结核病痰涂片和质量保证专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,结核病痰涂片检验及质量确保,结核病痰涂片和质量保证,第1页,一、痰涂片检验,结核病痰涂片和质量保证,第2页,（一）结核病细菌试验室布局标准,1、结核病细菌学检验要有独立试验室，不得与其它试验室混用，最好为P3级试验室；,2、培养基制备、洗刷等相对洁净操作与涂片镜检、培养前处理、药敏试验等污染操作要有独立分开场所，最好分别在专用房间进行；,结核病痰涂片和质量保证,第3页,3、基层只从事涂片镜检试验室只拥有一间独立房舍情况下相对洁净区（镜检区、登记区）与污染区（涂片、染色区）要有显著区分。,结核病痰涂片和质量保证,第4页,（二）痰标本搜集和运输,干酪痰、血痰或粘液痰为合格标本，量应为3-5毫升。,难以取得合格标本时，也应进行细菌学检验，但应注明标本性状，以供分析结果时参考。,搜集标本容器应采取国家参比室推荐标准痰瓶，或采取直径4厘米、高2厘米广口塑料（或蜡纸）或密闭容器。,结核病痰涂片和质量保证,第5页,容器上应注明与检验单一致病人姓名、编号及日期。,需送上一级试验室检验痰标本应置4冰箱保留，外送前认真查对检验单与痰瓶上标注，放专用冰盒内运输，或用纸袋、塑料袋封扎牢后次序放入包装盒，盒外注明请勿倒置标志。,结核病痰涂片和质量保证,第6页,（三）痰涂片操作流程及显微镜检汇报方式,直接涂片法操作流程：,1、涂痰膜（大小1020），自然干燥,2、复红加热初染5分钟,3、流水冲洗,4、盐酸酒精脱色3分钟(必要时重复脱色，但不要过分）,5、流水冲洗,6、美兰复染30秒,7、流水冲洗,8、自然干燥，镜检,结核病痰涂片和质量保证,第7页,显微镜检汇报方式：,0条/300视野：萋-尼氏抗酸杆菌阴性,1-8条/300视野：实报菌数并重检,3-9条/100视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（+）,1-9条/10视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（2+）,1-9条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（3+）,10条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（4+）,结核病痰涂片和质量保证,第8页,（四）细菌学常规检验注意事项,选择痰标本中脓性、血样、干酪样部分涂片阳性率较高；,一张玻片只涂一份标本，玻片一次性使用，预防交叉污染；,打开痰盒、涂抹痰膜、烧灼接种环时轻易产生气溶胶，应注意正确操作和本身防护；,石炭酸复红初染时必须加温。,结核病痰涂片和质量保证,第9页,常见误差原因,见下表,结核病痰涂片和质量保证,第10页,常见类型,可能原因,提议,假阳性（FP）,1.比如染料沉渣或结晶等被误识为抗酸杆菌,2.原始汇报后着色抗酸杆菌退色,1.对技术人员复训,2.对假阳性涂片重新染色并复检,假阴性（FN）,1.观察涂片视野数量不够,2.镜检技术能力差3.染色操作不规范,4.显微镜存在问题,5染液质量差,1.2.3.对技术人员复训,4.现场检验显微镜状态,5.重新购置质量合格染料并重新配制染液,量化误差（QE）,1.观察涂片视野数量不够,2.阳性涂片分级汇报标准掌握差,3.镜检技术能力差,4.显微镜存在问题,1.2.3.对技术人员复训,4.