蔓九节中挥发油的化学成分研究 2007031198 谢俊鹏.doc

中药学院本科毕业论文（设计）

题目：蔓九节中挥发油的化学成分研究

年级专业 2007级 中药学临床方向专业
学 号 2007031198
姓 名 谢俊鹏
指导教师 张翠仙
学历职称 博士、副教授
教师单位 广州中医药大学
填表日期 2011年 5 月 4 日

广州中医药大学学位论文

诚 信 声 明

本人郑重声明：所呈交的学术论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人或集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。

学位论文作者签名：
年 月 日

目 录
封面……………………………………………………………………………………1
诚信声明………………………………………………………………………………2
中文摘要………………………………………………………………………………4
英文摘要………………………………………………………………………………5
前言……………………………………………………………………………………6
概述……………………………………………………………………………………6
蔓九节化学成分…………………………………………………………………6
蔓九节药理作用…………………………………………………………………6
蔓九节鉴别………………………………………………………………………7
小结………………………………………………………………………………7
研究部分…………………………………………………………………………. .…8
材料与方法……………………………………………………………………….8
GC-MS分析蔓九节挥发油…………………………………………. ………….8
蔓九节GC-MS分析结果…………………………………………………9
结果与结论…………………………………………………………………………..12
参考文献…………………………………………………………………………… .12
致谢………………………………………………………………………………… .13
附图一……………………………………………………………………………… .14

蔓九节中挥发油的化学成分研究
作者：谢俊鹏（2007级中药学临床方向 2007031198）
指导老师：张翠仙 （天然药物化学实验室）
【摘要】目的 初步分析蔓九节中挥发油成分进行分析，为蔓九节新药开发提供基础研究资料。方法 用水蒸汽蒸馏法提取蔓九节中的挥发油，通过GC-MS技术分析其主要成分。结果 通过GC-MS鉴定出蔓九节挥发油中含1,6-Octadien-3-ol,3,7-dimethyl-、Bicyclo[2.2.1]heptan-2-ol,1,7,7-trimethyl-,(1S-endo)-、(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth-1-en- 8-ol)、Methyl Salicylate、2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (Z)-等成分。结论 首次采用GC-MS对其挥发油进行成分分析，所得化合物Bicyclo[2.2.1]heptan-2 -ol,1,7,7-trimethyl-,(1S-endo)-、(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth -1-en-8-ol)、Methyl Salicylate、2,6-Octadien-1-ol,3,7-dimethyl-,(Z)-、3,7,11-Trimethyl-3-hydroxy-6,10-dodecadien-1- ylacetate、2,6-Octadien-1-ol,3,7-dimethyl-,(E)-、Tetradecanoic acid首次从此属植物中得到，化合物1,6-Octadien-3-ol, 3,7-dimethyl-、Naphthalene,2-methyl-、3-Buten-2-one,4-(2,6,6 -trimethyl-2-cyclohexen-1-yl)-, (E)-等首次从此植物中得到。
【关键词】蔓九节；挥发油；GC-MS，化学成分

