性明显降低 然而在 抑制剂转染的细胞中荧光素酶活性明显增加(.图 )图 与 的 的相互作用:数据库用于预测 与 的靶向结合位点:荧光素酶报告载体的荧光素酶活性在 模拟物转染的细胞中显著减少:荧光素酶报告载体的荧光素酶活性在 抑制剂转染的细胞中显著升高 .:.:.:.通过 抑制了卵巢癌细胞的增殖通过 检测验证转染 后的 表达水平发现 组显著促进了 的表达(.图现代肿瘤医学 年 月 第 卷第 期 .)结果显示 过表达显著抑制了细胞的增殖但 的过表达逆转了 对细胞生长的抑制(.图 )图 通过 抑制卵巢癌细胞系的增殖:.转染到卵巢癌细胞系以完成 过表达 :.和 /共同转染到()和()细胞系后采用 检测不同处理组的细胞活力情况 .:.:./()().与 的靶向关系验证本研究通过 数据库预测 与 的结合位点(图)双荧光素酶报告结果显示与 组相比在 模拟物转染的细胞中 组荧光素酶活性明显降低(.图)然而在 抑制剂转染的细胞组中 荧光素酶活性显著升高(.图)此外本研究还发现 在卵巢癌组织中表达上调(.图)卵巢癌组织中 和 表达之间存在负相关关系(.图)图 与 的靶向及相关性:数据库预测 与 的结合位点:荧光素酶报告载体的荧光素酶活性在 模拟物转染的细胞中显著减少:荧光素酶报告载体的荧光素酶活性在 抑制剂转染的细胞中显著升高:在卵巢癌组织中表达上调:和 在卵巢癌组织中的表达呈负相关 .:.:.:.:.:.赵 达等 通过竞争性结合机制调控卵巢癌细胞生物学行为的作用和机制.促进卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移 的表达被 所抑制(.图)此外 的表达也被 所抑制(图)分析显示 组显著抑制了 和 细胞系的增殖(.图 )与 组比较 组卵巢癌细胞的迁移和侵袭明显受到抑制(.图 )图 沉默抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移:通过 实现了 的敲除并通过 证实了其抑制效率:的表达被 所抑制 :检测表明与 组相比 的敲除明显地减少了 和 细胞系的增殖 :和 细胞系的侵袭和迁移能力被 敲除所抑制(结晶紫染色).:.:.:.:().通过 促进 的表达 和 的结果显示 的敲除明显促进了 的表达而通过 抑制 的表达能够逆转 和 细胞系的这种影响(.图 )进一步结果显示 抑制剂促进了细胞的迁移和侵袭但 逆转了 抑制剂的作用(.图 )讨论目前研究发现 在肿瘤增殖及转移发挥着重要作用包括细胞生长、凋亡和迁移 然而 在卵巢癌致癌过程中的作用及其作用的分子机制仍不清楚在本研究中发现 在卵巢癌组织中的表达显著下降 的过表达明显抑制了卵巢癌细胞的增殖并促进卵巢癌细胞凋亡 这些结果表明 可能是卵巢癌中一个重要的肿瘤抑制性 目前研究发现 通过调控下游靶基因发挥对肿瘤进程的调控作用 目前研究发现 在许多恶性肿瘤中高表达并作为细胞增殖、存活和转移的重要调节因子此外其已被确定为 的关键下游靶点 在这项研究中 的过表达降低了 的蛋白水平 同时敲除 可以上调 的表达在 和 细胞中 对 的结合和抑制通过荧光素酶报告基因试验得到证实为了确定 和 之间的相互作用其潜在机制为肿瘤治疗提供了一个潜在的目标 以前的研究集中在 的靶点和 调节靶点的机制从而影响肿瘤的发生和发展 但人们很少关注 的调控机制特别是 对 的控制 近两年被证实在胃癌中能够通过 /途径影响肿瘤细胞的增殖及转移进程 而在本研究中 我们首次揭示了 和 在卵巢癌中的相互作用 本研究发现敲除 可上调 的表达而 过表达可抑制 的表达 这些结果进一步证实了 能够在卵巢癌中发挥肿瘤促进作用综上所述本研究发现 可以通过调节 /途径促进卵巢癌细胞的进程 本研究中确定/轴可能为卵巢癌提供潜在的治疗策略现代肿瘤医学 年 月 第 卷第 期 .