现场检验显微镜工作状态,结核病痰涂片和质量保证,第11页,(六)废弃标本和污染物处理,废弃标本、痰盒和污染物均须经高压蒸汽灭菌后方能丢弃或清洗；,如需焚烧处理，须置于焚烧炉内彻底焚化。焚化不彻底或暴露焚烧是危险；,专业处理,：,试验操作工作面应以3%石炭酸或其它可靠消毒液擦拭，再用紫外线灭菌灯照射30分钟。,结核病痰涂片和质量保证,第12页,二、痰涂片镜检试验室质量确保,结核病痰涂片和质量保证,第13页,按照世界卫生组织（World Health Organization)和国家结核病防治规划(Nationaltuberculosis programme）要求，在我国已全方面推行DOTS策略或DOTS策略得到良好落实执行地域，为了连续提升结核病试验室痰涂片检验工作效率和可靠性，必须建立我国结核病试验室质量确保系统网络。在试验室内部质量控制基础上，应用试验室间质量检验和评定方法，进行试验室检验系统评价，并经过采取一系列办法改进和不停提升试验室业务总体水平。,结核病痰涂片和质量保证,第14页,（一）室内质量控制,室内质量控制(Quality Control,QC)指试验室内部操作规程、设备和耗材、痰标本搜集、染色剂制备、涂片制备和染色、显微镜维护、显微镜镜检、结果登记和汇报、以及痰片保留等整个过程内部检验和监测。,结核病痰涂片和质量保证,第15页,1、痰标本搜集,（1）容器：采取WHO推荐国际通用螺旋盖痰瓶，或可密封塑料盒、蜡纸盒搜集痰标本（参考规格：直径4厘米，高度2厘米）。痰容器应标明病人姓名、日期、编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）和容器序号1、2、3（1=当日即时痰，2=夜间痰，3=次日晨痰）。,（2）痰标本性质：干酷痰、血痰、粘液痰为合格标本；唾液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检验外，应要求患者重新送检。,结核病痰涂片和质量保证,第16页,（3）初诊病人应搜集3份痰标本（当日即时痰、夜间痰或次日晨痰），治疗中或复诊随访病人按期每次搜集2份痰标本（当日即时痰、当日痰或次日晨痰）。,（4）对当日不能进行涂片检验痰标本，须置于4冰箱保留，注意预防痰液干涸或污染。,结核病痰涂片和质量保证,第17页,2、抗酸染色液制备,（1）有染色液制备配方和配制纪录。,（2）染色液试剂瓶须标明染色液名称、浓度和制备时间。,（3）染色液置于棕色瓶内存放，避光保留。,结核病痰涂片和质量保证,第18页,3、载玻片,（1）新载玻片应经95%乙醇脱脂，检验无划痕后，方可使用。,（2）一张载玻片只能涂抹1份痰标本。,（3）载玻片只允许一次性使用，禁止清洗后重复使用。,（4）载玻片只允许左侧1/3处标注试验室序号。,（5）载玻片正面右侧2/3中央处均匀涂抹成面积为10 20mm卵圆形痰膜。,结核病痰涂片和质量保证,第19页,4、染色,（1）肉眼观察染色后痰膜应呈均匀亮蓝色，无红色斑块。,（2）将染色后玻片放置在报纸上，假如透过痰膜不能分辨报纸上文字，则表明该玻片涂抹过厚。,（3）染色后痰膜脱落部分应小于整个涂抹面积10%。,结核病痰涂片和质量保证,第20页,5、镜检要求,（1）为预防抗酸杆菌交叉污染，禁止油镜头直接接触涂片上痰膜。,（2）仔细观察300视野。,（3）每个工作日，一名镜检人员涂片阅读量不应超出25张。,（4）连续阅读10-20张涂片后，应休息20分钟左右。,（5）采取自查和互查方式，最少抽查复检当日10%涂片，并填写室内质控记录表。,结核病痰涂片和质量保证,第21页,6、登记汇报,（1）登记前应对检验单、标本盒、涂片上标注进行重复查对。