香樟树叶提取物的抗氧化性能研究.doc

香樟树叶提取物的抗氧化性能研究*
周红丽 张学梅
（红河学院理学院2003级化学教育A班 蒙自661100）

摘要：本文以香樟树叶为原料，采用不同的化学方法提取它的主要成分，并进行抗氧化性研究。研究的结果表明，用无水乙醇作提取剂提取的香樟树叶主要成分具有清除∙OH的能力,且与同样条件下同浓度的抗坏血酸的清除∙OH能力相差不大，即用无水乙醇作提取剂提取的主要成分具有很好的抗氧化性能。而用70%的乙醇和水作提取剂提取的香樟树叶主要成分没有清除∙OH的能力，反而还具有一定的氧化性。这说明，用不同的提取剂提取的香樟树叶的主要成分是不同的，从而导致其抗氧化性能也不同。
关键词：香樟树叶、羟自由基、抗氧化、分光光度法

樟树（Cinnamomum camphora）是一种常绿乔木，生长在亚洲、大洋洲的暖温带和亚热带地区[1]。别名香樟、油樟、樟木，属于药用植物。《本草拾遗》记载：味辛、温、无毒；《广西中药志》记载：味辛、性温、有小毒[2]。樟树从根到叶均含有樟油和樟脑，种子可榨油，是制肥皂的良好原料。樟树的叶、枝、根、茎、花、果都富含芳香油，是提炼天然香料的优良树种[1][3]。
据报道，樟树叶的水蒸气蒸馏提取物的主要化学成分有十二烷酸、肉豆蔻酸、十一烷酸、棕榈酸、酮、酯、醛、按叶油素、芳樟醇、樟脑、∂-松油醇、异橙花叔醇等[4][5]。但对樟叶的抗氧化性能研究还处于一个空白。
生理情况下，人体有1%—5%的分子氧通过多种途径产生氧自由基，生物体内产生的自由基主要是O2∙与∙OH及其活性衍生物。过多的氧自由基通过损伤生物大分子，破坏细胞的结构和功能，促使疾病的发生与发展。研究发现，氧自由基与衰老、肿瘤、炎症、动脉硬化、肝和肺疾病等发生密切相关。抗氧化剂由于能清除人体的这些自由基而具有预防癌症、心血管疾病等疾病以及抗衰老的作用。而合成的抗氧化剂如BHA等可导致DNA的损伤及动物恶性肿瘤的发生，其安全性受到质疑，因此高效、安全的天然抗氧化剂的提取及其应用无疑具有重要的意义[6][7]。
我国南方樟树资源丰富，以此为原料研制生产的成本较低，可创造经济及社会效益。本文利用邻二氮菲分光光度法对香樟树叶的不同溶剂提取物进行抗氧化性能研究并与抗坏血酸的抗氧化性能作对比，为香樟树的进一步开发利用奠定基础。
*基金项目：红河学院孵化基金
作者简介：周红丽 红河学院化学教育专业03级毕业生
指导教师：郭亚力 教授
1.1仪器
索氏提取器、电子天平（上海精科天平）、7200型分光光度计（上海龙尼科仪器有限公司）等。
1.2材料
香樟树叶，采自红河学院校园。邻二氮菲、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸亚铁、30%过氧化氢溶液、抗坏血酸等均为国产分析纯。
2．实验方法
2.1试剂的配制
1.000g/L邻二氮菲溶液的配制：称取0.1000g邻二氮菲于小烧杯中，加水并加热溶解（或加乙醇溶解），然后加水定容至100mL[8]。
0.0250mol/L KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液的配制：称取0.8505g磷酸二氢钾和0.8872g磷酸氢二钠溶于水，并加水定容至250mL。
1.000g/LFeSO4溶液的配制：称取0.1000g硫酸亚铁溶于水，并加水定容至100mL，然后加入几根铁钉。
2%过氧化氢溶液的配制：用量筒量取6.7mL30g/L的H2O2用水稀释至100mL。
0.0030g/mL抗坏血酸溶液的配制：称取0.3000g抗坏血酸溶解于水中，并加水定容至100mL。
2.2香樟树叶提取液的制备
用不同的提取剂（无水乙醇、70%乙醇、蒸馏水）来加热回流提取和常温浸泡提取香樟树叶中的抗氧化成分。
2.2.1用无水乙醇作提取剂加热回流提取
把采集来的香樟树叶用清水洗后，再用蒸馏水洗净，然后晾干，把它剪为1cm左右的碎片，称取10.0g放入索氏提取器的滤纸中，在圆底烧瓶中加入110.0mL无水乙醇，在电炉上隔着石棉网加热回流提取100min，倒出提取液，再加入同样的溶剂，进行第二次提取。两次的提取液合并为A液，备用[3]。
2.2.2 用70%乙醇作提取剂加热回流提取
方法与用无水乙醇作提取剂加热回流提取的方法相同，只是把提取剂无水乙醇改为70%的乙醇即可。所得提取液为B液。

