2019—2021年甲型、乙型流感病毒流行病学特点及检测方法比较.pdf

1122DOI:10.16096/J.cnki.nmgyxzz.2023.55.09.023内蒙古医学杂志InnerMongoliaMedJ2023年第55卷第9期2019一2 0 2 1年甲型、乙型流感病毒流行病学特点及检测方法比较郝强，孙韬2 4（1.内蒙古巴彦淖尔市乌拉特中旗疾病预防控制中心，内蒙古巴彦淖尔2.内蒙古医科大学第二附属医院急诊科，呼和浩特0 10 0 10)摘要目的探讨乌拉特中旗甲型、乙型流感病毒的流行病学特征,并比较qPCR法和胶体金法两种方法检测甲型、乙型流感病毒检测结果的一致性。方法选取2 0 19年12 月至2 0 2 1年3月采集的32 2 例疑似流感样患者进行甲型、乙型流感病毒抗原及病毒核酸检测，并对甲型、乙型患者的年龄、性别、时间等进行描述性分析，评估qPCR法和胶体金法诊断甲型、乙型流感病毒的一致性、灵敏性、特异性。结果32 2 例疑似患者中，检出甲型流感病毒不同性别阳性率差异无统计学意义（=0.001,P=0.980),乙型流感病毒不同性别阳性率差异无统计学意义（x=0.020,P=0.888);不同年龄组甲型流感阳性率差异有统计学意义（x=13.470,P=0.0090.05)。甲型、乙型流感阳性患者（在收集历年的1月份）感染率最高。针对甲型流感病毒，qPCR法与胶体金法的检测结果比较，差异有统计学意义（x=166.523,P=0.0000.05)，两种方法检测结果一致性一般(Kappa=0.682)。针对乙型流感病毒，qPCR法与胶体金法的检测结果比较，差异有统计学意义(x=60.154,P=0.0000.05)，两种方法检测结果一致性较差(Kappa=0.315)。结论12月份至1月份为流感高发季节，甲型、乙型流感在青年人群发病率较高，qPCR法与胶体金法检测结果一致性较差。【关键词】甲型流感；乙型流感；流行病学；实时荧光定量聚合酶链反应；胶体金免疫层析【中图分类号】R183【文献标识码】B【文章编号】10 0 4-0 951(2 0 2 3)0 9-112 2-0 4流行性感冒（Influenza）简称流感，是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，也是全球首个监测的传染病。据报道，流感每年会导致全球约3万5万例重症流感病例和约2 9 0 万10 0 0 万例呼吸道死亡病例 1,特别是2 0 192 0 2 0 年在美国出现了近10 年来最严重的流感季，至少2 2 0 0 万人感染,约1.2 万人死亡 2。由于流感病毒为RNA病毒，病毒变异速度相对较快，易发生突变，且潜伏期短，传染性较强，一旦感染流感病毒，会严重降低患者的生活质量，甚至威胁生命健康 3。本次研究通过对2 0 19 年12 月至2 0 2 1年3月采集的32 2 例疑似流感样患者进行甲型、乙型流感病毒抗原及病毒核酸检测，并对甲型、乙型患者的年龄、性别、检测方015000;法等进行分析研究，为今后甲型、乙型流感的早期诊断、早期隔离、早期治疗等防控工作提供参考。1资料与方法1.1一般资料将2 0 19 年12 月至2 0 2 1年3月有流感样症状的流感疑似患者32 2 例纳入研究并收集其口咽拭子标本送至疾控中心检验科进行检测。其中，男17 3例，女149例；年龄（35.96 12.57)岁，最小年龄2 岁,最大年龄8 2 岁。流感样症状的定义：(1)体温38；(2)有头痛、咳嗽、喉咙痛、流沸、乏力中的一项症状。本研究所有纳入研究者及其监护人均对本研究知情同意。1.2仪器与试剂全自动核酸提取仪EXM6000（中元汇吉生物技术股份有限公司）；全自动PCR分*【基金项目内蒙古医科大学高等教育教学改革研究项目（编号：NYJXGG2022062）；内蒙古医科大学第十二届高等学校教坛新秀奖（编号：NYJTXX202213）通信作者E-mail:内蒙古医学杂志InnerMongoliaMedJ2023年第55卷第9期析系统Gentier96E(西安天隆科技有限公司）；甲型/乙型流感病毒核酸检测试剂盒购自北京卓诚惠生生物科技有限公司，流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法)购自标准诊断(韩国)股份有限公司。1.3方法核酸提取与qPCR法检测采用甲型/乙型流感病毒核酸检测试剂盒，胶体金法检测采用流感病毒抗原检测试剂盒，具体操作步骤和检测结果的判读严格按照试剂盒说明书进行。