circCSNKIG1靶向miR-1180-5p对乳腺癌细胞生物学特性的影响.pdf

现代肿瘤医学2 0 2 3年10 月第31卷第19 期回论著豆【Original Article基础研究?【Ba s ic Re s e a r c h MODERN ONCOLOGY,Oct.2023,VOL.31,No.193529.circCSNKIG1靶向 miR-1180-5p 对乳腺癌细胞生物学特性的影响孙小12.34,刘燕,曹旭 12.341天津医科大学肿瘤医院，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津30 0 0 6 0；天津市肿瘤防治重点实验室，天津30 0 0 6 0；3天津市恶性肿瘤临床医学研究中心，天津30 0 0 6 0；4乳腺癌防治教育部重点实验室，天津300060；天津市中医药研究院附属医院药学院，天津30 0 131【摘要】目的：探讨circCSNKIG1靶向miR-1180-5p对乳腺癌细胞生物学特性的影响。方法：RT-qPCR分析circCSNKIGI和miR-1180-5p在乳腺癌组织、癌旁组织中的表达。分别转染 si-circCSNKIG1、pcDNA-circCSNKIG1、m i R-118 0-5p 模拟物、si-circCSNKIG1+anti-miR-1180-5p 及相应的对照(si-NC、p c D NA、m i R-NC 和 si-circCSNKIG1+anti-miR-NC)至 MDA-MB-231 细胞,利用划痕愈合、CCK-8、T r a n s w e ll、集落形成实验检测细胞划痕愈合率、活力、侵袭数以及克隆数。荧光素酶报告基因法分析circCSNKIG1和miR-1180-5p靶向关系。结果：和癌旁组织相比,circCSNKIG1在乳腺癌组织中的表达高而miR-1180-5p表达低（P0.05）。干扰circCSNKIG1表达显著降低细胞光密度（OD）值、侵袭数、克隆数以及划痕愈合率(P0.05)。过表达miR-1180-5p显著降低细胞OD值、侵袭数、克隆数以及划痕愈合率（P0.05）。c i r c CSNK IG 1靶向miR-1180-5p，且circCSNKIG1可以负调控miR-1180-5p表达。下调miR-1180-5p表达显著逆转干扰circCSNKIG1对MDA-MB-231细胞OD值、侵袭数、克隆数以及划痕愈合率的影响（P0.05）。结论：干扰circCSNKIG1通过促进miR-1180-5p表达来抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。【关键词】乳腺癌;circCSNKIGl;miR-1180-5p;增殖;迁移；侵袭【中图分类号】R737.9【文章编号】16 7 2-4992-(2 0 2 3)19-352 9-0 6Effect of circCSNKIG1 targeting miR-1180-5p on the biological characteristics of breastcancer cellsSUN Xiaou-23.,IU Yan,CAO Xuchn-23.Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,National Clinical Research Center for Cancer,Tianjin 300060,China;KeyLaboratory of Cancer Prevention and Therapy,Tianjin 300060,China;Tianjin s Clinical Research Center for Cancer,Tianjin300060,China;Key Laboratory of Breast Cancer Prevention and Therapy,Tianjin Medical University,Ministry of Education,Tianjin300060,China;Tianjin Academy of Traditional Chinese Medicine Afiliated Hospital,College of Pharmacy,Tianjin 300060,China.Abstract】O b j e c t i v e:T o e x p l o r e t h e e f f e c t o f c i r c CSNK IG 1 t a r g e t i n g mi R-118 0 -5p o n t h e b i o l o g i c a l c h a r a c t e r-istics of breast cancer cells.Methods:Expression of circCSNKIGl and miR-1180-5p in breast cancer tissues andadjacent tissues was detected by RT-qPCR.si-circCSNKIG1,pcDNA-circCSNKIG1,miR-1180-5p mimic,si-circCSNKIG1+anti-miR-1180-5p and their corresponding negative controls(si-NC,pcDNA,miR-NC and si-circCSNKIG1+anti-miR-NC)were transfected into MDA-MB-231 cells respectively.And then the woundhealing,CCK-8,Transwell,and colony formation assays were applied