2.2.3用蒸馏水作提取剂加热回流提取
方法与用无水乙醇作提取剂加热回流提取的方法相同，只是把提取剂无水乙醇改为蒸馏水即可。所得提取液为C液。
2.2.4用70%乙醇作提取剂常温浸泡提取
把采集来的香樟树叶用清水洗后，再用蒸馏水洗净，然后晾干，把它剪为1cm左右的碎片，称取10.0g放入圆底烧瓶中，加入110.0mL70%乙醇浸泡4天，过滤后得滤液D，备用。
2.2.5用蒸馏水作提取剂常温浸泡提取
方法与用70%乙醇作提取剂常温浸泡提取的方法相同，只是把浸取剂70%乙醇改为蒸馏水即可。所得提取液为E液。
2.3邻二氮菲分光光度法测定抗氧化剂的抗羟基自由基性能
采用邻二氮菲—Fe2+氧化法测定H2O2/Fe2+产生的∙OH，H2O2/Fe2+体系通过Fenton反应产生羟自由基，邻二氮菲—Fe2+水溶液可被羟自由基氧化为邻二氮菲—Fe3+，从而使邻二氮菲—Fe2+呈现的红色变浅，在510nm处的最大吸收峰消失，当体系中存在∙OH清除剂时，可以使A510降低，以A510变化反映抗氧化剂抗羟基自由基性能[6][9]。并定义抗氧化剂对∙OH清除率为：
K=[1-(Ai-Aj)/AC]×100% [10]
式中：Ai—加入2.00mL 1.000g/L邻二氮菲溶液、3.00mL 0.0250mol/L KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液、不同剂量的抗氧化剂溶液、2.00mL 1.000g/LFeSO4溶液和3.00mL 2%过氧化氢溶液反应10min后的吸光度。
Aj—只加入不同剂量的抗氧化剂溶液和相应的提取剂的吸光度。
AC—未加入抗氧化剂，只加入 2.00mL 1.000g/L邻二氮菲溶液、3.00mL 0.0250mol/L KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液、2.00mL 1.000g/LFeSO4溶液和3.00mL 2%过氧化氢溶液反应10min后的吸光度。
2.3.1 对照样品抗坏血酸抗羟基自由基性能测定
依次加入2.00mL 1.000g/L邻二氮菲溶液，3.00mL 0.0250mol/L KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液，分别加入1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL、7.00mL、8.00mL 0.0030g/mL抗坏血酸溶液，然后加入2.00mL 1.000g/LFeSO4溶液，立即混匀，最后加3.00mL 2%过氧化氢溶液，分别加蒸馏水和70%乙醇定容为50 mL，10min后于510nm处测定其吸光度Ai 。再根据公式分别测定吸光度Aj和AC 。
2.3.2 A液的抗羟基自由基性能测定
用95%的乙醇作稀释剂，把A液配制成0.0030g/mL的溶液。实验方法步骤同2.3.1，定容剂用95%的乙醇。
2.3.3 B液的抗羟基自由基性能测定
用70%的乙醇作稀释剂，把B液配制成0.0010g/mL的溶液。实验方法步骤同2.3.1，定容剂用70%的乙醇。
2.3.4 C液的抗羟基自由基性能测定
用蒸馏水作稀释剂，把提取液C液配制成0.0010g/mL的溶液。实验方法步骤同2.3.1，定容剂用蒸馏水。
2.3.5 D液的抗羟基自由基性能测定
用70%的乙醇作稀释剂，把D液配制成0.0010g/mL的溶液。实验方法步骤同2.3.1，定容剂用70%的乙醇。
2.3.6 E液的抗羟基自由基性能测定
用蒸馏水作稀释剂，把提取液E液配制成0.0010g/mL的溶液。实验方法步骤同2.3.1，定容剂用蒸馏水。
3．结果与讨论
3.1结果