qPCR法检测在3h内完成，胶体金法检测在2 0 min内完成。采用测序法对检测结果进行验证，测序法作为结果判断的“金标准”。1.4统计学方法应用Excel软件进行数据整理和图表绘制。采用SPSS23.0软件进行数据分析。应用描述性流行病学方法描述性别、年龄、时间情况的比例分布情况，对不同性别、年龄、发病时间、qPCR法与胶体金法检测结果的比较采用检验。通过Kappa值评估两种检测方法检测结果的一致性,Kappa0.75提示两种检测方法的结果一致性好，0.40 Kappa0.75提示一致性一般，Kappa0.4提示一致性差。P65岁4225()异20510502019.122.02.0.01202.0.022.020.032.02.0.12202.1.012.021.02(%)乙型流感3017.342617.45815.3845.632526.881320.31614.29514514928261929.4830.2026.9212.6830.1140.6345.24时间（年，月）17.34%（30/17 3）、女性核酸阳性检出率为17.45%(26/149),不同性别阳性率差异无统计学意义(x=0.001,P=0.980)；检出乙型流感病毒阳性病例9 6例（2 9.8 1%，96/32 2），其中男性阳性检出率29.48%（51/17 3）、女性核酸阳性检出率为30.2 0%（45/149)，不同性别阳性率差异无统计学意义（x=0.020,P=0.888),见表1。2.2年龄分布不同年龄组甲型流感阳性率差异有统计学意义（=13.470,P=0.0090.05),其中18 40 岁青年患者占比最多，为2 6.8 8%（2 5/93)；8 17 岁少年患者占比最少，为5.6 3%（4/7 1)。不同年龄组乙型流感阳性率差异有统计学意义(x=18.527,P=0.0010.05)。其中 18 40 岁青年和416 5岁中年患者占比最多，分别为30.11%(28/93)和40.6 3%(2 6/6 4);8 17 岁少年患者占比最少，为12.6 8%（9/7 1)。见表1。2.3时间分布通过检测阳性患者的时间分布特图1甲型流感阳性时间分布图版编号：10 0 4-0 951-（2 0 2 3)0 9-112 3-F11611464-202.019.122.02.0.012.02.0.022.020.032.02.0.122.021.012.02.1.022.021.032.02.1.04时间（年，月）图2 乙型流感阳性时间分布图版编号：10 0 4-0 9 51-（2 0 2 3)0 9-112 3-F111242.4检测结果一致性分析2.4.1甲型流感检测一致性分析qPCR法检出甲型流感病毒阳性55例（17.0 8%，55/32 2），胶体金法检出甲型流感病毒阳性31例（9.6 3%，31/32 2)；将测序法作为检测结果的“金标准”，qPCR法检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为96.43%，9 9.6 2%，9 8.18%和9 9.2 5%，胶体金法检测灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为55.36%，10 0%，10 0%和91.41%，见表2。qPCR法与胶体金法的检测结果比较，差异有统计学意义(x=166.523,P=0.0000.05),两种方法检测结果一致性一般(Kappa=0.682),见表3。表2 两种检测方法与测序法检测甲型流感病毒检测结果一致性分析测序法(例)应用方法阳性QPCR阳性阴性胶体金法阳性阴性合计表3胶体金法与qPCR检测甲型流感病毒检测结果一致性分析胶体金法qPCR(例)阳性阴性（例）阳性31阴性25合计56注：*P0.052.4.2乙型流感检测结果一致性分析qPCR法检出乙型流感病毒阳性97 例（30.12%，97/32 2)，胶体金法检出乙型流感病毒阳性病例2 4例（7.45%，24/322)；将测序法作为检测结果的“金标准”，qPCR法检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为98.96%，99.12%，97.94%和99.56%，胶体金法检测灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为2 5.0 0%，10 0%，10 0%和7 5.8 4%，见表4。