The chemical constituents of volatile oil from Psychotria serpens L.
Candidate: Jun-Peng Xie
Supervisor: Cui-Xian Zhang
【Abstract】 Objective: To analyze with Components of volatile oil from Psychotria serpens L.. Methodology: Extract volatile oil Psychotria serpens L. respectively by steam distillation, and analyze their major ingredients by GC-MS .Results: Several constituents of the volatile oil of the Psychotria serpens L. were 1,6-Octadien-3-ol,3,7-dimethyl-、Bicyclo[2.2.1]heptan-2-ol,1,7,7-trimethyl-, (1S-endo)-、(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth-1-en-8-ol)、Methyl Salicylate、2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (Z)-, etc. Conclusion: It is the first time when GC-MS was applied in component analysis of essential oil of Psychotria serpens L., and it isolated a variety of different chemical composition from the Psychotria serpens L..
【Keywords】 Psychotria serpens L.; Volatile Oil; GC-MS; chemical constituents
前言
九节属（Psychotria）植物是我国南方常用中草药。文献调研表明，我国境内本属植物少见其相关化学成分研究。为进一步深入研究我国此属植物现对目前国内外此属植物的化学成分及药理作用进行综述，有利于我国中草药的充分利用和天然药物深入开发。
本课题在前期文献研究、预试验的基础上拟对市售的茜草科九节属的蔓九节（Psychotria serpens L.）挥发油进行化学成分研究。采用水蒸汽蒸馏法提取蔓九节的挥发油，通过GC-MS技术对其中的成分进行分析，为正确认识蔓九节的药用价值提供物质基础，从而更好阐述蔓九节的药效机制，对我国中草药资源深入开发具有指导性意义。
概述
我国传统中草药历经数千年的临床验证，具有多靶点作用机制、毒副作用低、无耐药性等优点使它表现出诱人的应用前景。
中药穿根藤为民间习用草药，用于治疗风湿关节痛、手足麻木、腰肌劳脶、坐骨神经痛、多发性痈肿、骨结核、跌打损伤、骨折、毒蛇咬伤等[1]。《中药大辞典》等文献记载中药穿根藤的的原植物为茜草科九节属蔓九节（又称匍匐九节）[1]，其别名众多，有春根藤[2]、木头疳[3]、石邦子[3]，味苦辛、性平，具祛风湿、舒筋活络、消肿止痛的作用，临床上用于治疗湿关节痛、手足麻木、腰肌劳脶、坐骨神经痛、多发性痈肿、骨结核、跌打损伤、骨折、毒蛇咬伤等症[1]。广东地区多作络石藤的习用药[4][5]，民间组方较多，多以水煎、捣汁或浸酒服用，亦有制作中成药服用的例子[6]。
1、蔓九节化学成分
综述近几十年的文献，蔓九节除台湾对其化学成分及药理作用略有研究外，在内地鲜见文献报道[7]。通过查阅《中药大辞典》得知穿根藤的化学成分中含有熊果酸(ursolic acid)，豆甾醇(stigmasterol)，β-谷甾醇(β-sitosterol)，高级脂肪酮(higher aliphatic ketone)，乌楠醌(tectoquinone)等。
2、蔓九节药理作用
从穿根藤全草中提出的熊果酸在体外对人鼻咽癌(KB)细胞的ED50为6.6μg/ml，对人肺癌A549ED50为4.0μg/ml，对回盲肠癌HCT-8的ED50为4.5μg/ml，对乳腺癌MCF-7的ED50为4.9μg/ml[5]。黄炜、黄济群、张东方等对熊果酸抗人肺癌细胞（PGCL3）侵袭作用进行研究，发现处理96h 均可降低PGCL3 细胞增殖能力并呈剂量依赖性, 均能抑制PGCL3 细胞的侵袭能力( P< 0101) 且有剂量依赖性。抗侵袭作用机理的分析结果显示上熊果酸对细胞的运动、粘附能力及组织蛋白酶B分泌均有明显的抑制作用( P < 0105 和P < 0101)，软琼脂集落形成率也显著降低( P < 0101)。[8]
藤类药常用于治疗肢体经络、筋脉病变，临床上神经科应用较为广泛，治疗中风病用以缓解偏瘫、麻木、僵直等症，疗效显著。[9]周好田应用通络止痛汤治疗痹证32例，疗效显著。[10]；窦立新的研究表明，应用含有祛风湿止痛的络石藤的组方对治疗类风湿有明显的疗效[11]；隋德翠也应用含络石藤组方成功治疗一例风湿顽痹。[12]
刘明霞的研究表明，复方络石藤方对小儿急性扁桃体炎有显著疗效[13]。
《广州植物志》：“煎服或浸酒饮，壮筋骨，消风湿。”[1]
3、蔓九节鉴别
林颖、黄恩等以穿根藤和正品络石藤显微特征对比，总结了穿根藤的显微特征是：① 茎横 切面内皮层明显，特化成石细胞状环带状的凯氏带。② 茎皮层、叶肉组织的薄壁细胞中可见草酸钙针晶束。③粉末中可观察到淀粉粒、非腺毛、针晶束、石细胞及平轴式气孔[14]；郑善荣应用外观性状区别，对正品络石藤和穿根藤等混淆品进行了鉴别[15]；张电光、罗集鹏利用紫外光谱法，对络石、石血、蔓九节和薜荔不育枝的水提液和氯仿提液在零阶和一阶的吸收光谱中进行鉴别，结果发现零阶光谱特征较少，一阶光谱峰形尖锐，相似光谱的零交点和第一、二强谷的导数比值有较大差异，可作鉴别依据。[16]
4、小结
目前对蔓九节（穿根藤）的研究中，多是其药效、药理作用，抑或是和正品络石藤之间的鉴别，较少涉及其化学成分的研究。而同属植物中，近年也只有山大颜（P. rubra）的化学成分分析研究获得了11-O-丁香酰矮地茶素、岩白菜素、没食子酸、没食子酸甲酯四个首次发现的新成分[7]。而挥发油多具有止咳、祛痰、驱风、镇痛、解痉等功效[17]，故对蔓九节中挥发油成分进行研究，对深入挖掘蔓九节价值、新药开发或增强药效的研究有一定的意义。