把以上抗氧化剂抗羟基自由基性能的测定所得的数据和根据公式计算出抗氧化剂对∙OH清除率的结果列表如下：
3.1.1对照样品抗坏血酸抗羟基自由基性能（加水定容）测定结果如表1
表1 对照样品抗坏血酸抗羟基自由基性能（加水定容）
Table 1 check sample antiscorbutic acid anti- hydroxyl free radical performance (wateing constant volume)
3.1.2对照样品抗坏血酸抗羟基自由基性能（加70%乙醇定容）测定结果如表2
表2 对照样品抗坏血酸抗羟基自由基性能（加70%乙醇定容）
3.1.3提取液A液抗羟基自由基性能测定结果如表3
表3 A液抗羟基自由基性能（略）
3.1.4提取液B液抗羟基自由基性能测定结果如表4
表4 B液抗羟基自由基性能（略）
3.1.5提取液C液抗羟基自由基性能测定结果如表5
表5 C液抗羟基自由基性能（略）
3.1.6提取液D液抗羟基自由基性能测定结果如表6
表6 D液抗羟基自由基性能（略）
3.1.7提取液E液抗羟基自由基性能测定结果如表7
表7 E液抗羟基自由基性能（略）
把前三个表中的结果绘制在下面的图1中为：
图1 (Chart 1)
把后四个表中的结果绘制在下面的图2中为：

图2 (Chart 2)
3.2讨论
从图1中可以看出，三条抗氧化曲线都呈上升的趋势，即它们都有抗氧化性能；对照样品抗坏血酸随着定容剂的不同，其抗羟基自由基的性能也不同，用70%乙醇比用蒸馏水作定容剂的抗氧化性能强；用无水乙醇作提取剂提取的物质具有清除∙OH的能力,清除率最高可达91%左右，且与同样条件下同浓度的抗坏血酸的清除∙OH能力相差不大。
从图2中可以看出，四条抗氧化曲线都呈下降趋势，与对照样品抗坏血酸的抗氧化性曲线刚好相反，即它们都不具有抗氧化性，反而还具有一定的氧化性；再从B与D，C与E的抗氧化曲线对比可以看出，即使它们的提取温度不同，但它们的氧化性能相差不大。
综上所述，采用不同的提取剂提取的物质的抗氧化性能不同，用无水乙醇作提取剂提取的物质具有清除∙OH的能力,清除率最高可达91%左右，且与同样条件下同浓度的抗坏血酸的清除∙OH能力相差不大。而用70%的乙醇和水作提取剂提取的物质没有清除∙OH的能力，反而还具有一定的氧化性。且香樟树叶抗氧化成分的提取受温度的影响不大。
已经有人研究过樟树叶的乙醇提取物因具有抗菌作用而成为很好的天然食品防腐剂[11]。本文研究的樟树叶的无水乙醇提取物具有很好的抗氧化性能，因此可进一步实验应用于食品的生产、食品原料的保藏、抗衰老化妆品的生产和药业的生产等等。
在实验的过程中，要注意不要使硫酸亚铁失效，因为硫酸亚铁溶液中的Fe2+很容易被氧化成Fe3+，从而最好是现配现用。配制好的过氧化氢溶液要保存在棕色试剂瓶中，以防见光分解。在配制香樟树叶的提取液时，首先用量筒量取10.0mL原提取液于小烧杯中，然后把它放在电炉上蒸干，再冷却后称其重减去小烧杯的质量除以10就得到1mL原提取液中含有多少克提取物质，再把它配制成所需浓度的溶液即可。
在用邻二氮菲分光光度法测定香樟树叶提取液的抗氧化性能时，经过实验和资料知，邻二氮菲—Fe2+在510nm处有最大吸收峰值，且显色最关键的地方是Fe2+的量必须过量，因为Fe2+在反应中，即充当催化剂，又充当配位剂和还原剂。加入PH为7.4的磷酸盐缓冲溶液是为了保证加入抗氧化剂后体系PH值基本不变，因为在此PH值下，Fe2+与邻二氮菲能形成稳定的红色配合物。实验中选择反应时间为10min，是因为Fe2+与邻二氮菲反应很快，即使测定的吸光度还在变化，但我们测定的时间相差不大，所以所得实验数据是可靠的。
在测定A液的抗氧化性能时，因为用水定容，溶解于乙醇而不溶于水的物质会沉淀出来，从而影响测定结果，所以用95%的乙醇定容。以后的都用相应的提取剂作定容剂。
在测定0.0030g/mL B液的抗氧化性能时，因所测吸光度大于1，知所配制的提取液浓度过高。所以把B液配制成0.0010g/mL的溶液，在测定。以后的提取液都配制成浓度为0.0010 g/mL的溶液。
至于表中出现的实验数据误差，是由于人为因素和仪器存在的误差造成的，但我们已把误差降到了最小。　　
当然，由于时间有限，我们只是研究了用乙醇作提取剂提取它的主要成分并进行抗羟基自由基性能测定，而用其他的提取剂提取并测定它对其他自由基如氧自由基、芳香基自由基等的清除作用还待进一步研究。
感谢：在此次实验和撰写论文的过程中，我要衷心地感谢系上为我们提供的良好的实验条件以及系领导和各位老师的帮助，尤其是我们的指导教师郭亚力老师的悉心指导和帮助，同时还要感谢我的实验伙伴张学梅同学。