,（2）检验后第一张涂片结果，应按要求准确统计在“结核病细菌学试验室登记本”上。,（3）镜检结果汇报应及时发出，方便尽早为临床提供诊疗依据。,结核病痰涂片和质量保证,第22页,7、痰涂片保留,（1）镜检后涂片应及时用浸满二甲苯（分析纯）擦镜纸揭取数次，彻底祛除涂片上镜油。,（2）涂片脱去镜油后，必须再次查对试验室登记本与每张涂片试验序号。,（3）涂片上禁止标识镜检阴、阳性结果。,（4）全部涂片按试验室登记本序号连续排列，存放于玻片盒中。,结核病痰涂片和质量保证,第23页,（5）涂片保留与试验室登记本统计应保持一致。初诊病人第一张涂片存入涂片盒后需预留出两个空位置，以备第二张、第三张涂片检验后放入；随访病人每一张涂片存入涂片盒后需预留出一个空位置，以备每二张涂片检验后放入。,（6）按要求数量保留用于室间质量评定涂片，未经上级质控单位准许不能自行销毁。,（7）装满涂片玻片盒，需用标签注明涂片试验序号区间和日期区间，方便日后盲法复检或现场评价时抽样。,结核病痰涂片和质量保证,第24页,（二）室间质控评定,室间质量评定是依据与其它网络试验室（中间级试验室和中心试验室）比较批量测试和盲法复检结果评价基层试验室能力过程。EQA包含试验室现场评定以评价操作质量而且也包含现场对涂片复读。EQA是国际肺病和防痨联合会描述熟练度检测扩大。,结核病痰涂片和质量保证,第25页,1、现场评定,（1）要求：,国家参比室每年对省级参比室最少进行1次现场评价，同时每省最少抽查一个市及县级结核病试验室,省级参比室每年对所辖地（市）级试验室最少进行1次现场评价，同时每地（市）抽查1-2县级试验室；必要时，对同批量测试或盲法存在问题市、县试验室，适当增加现场评价频率。,市（地）级试验室每年对所辖县（区）试验室每年最少进行2次现场评价。结核病痰涂片和质量保证,第26页,对批量测试或盲法复检存在总是县级试验室必须尽快查找原因，提升涂片镜检质量。,现场督导员应由经验丰富试验室技术人员担任，必须经高一级试验室有资格督导员培训后方可上岗。,现场评价要按本操作细则所列项目次序进行，评价结果可结合当地结核病控制工作考评评选给分。,结核病痰涂片和质量保证,第27页,现场督导员主要责任是经过现场评价发觉问题，提出正确提议处理问题，提升痰涂片镜检质量。,上级试验室对下级进行督导时候，应该查对调查表和被评定试验室实际情况，为此各级调查表应该保留五年以上。,结核病痰涂片和质量保证,第28页,2、检验步骤：现场评价操作步骤,试剂,供给,试验室安全显微镜,用于室间质量确保玻片储存,涂片、染色和镜检,现场复检,督导小组检验和/或复检印象,盲法复检痰片抽样,现场评定概述,结核病痰涂片和质量保证,第29页,2、盲法复检,结核病痰涂片和质量保证,第30页,盲法复检标准：,从各个试验室抽取涂片样品必须是随机选出，并能代表整个试验室操作水平。,负责抽样督导员，必须确保复检技术人员不知道初检结果，以确保盲法复检真实性。,严格按照随机标准抽取涂片，以确保抽取样本在统计学上真正代表被评定试验室整体水平。,涂片初检结果与第一复检者盲法复检结果之间分歧，由第二复检者复检后最终确定。,督导者应及时将复检结果反馈给被督导试验室，以利于涂片技术与质量不停提升。,结核病痰涂片和质量保证,第31页,盲法复检评价：,盲法复检目标不是为了验证某个病人诊疗正确是否，而是评价整个试验室操作水平。评价内容除了涂片镜检结果存在误差之外，还包含检验标本质量（合格标本和不合格标本百分比）、涂抹大不和厚度、染色质量怎样等，方便采取纠正办法，提升试验室工作质量。,结核病痰涂片和质量保证,第32页,谢谢！,结核病痰涂片和质量保证,第33页,