图 通过 促进 的表达 :敲除明显促进 的表达而 部分恢复了()和()细胞系的这种效果 :抑制 明显增加了卵巢癌细胞的迁移而同时敲除 和抑制 则部分缓解了()和()细胞迁移的增加(结晶紫染色):抑制 明显增加了卵巢癌细胞的侵袭而同时敲除 和抑制 则部分缓解了()和()细胞侵袭的增加(结晶紫染色)与 组相比.:()().:()()().:()()().【参考文献】杨晓雨陈东宇王红心等.中国女性卵巢癌流行现状和趋势及预测分析.重庆医科大学学报():.():.安富梅.早期卵巢癌患者腹腔镜术后预后不良的影响因素及对策分析.中国民康医学():.():.张丁丁梁敬青谷楠楠等.长链非编码 在卵巢癌增殖和侵袭中的作用机制.国际妇产科学杂志():.():.周璐雅汪晓曼朱怡恬等.血清 、与组织 联合检测对卵巢癌早期筛查和诊断的临床价值.临床肿瘤学杂志():.():.:.:.:.():.():.:.():.刘鑫夏继珍柳英兰.循环血液外泌体 在卵巢癌发生发展中作用及其诊断价值的研究进展.现代肿瘤医学():.赵 达等 通过竞争性结合机制调控卵巢癌细胞生物学行为的作用和机制 .():.():.():.():./.():.闫丹措逯艳艳刘芝兰等.通过调节 /轴对人胃癌细胞增殖凋亡和侵袭的影响.河北医学():./.():.司刚司贞钟国南等.在乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞中的表达及作用机制.山西医科大学学报():.():.陈剑.宫颈癌患者血清 和 表达水平及与预后的关系.现代实用医学():.():./.():.(编校:蔺玥)通过泛素化修饰 调控肝癌细胞糖酵解机制的研究唐津天唐润娟薛 峰易 超黎旺红刘 晨新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆胰外科新疆 乌鲁木齐 新疆医科大学第二附属医院康复科新疆 乌鲁木齐【摘要】目的:探究 通过泛素化修饰 调控肝癌细胞糖酵解的机制 方法:和 数据库分析 基因及蛋白表达水平并结合病人生存状态进行相关性分析 构建 和 细胞株细胞能量代谢仪检测两组细胞胞外酸化率和耗氧率并测定细胞葡萄糖吸收率、乳酸产生量、水平 免疫共沉淀验证 和 在、细胞中相互作用免疫荧光检测 和 共定位 免疫共沉淀检测在/细胞中敲低/过表达 后 的泛素化修饰水平体外酶催化反应检测在/细胞中敲低/过表达 后 酶活性 小室法检测 和 细胞侵袭和迁移能力 皮下移植瘤实验检测 和 细胞体内成瘤能力 结果:和 数据库分析发现 在肝癌组织中 及蛋白表达水平均升高高 表达预示差的患者生存状态 表达水平与糖酵解通路相关 性 高 敲 低 可 抑 制 胞 外 酸 化 率 提 高 耗 氧 率 细 胞 葡 萄 糖 吸 收 率(.)(.)、乳酸产生量(.)(.)、水平(.)(.)均显著下调 与 在 细胞中相互作用且蛋白共定位 抑制后 细胞中 泛素化水平升高 酶活性降低在 细胞中表达 下调 蛋白泛素化修饰水平提高 酶活性 敲低抑制细胞侵袭能力(.)、迁移能力(.)抑制细胞体内成瘤体积(.)(.)和重量(.【收稿日期】【修回日期】【基金项目】新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(编号:)【作者简介】唐津天()男新疆乌鲁木齐人副主任医师博士主要从事肝胆胰良恶性肿瘤的外科诊疗研究 :.现代肿瘤医学 年 月 第 卷第 期 .