qPCR法与胶体金法的检测结果比较,差异有统计学意义(x=60.154,P=0.0000.05),两种方法检测结果一致性较差(Kappa=0.315),见表5。内蒙古医学杂志InnerMongolia MedJ2023年第55卷第9期表4两种检测方法与测序法检测乙型流感病毒检测结果一致性分析测序法(例)应用方法阳性qPCR阳性阴性胶体金法阳性阴性合计表5胶体金法与qPCR检测乙型流感病毒检测结果一致性分析qPCR(例)合计胶体金法mp?阳性阴性（例）阳性24合计（例）阴性54122653102526656266合计mp2031266291266322合计（例）阴性95212242407222696226024阴性7355合计267注：*P0.05),与相关研究结果一致 4。本研究发现不同年龄组甲型、乙型流感阳性率差异有统计学意义,在确诊的甲型流感病毒感染者多以18 40 岁青P值年患者为主，416 5岁中年患者次之；乙型流感病毒感染者多以41岁以上人群居多，特别是6 5岁以上老年患者。王飞等报道甲型、乙型流感阳性率在166.5230.000*9722524298322P值2252989722503岁较高 5。王晴等报道5 14岁组阳性率最高 6,7。本组发病年龄与上组报道不一致,可能与学生接种疫苗有关 8。另外提示中青年因学习、工作、社交等，流动性大，接触面广，受感染的风险较其他人群高。而老年群体因一些基础疾病和抵抗力低等因素，前往医院等高风险场所活动，易感性增加。因此，提示中青年及老年群体在日常生活中应加强身体锻炼，提高自身抵抗力，特别是老年群体应及时接种流感疫苗，有效降低流感感染，减少重症和死亡风险。通过对不同时间阳性病例数的统计显示，12月份至次年的3月份为甲型、乙型流感高发季节，符合我国北方地区流感流行特点 9,10。其中，乙型流感病毒感染阳性病例多于甲型流感病毒，这与一些研究结果不一致 11,可能与乙型流感的发病趋势持32260.1540.000*内蒙古医学杂志InnerMongoliaMedJ2023年第55卷第9期续上升、不同地区的流行情况以及样本例数较少等因素有关。目前，针对甲型、乙型流感病毒进行靶向检测的技术有好多种，主要包括病毒分离培养法、胶体金法、qPCR法、测序法、芯片技术等,应用较广泛的是胶体金法和qPCR法,而测序技术检测多被实验室作为“金标准”方法。但由于测序技术检测成本较高、检测周期长，难以在常规检测中进行大规模推广使用。本次检测结果显示，针对甲型流感病毒和乙型流感病毒的检测，胶体金法检灵敏度分别为55.36%和25.00%，说明胶体金法不足以区分流感与流感样疾病 12。但特异度很高,说明假阳性病例出现次数很少，可以很好的排除未感染的人群。另外，有国外研究表明，病毒抗原检测法应用在检测季节性流感病毒感染方面通常表现出高特异度(95%99%）,与本研究结果一致 13。qPCR法的灵敏度达到95.0 0%以上,远高于胶体金法，造成这种差距的可能原因是qPCR法检测是通过保守区域序列扩增来实现病毒核酸检测的,在流感病毒 HA和 NA核酸序列发生变异时对检测结果影响较小 14。而胶体金法受流感病毒感染初期和后期受免疫清除的影响，抗原表达水平低,导致检测方法失灵 15。所以,qPCR法检测相比于抗原检测具有更早、灵敏度更高的特点。但与qPCR法相比,胶体金法操作简便、检测成本低、检测速度快、无需辅助设备和专门的实验室等特点，对于流感疫情的防控工作也具有重要意义。可以说，对于大规模流感病毒的监测和筛查可应用胶体金法，对于重点人群的确诊和治疗可应用qPCR法。另有研究表明，除qPCR法和胶体金法外，多重PCR法越来越多地应用到呼吸道病毒快速检测过程中，相较于传统的检测手段，多重PCR法具有快速、敏感、简便、覆盖面广、检测效率高等特点，同时还能进行定量分析，但多重荧光PCR法使用的仪器昂贵，对检测环境和人员都有较高的要求 16。不过随着科技发展，相信未来的检测手段准确率会越来越高、时间也会越来越快速，价格越来越低廉。综上所述，了解该地区流感病毒的流行病学特点，对有效降低患病率、减少并发症、防止发生大规模流感爆发具有重要意义。qPCR法与胶体金法在流感病毒检测应用过程中各有优劣，应充分发挥各自优势，整体提升检测能力。