to detect the healing rate,viability,invasionsnumber and clone number.Luciferase reporter gene method was used to determine the targeting relationship betweencircCSNKIG1 and miR-1180-5p.Results:Compared with adjacent normal tissues,circCSNKIG1 expression was【收稿日期2023 02-10【修回日期】2023-06-26【基金项目】国家自然科学基金（编号：8 2 2 7 42 2 1）；天津市医学重点学科（专科）建设项目（编号：TJYXZDXK-009A）【作者简介】孙小虎（198 6 一），男，天津人，博士，主治医师,研究方向：乳腺癌细胞增殖、侵袭、转移的生物学机制。E-mail:tiger_【通信作者】曹曹旭晨（196 3一），男，天津人，博士，教授，主任医师，研究方向：乳房恶性肿瘤疾病发生、发展机制及分子信号通路的研究。E-mail:caoxuchen 【文献标识码】AD0I:10.3969/j.issn.1672-4992.2023.19.0013530higher and miR-1180-5p expression was lower in breast cancer tissues(P 0.05).Interference with the expressionof circCSNKIGl significantly reduced the cell optical density(OD)value,invasion numbers,clone numbers andscratch healing rate(P0.05).Overexpression of miR-1180-5p significantly reduced the cell OD value,invasionnumbers,clone numbers and scratch healing rate(P 0.05).circCSNKIG1 targeted miR-1180-5p,and cir-cCSNKIG1 could negatively regulate miR-1180-5p expression.Downregulating of miR-1180-5p significantly re-versed the effect of interfering with circCSNKIG1 on the OD value,invasion numbers,clone numbers and scratch heal-ing rate(P0.05).Conclusion:Interference with circCSNKIG1 inhibits breast cancer cell proliferation,migrationand invasion via increasing miR-1180-5p expression.Key words breast cancer,circCSNKIG1,miR-1180-5p,proliferation,migration,invasion2020年，全球女性乳腺癌新发病例2 2 6 万例,死亡病例超过6 8 万例。尽管根治性手术和辅助治疗取得了良好成绩，但乳腺癌的死亡率仍然很高,这主要与其转移率高、复发频繁、化疗耐药性相关2 。确定乳腺癌进展和转移机制有助于制定更有效的治疗策略。环状RNA（c i r c RNA）是共价闭合单链环状转录本,其通过与微小RNA（m i RNA)或其他分子结合抑制其功能,在转录或转录后水平介导基因表达3。circRNA已在乳腺癌等多种类型癌症中显示异常表达，参与肿瘤进展、转移、耐药过程4-5。既往的研究显示circCSNKIG1在结直肠癌组织中高表达,且发挥促癌作用6 。在本研究,我们发现circCSNKIG1在乳腺癌组织中存在高表达，但是其在乳腺癌进程中的作用尚不清楚。miRNA是一种转录后基因调节剂,其通过负向调节靶基因表达参与乳腺癌进展的多个途径7 。通过生物信息学分析，我们发现circCSNKIG1与miR-1180-5p有潜在结合位点。既往的研究指出miR-1180-5p在膀胱癌中低表达,且作为抑癌因子调控癌症进程8 。在本研究,我们发现miR-1180-5p在乳腺癌组织中显著低表达。然而，circCSNKIG1是否靶向抑癌因子miR-1180-5p,进而调节乳腺癌进展尚不清楚。因此,本研究提出了circCSNKIG1靶向miR-1180-5p调节乳腺癌进展的假设并进行了验证。1材料与方法1.1组织收集于2 0 2 1年0 1月至2 0 2 2 年0 6 月在我院招募45例乳腺癌患者，收集他们的乳腺癌组织和匹配的癌旁组织。所有样品离体后在液氮中迅速冷冻，然后保持在8 0。所有患者均未接受术前治疗。每位受试者均签署知情同意书,本研究程序符合赫尔辛基宣言指导原则。1.2主要试剂总RNA提取试剂盒购自北京索莱宝生物公司；miRNA反转录试剂盒、高容量cDNA反转录试剂盒购自北京全式金生物公司；SYBRGreenPCR试剂盒购自大连takara公司；si-RNA、m iRNA 模拟物、anti-miRNA、p c D NA、荧光素酶报告质粒由南京金斯瑞生物公司设计并合成；Transwell小室购自南京迅贝生物公司；N钙黏蛋白（Nc a d h e r in）兔多抗（FNa b 0 556 9）、E-c a d h e r i n 鼠多抗（FNab10112）、磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）鼠多抗（FNab03343）购自武汉菲恩生物公司；CCK8 试剂盒、羊抗兔IgG（A 0 2 0 8）、羊抗鼠IgG（A 0 2 16）购自上海碧云天生物公司。