研究部分
本研究工作共包含两部分工作：山大颜茎、叶的挥发油提取；挥发油成分分析。
1 材料与方法
1.1 实验仪器、试剂及药材
药材：蔓九节，广东习称穿根藤
化学试剂及仪器：石油醚、药材粉碎机，挥发油提取器，旋转蒸发仪，GC-MS联用仪，GC-MS检测仪。
1.2 挥发油提取方法
取200g蔓九节药材，用药材粉碎机粉碎至合适粒度，置圆底烧瓶中，加6倍量水，共1200ml，振摇，混合均匀后浸泡2h，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶为止。置电热套上缓缓加热至沸，并保持微沸约6h，停止加热，放置冷却。将残留在挥发油测定器里的水用乙醚萃取，得总挥发油。将所得挥发油用GC-MS仪器检测。

2 GC-MS分析蔓九节挥发油：
图表2-1.挥发油GC-MS分析条件
parameter
value
parameter
value
Ionization Mode:
EI+
Ion Energy Ramp (mV/amu):
0
Emission Current (µA):
100
Interface Temperature (℃):
230
Repeller Voltage (V):
0.5
Source Temperature (℃):
200
Electron Energy (eV):
70
Low Mass Resolution:
14
Lens 1 (V):
5
High Mass Resolution:
13.2
Lens 2 (V):
45
Detector Voltage (V):
400
Ion Energy (eV):
3.2
Standby Time:
0.50 (min)
Post-run Time:
0.00 (min)
Value:
4.50 ml/min
Split Flow:
20.0

2.1 蔓九节GC-MS分析结果
图1. 蔓九节挥发油总离子流图
表2-2.蔓九节挥发油GC-MS检测结果（对应附图一）
No.
Apex RT
Height
Formula
Compound
1
20.091
4386073
C10H18O
1,6-Octadien-3-ol, 3,7-dimethyl-
2
24.352
12970120
C10H18O
Bicyclo[2.2.1]heptan-2-ol,1,7,7-trimethyl-,(1S-endo)-
3
25.979
3111626
C10H18O
(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth-1-en-8-ol)
4
26.133
2088483
C8H8O3
Methyl Salicylate
5
28.789
345747
C10H18O
2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (Z)-
6
29.166
539210
C17H30O3
3,7,11-Trimethyl-3-hydroxy-6,10-dodecadien-1-yl acetate
7
30.689
308869
C10H18O
2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (E)-
8
32.316
272987
C11H10
Naphthalene, 2-methyl-
9
41.074
424665
C13H20O
3-Buten-2-one,4-(2,6,6-trimethyl-2-cyclohexen-1-yl)-, (E)-
10
42.936
304257
C13H22O
5,9-Undecadien-2-one, 6,10-dimethyl-, (E)-
11
44.596
1162482
C13H20O
3-Buten-2-one,4-(2,6,6-trimethyl-1-cyclohexen-1-yl)-, (E)-
12
56.858
1277605
C17H36
Heptadecane
13
61.067
557009
C14H28O2
Tetradecanoic acid
14
64.107
3349861
C18H36O
2-Pentadecanone, 6,10,14-trimethyl-
15
64.812
4498515
C16H22O4
1,2-Benzenedicarboxylic acid, bis(2-methylpropyl) ester
16
66.996
1854817
C16H22O4
Dibutyl phthalate
17
67.516
10802613