本研究也存在一定局限性，采集的不同年龄群体例数有差异，样本量较少，未来的研究中应扩大样本量，对目前的研究结论作进一步的验证。1125参考文献1 IULIANO A D,ROGUSKI K M,CHANG H H,et al.Estimatesof Global Seasonal Influenza-associated Respiratory Mortality:AModelling StudyJ.Lancet,2018,391(10 127):1 2851 300.2MAMUNURRM,ABDINASIRA,AMGADEK,et al.ImprovedCapacity of Influenza Surveillance in the WHO Eastern Mediter-ranean Region:Progress in a Challenging SettingJ.Journal ofInfection and Public Health,2020,13(3):644647.3张智芳，王晓欢，梁小洁，等.流行性感冒 J.中国人兽共患病学报,2 0 2 0,36(7)：593598.4 CHO E B,CHOI S H,CHUNG J W,et al.Usefulness of Na-tional Respiratory Virus Surveillance Data for Clinicians who Man-age Adult PatientsJ.J Med Virol,2018,90(8):1 3041 309.5 王飞，余道军，徐旭栋.杭州地区2 0 18 一2 0 2 1年甲型流感与乙型流感的流行病学分析 J.中国乡村医药，2 0 2 3,30（12：37 38.6王晴，张慕丽，秦颖，等.2 0 11一2 0 19年中国B型流感季节性，年龄特征和疫苗匹配度分析 J.中华流行病学杂志，2 0 2 0，41(11):5.7 杨菲，苟慧芳，罗春花等.2 0 13一2 0 2 2 年四川省剑阁县流感样病例流行病学特征分析 J.预防医学情报杂志，2 0 2 3，39（6）：579584.8冯录召，李中杰.他山之石：流感疫苗高接种率国家的免疫政策和关键要素分析 J.中华预防医学杂志，2 0 19，53（10)：5.9彭质斌，陈涛，康敏等.2 0 17 年夏季全国流感疫情特征分析与风险评估.中国病毒病杂志，2 0 17,7(4)：2 442 51.10陈斌，张俊君，王士峰等.陕西省咸阳市2 0 16 一2 0 2 0 监测年度流感流行病学特征分析J.现代预防医学，2 0 2 1，48（10)：17291733.11谭小华，叶美云，庄雅丽，等.2 0 14一2 0 2 0 年广东省不同型别流感病毒季节性流行特征及变化趋势 J.疾病监测，2 0 2 2，37(1):108114.12 LI X,CHEN J,LIN F,et al.Influenza Colloidal gold Methodand Blood Routine Tests Combination for Rapid Diagnosis of In-fluenza:A Decision Tree-based AnalysisJ.NPJ Prim CareRespir Med,2021,31(1):39.13 VEMULA S V,ZHAO J,LIU J,et al.Current Approaches forDiagnosis of Influenza Virus Infections in HumansJ.Viruses,2016,8:96.14 MA L,LIU Y P,GENG C Z,etal.Undifferentiated Em-bry-onal Sarcoma of Liver in an old Female:Case Report and Reviewof the LiteraurJ.World J Gastroenterol,2008,14(47):7 267-7270.15朱曼，曹国君,许育等.甲、乙型流感病毒两种方法检测结果的一致性分析 J.国际检验医学杂志，2 0 2 3,44（0 4)：42 5一42 9.16李虎虎，王宝强，王原媛，等.多重荧光PCR法和免疫荧光法诊断常见急性呼吸道病毒感染的一致性研究 J.标记免疫分析与临床,2 0 2 2,2 9(9):152 8 1531,156 3.收稿日期】2 0 2 3-0 6-0 1