1.3 RT-qPCR 分析 circCSNKIG1 和 miR-1180-5p 的表达采用总RNA提取试剂盒从组织样本中分离总RNA，然孙小虎，等circCSNKIG1靶向miR-1180-5p对乳腺癌细胞生物学特性的影响Modern Oncology 2023,31(19):3529-3534后应用反转录试剂盒合成cDNA，最后用SYBRGreen进行RT-qPCR。1.4细胞培养和分组MDA-MB-231细胞在补充有10%胎牛血清的DMEM中于37、含5%CO02、饱和湿度的培养箱中孵育。将对数期MDA-MB-231细胞110 4个/孔接种2 4孔板，待细胞达到6 0%汇合时，用Lipo2000将0.4g质粒或40 nmol/L寡核苷酸转染至细胞,根据转染物不同分为 si-circCSNKIGI 组、pcDNA-circCSNKIGl 组、miR-1180-5p 组、si-circCSNKIG1+anti-miR-1180-5p 组、si-NC 组、pcDNA组、miR-NC组和 si-circCSNKIGl+anti-miR-NC 组。48 h 后,通过 RT-qPCR检测转染结果,并进行进一步实验。1.5CCK-8和集落形成实验检测细胞增殖CCK-8法:将转染细胞消化取10 0 L(3103个细胞)接种于96 孔板。48 h后，更换新鲜培养基并添加CCK-8试剂继续孵育2 h。最后用酶标仪检测450 nm处的光密度(OD)值。集落形成实验：将转染细胞以50 0 个/孔接种于6孔板,37 培养箱孵育12 14d直到出现细胞集落。用甲醇固定细胞集落，用0.5%结晶紫染色。在显微镜下统计集落数量（大于50 个细胞）。1.6划痕愈合实验检测细胞迁移将转染细胞接种于6 孔板（110 3个/孔）,培养细胞至90%汇合时用无菌移液管的尖端划伤单层细胞，然后用PBS洗涤两次以去除细胞碎片。置于37 培养箱孵育，在0 h和24h时将6 孔板置于显微镜下拍照，测定划痕宽度计算划痕愈合率(%)。1.7Transwell法检测细胞侵袭转染的细胞(110)经无血清培养基(2 0 0 L)重悬后接种在包被基质胶的上室，然后在下室加人6 0 0 L完全培养基。培养2 4h后，下室细胞用4%多聚甲醛固定并用0.1%结晶紫染色。最后，在显微镜下拍照并统计侵袭的细胞数量。1.8蛋白质印记检测N-cadherin和E-cadherin蛋白水平用RIPA缓冲液提取细胞蛋白质,每组取2 5g通过聚丙烯酰胺凝胶分离并转移到PVDF膜上。膜用5%脱脂牛奶在室温下封闭1h,PBST洗涤后,在4下用1:2 0 0 0 稀释的N-cadherin、E-c a d h e r i n、G A PD H 一抗探测膜过夜。再次用PBST洗涤膜，然后加人1:30 0 0 稀释的羊抗兔IgG孵育1h。膜用增强化学发光试剂处理，然后使用ImageJ软件分析蛋白的灰度值。现代肿瘤医学2 0 2 3年10 月第31卷第19期1.9双荧光素酶报告实验用StarBase 预测circCSNKIG1和miR-1180-5p的潜在互补序列。将含有miR-1180-5p结合位点的circCSNKIG1野生型序列扩增并插入pmirGlO荧光素酶报告载体，产生野生型质粒（WTc i r c CSNK IG 1）。同时，将circCSNKIG1突变序列插人到pmirGLO载体以生成突变型质粒(MUT-circCSNKIG1）。将上述报告质粒分别与miR-NC或miR-1180-5p模拟物共转染到MDA-MB-231细胞，最后测量相对荧光素酶活性。1.10 统计学分析数据以xs表示，用SPSS17.0进行统计学分析。每次检测设置3个复孔，实验独立重复3次。组间比较采用独立样本t检验或单因素方差分析和LSD-t检验。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1circCSNKIG1和miR-1180-5p在组织中的表达和癌旁组织相比,在乳腺癌组织中circCSNKIG1表达高而miR-1180-5p表达低(P0.05)(表1)。表1circCSNKIC1和miR-1180-5p在组织中的表达n=45)Tab.1The expression of circCSNKIG1 and miR-1180-5p in tissues(xs,n=45)GroupsAdjacent normal tissuesBreast cancer tissuestP注：与癌旁组织比较，*P0.05。Note:Compared to adjacent normal tissues,*P0.05.2.2干扰circCSNKIG1表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响MDA-MB-231细胞分别转染 si-NC 和si-circCSNKIG1。结果显示，在si-circCSNKIG1组中，circCSNKIG1的表达水Tab.3Effect of interference of circCSNKIG1 expression on breast cancer MDA-MB-231 cell migration and invasion(x s,n=9)Groupssi-NCsi-circCSNKIG1tP注;与si-NC 比较,*P0.05。Note:Compared to si-NC group,*P0.05.2.4circCSNKIG1靶向调控miR-1180-5p 的表达StarBase在线分析显示miR-1180-5p与circCSNKIG1序列存在连续互补位点（图2）。