参考文献
[1]Zhang SQ(张受谦). Chemical Engineering Handbook(I)[M]. Ji’nan:Shandong Science&Technology Press,1987.
[2]江苏医学院.中药大辞典[M].上海人民出版社，1979.
[3]刘咏，张宗贤.香樟叶出油最佳提取条件的实验研究[J].天然产物研究与开发，2005，17（2）：203-205.
[4]陶光复，孙汉董.湖北油樟叶精油的化学成分[J].武汉植物学研究，2002，20（1）：75-77.
[5]孙凌峰，周传军，彭春耘.樟树枝叶精油的提取和分析研究[J].江西师范大学学报（自然科学版），1995，19(4).
[6]龚建武，王晓春.山楂水提液清除氧自由基作用的研究[J].实用预防医学，2005，123):568-569.
[7]扶雄，于淑娟，闵亚光等.从甘蔗中提取天然抗氧化活性物质[J].甘蔗糖业，2003，5:37-38.
[8]赵清泉，姜言.分析化学实验[M].高等教育出版社，1995:135-136.
[9]金鸣，蔡亚欣，李金荣等.邻二氮菲-Fe2+氧化法检测H2O2/Fe2+产生的羟自由基[J].生物化学与生物物理进展，1996，23（6）:553-555.
[10]郭亚力，李聪，欧灵澄等.红景天提取物抗氧化性能分析研究[J].云南大学学报,2005.
[11]吴传茂，吴周和，伍业松.樟叶乙醇提取液的抑菌作用[J].氨基酸和生物资源，2000，22（2）：41-42

Cinnamomum camphora leaf withdrawing anti- oxidation susceptibility research
Zhou Hongli
Chemistry Department,2003A Class, School of Science,Honghe Universty,Mengzi 661100

Abstract: This article take the Cinnamomum camphora leaf as a raw material, uses the different chemistry method to withdraw its principal constituent, and conducts the anti- oxidized research. The research result indicated that, does with the absolute ethyl alcohol withdraws the Cinnamomum camphora leaf principal constituent which the medicinal preparation withdraws to have elimination ∙OH the ability,Also is not big with the similar condition similarly hereinafter density antiscorbutic acid elimination ∙OH ability difference, namely does with the absolute ethyl alcohol withdraws the principal constituent which the medicinal preparation withdraws to have the very good anti- oxidation susceptibility. But does with 70% ethyl alcohol and the water withdraws the Cinnamomum camphora leaf principal constituent elimination ∙OH ability which the medicinal preparation withdraws, instead also has the certain oxidability. This indicated that, with different the Cinnamomum camphora leaf principal constituent which withdraws the medicinal preparation to withdraw is different, thus causes its anti- oxidation susceptibility to be also different.
Key word: Cinnamomum camphora leaf, hydroxy free radical, anti- oxidation, spectrophotometric method