C16H32O2
n-Hexadecanoic acid
18
69.275
17955106
C20H40O
Phytol
19
69.740
6101048
C18H34O2
9-Octadecenoic acid, (E)-

（1） （2）
1,6-Octadien-3-ol, 3,7-dimethyl- Bicyclo[2.2.1]heptan-2-ol, 1,7,7-trimethyl-, (1S-endo)-

（3） （4）
(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth-1-en-8-ol) Methyl Salicylate

（5） （6）
2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (Z)- 3,7,11-Trimethyl-3-hydroxy-6,10-dodecadien-1-yl acetate

（7） （8）
2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (E)- Naphthalene, 2-methyl-

（9） （10）
3-Buten-2-one, 4-(2,6,6-trimethyl-2- 5,9-Undecadien-2-one, 6,10-dimethyl-, (E)-
cyclohexen-1 -yl)-, (E)-
（11） （12）
3-Buten-2-one, 4-(2,6,6-trimethyl-1- Heptadecane
cyclohexen-1 -yl)-, (E)-
（13） （14）
Tetradecanoic acid 2-Pentadecanone, 6,10,14-trimethyl-
（15） （16）
1,2-Benzenedicarboxylic acid, Dibutyl phthalate
bis(2-methylpropyl) ester
（17） （18）
n-Hexadecanoic acid Phytol
（19）
9-Octadecenoic acid, (E)-

4结果与结论：
（1）从蔓九节挥发油中提取了1,6-Octadien-3-ol,3,7-dimethyl-、Bicyclo[2.2.1] heptan-2-ol,1,7,7-trimethyl-, (1S-endo)-、(+)-.alpha.-Terpineol (p-menth-1-en-8-ol)、Methyl Salicylate、2,6-Octadien-1-ol, 3,7-dimethyl-, (Z)-等19种成分，其中含芳樟醇（Linalool）、左旋冰片（L-borneol）、α-松油醇（α-Terpineol）、冬青油（Methyl Salicylate）、n-棕榈酸（n-Hexadecanoic acid）、植醇（Phytol）等常见成分，占挥发油总成分71.11%.。
（2） 周本杰、谭永恒等的研究表明，芳樟醇对正常人体心、肺功能具明显抑制作用[19]；冰片具消炎、抗菌等功效[20]；冬青油有消肿、消炎和镇痛作用。
（3） 蔓九节的挥发油含多种化学成分，其药理上的作用以及在新药开发上的应用，有待进行进一步的研究。

参考文献：
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[20] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草,第三册[M].上海:上海科学出版社.1999:551

致 谢
首先感谢张翠仙老师指导本人在广州中医药大学中药学院中药化学实验室圆满完成毕业论文。在这一个学期来，她凭着渊博的专业知识和丰富的实验经验，教会我专业知识和实验操作技能，让我受用终身；她对科学的那种执着认真的态度以及刻苦专研的精神也实在让我敬佩！
还要感谢广州中医药大学中药学院中药化学实验室的各位老师、师兄师姐和同学在我完成论文期间对我的指导和帮助。他们在我论文的实验期间，亲力亲为地为我指导，答疑，并将本人一些错误的实验操作方法纠正过来！
感谢广东省科技计划重点项目（2010A030100013），广东省分析测试技术公共实验室开放课题（001）的资助！
最后感谢参与论文评审的各位专家和老师!

附图一：
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