接着，我们利用双荧光素酶分析实验确定miR-1180-5p与circCSNKIG1之间的互作关系。结果显示,WT-circCSNKIG1和miR-1180-5p模拟物共转染组MDA-MB-231细胞相对荧光素酶活性显著低MODERN ONCOLOGY,Oct.2023,VOL.31,No.19平、OD值、克隆形成数均显著低于si-NC组（P0.05)(表2)。表2 干扰circCSNKIGI表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响(xs,n=9)Tab.2Effect of interference of circCSNKIC1 expression on breast cancerMDA-MB-231 cell proliferation(xs,n=9)Groupssi-NCsi-circCSNKIG1tP注：与si-NC比较，*P0.05。Note:Compared to si-NC group,*P0.05.2.3干扰circCSNKIG1表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响si-circCSNKIG1组 MDA-MB-231 细胞 N-cad-herin蛋白水平、划痕愈合率、侵袭数显著低于si-NC组(xs,（P 0.0 5）,E-c a d h e r i n 蛋白水平显著高于 siNC组（P0.05）,见图1和表3。circCSNKIC1miR-1180-5p1.00 0.121.00 0.064.46 0.32*0.38 0.04*67.91457.6760.0000.000表3干扰circCSNKIG1表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响（xs,n=9）Scratch healing rate(%)68.38 6.2826.44 2.17*18.9360.000 3531OD valuesClonecircCSNKIG1(450 nm)1.00 0.001.04 0.070.24 0.03*0.54 0.05*76.00017.4370.0000.000E-cadherinN-cadherinGAPDH图1干扰circCSNKIG1表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移侵袭相关蛋白表达的影响Fig.1Effect of interference of circCSNKIG1 expression on breast cancerMDA-MB-231 cell migration and invasion-related protein ex-pressionInvasion numbersE-cadherin protein117.48 11.070.25 0.0351.58 5.32*0.69 0.05*16.09722.6380.0000.000于WT-circCSNKIG1和miR-NC共转染组(0.37 0.0 3vs0.98 0.07,t=24.029,P0.05),而 MUT-circCSNKIG1 和miR-1180-5p模拟物共转染组MDA-MB-231细胞相对荧光素酶活性与 MUT-circCSNKIG1 和 miR-NC共转染组比较差异无统计学意义（0.9 7 0.0 5vs0.990.06,t=0.768,P=0.454)。另外,miR-1180-5p在 pcDNAnumbers87.73 7.2542.95 4.13*16.1010.000N-cadherin protein0.56 0.040.16 0.02*26.8330.0003532-circCSNKIG1组表达低（P0.05）,而在 si-circCSNKIG1组表达高（P0.05）（表4）,表明circCSNKIG1负向调控miR-1180-5p 的表达。WT-circCSNKIG1miR-1180-5pMUT-circCSNKIG1 5cagccagAUUAUAAGUAACGa3图2 circCSNKIG1含有miR-1180-5p互补序列Fig.2circCSNKIG1 contained the miR-1180-5p complementary se-quence表4（circCSNKIGl负向调控miR-1180-5p表达（xs,n=9)Tab.4circCSNKIG1 negatively regulated miR-1180-5p expression(xs,n=9)GroupspcDNApcDNA-circCSNKIG1si-NCsi-circCSNKIG1FP注：与pcDNA组比较，*P0.05;与si-NC组比较,#P0.05。Note:Compared to pcDNA group,*P 0.05.Compared to si-NC group,#P0.05.2.5miR-1180-5p过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响MDA-MB-231细胞转染miR-NC或miR-1180-5p。结果显示,miR-1180-5p组中,miR-1180-5p表达表5miR-1180-5p过表达影响乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭（xs,n=9）Tab.5 Overexpression of miR-1180-5p affects the proliferation,migration and invasion of breast cancer MDA-MB-231 cellsE-cadherinGroupsmiR-1180-5pmiR-NC1.00 0.00miR-1180-5p3.48 0.31*t24.000P0.000注:与miR-NC组比较,*P0.05。Note:Compared to miR-NC group,*P0.05.ON-Iu-SNKIGItE-cadherinN-cadherinGAPDH图4下调miR-1180-5p表达逆转了千扰circCSNKIG1表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭相关蛋白表达的作用Fig.4Downregulation of miR-1180-5p reversed the effect of cir-cCSNKIG1 interference on the expression of migration-invasionrelated proteins in breast cancer MDA-MB-231 cells孙小虎，等circCSNKIG1靶向 miR-1180-5p对乳腺癌细胞生物学特性的影响水平和E-cadherin蛋白水平显著高于miR-NC组（P0.05）,而细胞OD值、克隆形成数、N-cadherin蛋白水平、划痕愈合率、侵袭数显著低于miR-NC 组（P0.05）,见图3和表5。5cagccagGGCCUAGUGGGUCa33auaagggCCGGCCCACCCAGg5miR-1180-5p1.00 0.000.45 0.04*0.97 0.063.24 0.33#487.1620.000OD values(450 nm)1.06 0.060.65 0.05*15.7490.000E-cadherinN-cadherinGAPDH图3miR-1180-5p过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭相关蛋白表达的影响Fig.3Effect of miR-1180-5p overexpression on the expression of mi-gration and invasion related proteins in breast cancer MDA-MB-231 cells2.6下调miR-1180-5p 表达逆转了干扰 circCSNKIG1表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的作用为了进一步证实circCSNKIG1通过miR-1180-5p调控乳腺癌恶性进程,MDA-MB-231细胞共转染si-circCSNKIG1和anti-miR-1180-5p。结果显示,si-circCSNKIG1+anti-miR-1180-5p组中,miR-1180-5p表达水平、E-cadherin蛋白水平显著低于 si-circCSNKIGl+anti-miR-NC 组（P0.05），而细胞OD值、克隆形成数、N-cadherin蛋白水平、划痕愈合率、侵袭数显著高于 si-circCSNKIGl+anti m i R-NC 组(P0.05),见图4和表6。(xs,n=9)CloneScratch healingnumbersrate(%)89.27 6.5765.75 6.1353.55 4.62*34.28 3.03*13.34213.8070.0000.0003讨论circRNA在不同物种中广泛表达，由于其高稳定性、种类丰富、进化保守、特异性表达模式、可特异性调控肿瘤进展，circRNA作为肿瘤生物标记物和治疗靶点具有明显优势9-10 。例如,circ_001783表达水平对乳腺瘤患者预后具有预测作用。circ_100395表达水平与乳腺癌的肿瘤分期、肿瘤大小呈负相关,过表达circ_100395可削弱乳腺癌细胞的增殖和迁移能力12 。circ_0025202 表达水平与乳腺癌组织学分级呈负相关，过表达circ_0025202能抑制乳腺癌肿瘤生长,逆转它莫西芬耐药13。本研究检测到 circCSNKIG1在乳腺癌组织中表达上调，干扰circCSNKIG1表达显著降低MDA-MB-231细胞的活力和克隆能力,证实干扰Invasionnumbers118.91 12.5060.01 6.31*12.6190.000N-cadherinproteinprotein0.24 0.020.58 0.040.62 0.05*0.25 0.02*21.16922.1370.0000.000现代肿瘤医学2 0 2 3年10 月第31卷第19 期circCSNKIG1表达的抗增殖作用，这与QIANG等14 报道circCSNKIGl在胃癌中的功能一致。Ec a d h e r in 是一种细胞间黏附分子，其可结合连环蛋白并与细胞骨架肌动蛋白相互作用,参与维持细胞极性和上皮组织完整性,但E-cad-herin表达缺失导致细胞间连接改变,进而增加肿瘤细胞侵袭转移能力15-17 。N-cadherin 是间充质标志蛋白,其表达增加可诱导上皮间质转化（EMT）,Ec a d h e r i n 蛋白表达降低、N-cadherin蛋白异常表达与乳腺癌发生、浸润转移均存表6 下调miR-1180-5p表达逆转了干扰circCSNKIG1对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响（xs,n=9）Tab.6 Downregulation of miR-1180-5p reversed the effects of circCSNKIG1 interference on the proliferation,migration and invasion of breast cancerMDA-MB-231 cells(xs,n=9)Groupssi-circCSNKIG1+anti-miR-NCsi-circCSNKIG1+anti-miR-1180-5pP注:与 si-circCSNKIGl+anti-miR-NC 组比较,*P0.05。Note:Compared to si-circCSNKIG1+anti-miR-NC group,*P0.05.circRNA可通过吸附miRNA、与RNA结合蛋白结合、编码蛋白等多种机制发挥生物学功能,其中circRNA和miRNA相互作用在肿瘤进展中的作用被广泛报道19-2 0 。已有研究报道circCSNKIG1分别靶向miR-455-3p、m i R-7 58 来促进结直肠瘤、胃瘤进展6.14。本研究发现乳腺瘤组织中miR-1180-5p表达降低，且miR-1180-5p被证实为circCSNKIG1的直接靶点。研究指出miR-1180-5p能显著上调前列腺癌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)表达从而抑制癌细胞的恶性生物特性2 1。本研究中过表达miR-1180-5p可抑制MDA-MB-231细胞活力和克隆能力，抑制细胞迁移和侵袭，并增加E-cadherin蛋白水平降低N-cadherin蛋白水平。过表达miR-1180-5p与干扰circCSNKIG1表达的抗乳腺癌效果一致,且miR-1180-5p表达水平受到circCSNKIC1的负性调控，这提示乳腺癌中存在circCSNKIG1/miR-1180-5p调控网络。下调miR-1180-5p表达显著减弱干扰circCSNKIG1表达对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响,这表明circCSNKIG1通过靶向miR-1180-5p促进乳腺癌细胞恶性生物学特性。综上所述,乳腺癌中circCSNKIG1高表达,miR-1180-5p低表达。干扰circCSNKIG1通过促进miR-1180-5p表达来抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。这些发现揭示了乳腺癌中的circRNA/miRNA调控网络，为乳腺癌治疗提供潜在可用靶点。1刘宗超,李哲轩,张阳,等.2 0 2 0 全球癌症统计报告解读J.肿瘤综合治疗电子杂志,2 0 2 1,7(2）：1-13.LIU ZC,LI ZX,ZHANG Y,et al.Interpretation on the report ofglobal cancer statistics 2020J.Journal of Multidisciplinary Canc-er Management(Electronic Version),2021,7(2):1-13.2 ECHEVERRIA GV,POWELL E,SETH S,et al.High-resolutionclonal mapping of multi-organ metastasis in triple negative breastcancer J.Nature Communications,2018,9(1):5079-5089.MODERN ONCOLOGY,Oct.2023,VOL.31,No.19在密切相关性18 。本研究发现干扰circCSNKIG1表达后MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力下降,同时伴随着E-cadherin蛋白水平增加,N-cadherin蛋白水平降低，提示干扰circCSNKIG1表达可能通过影响EMT来抑制乳腺癌细胞迁移侵袭。以上研究揭示了circCSNKIG1在乳腺癌进展中的关键作用,并且提示circCSNKIG1可能是乳腺癌潜在治疗靶点。OD valuesClonesmiR-1180-5p(450 nm)1.00 0.000.53 0.040.27 0.03*0.91 0.06*73.00015.8090.0000.000【参考文献】3533Scratch healingInvasionnumbersrate(%)40.92 4.1124.54 2.6779.67 6.06*557.02 4.95*15.87617.3250.0000.0003LIU X,ZHANG Y,ZHOU S,et al.Circular RNA:An emerging frontierin RNA therapeutic targets,RNA therapeutics,and mRNA vaccinesJ.J Control Release,2022,348:84-94.4ZHOU X,AO X,JIA Z,et al.Non-coding RNA in cancer drug re-sistance:Underlying mechanisms and clinical applications J.Front Oncol,2022,12:951864.5CAI ZR,HU Y,LIAO K,et al.Circular RNAs:Emerging regulatorsof glucose metabolism in cancer J.Cancer Lett,2023,552:215978.6HUANG X,SHEN X,PENG L,et al.circCSNKIG1 contributes tothe development of colorectal cancer by increasing the expression ofMY06 via competitively targeting miR-455-3pJ.Cancer Man-agement and 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