牛人工授精技术.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,牛人工授精技术,广西武宣金泰丰农业科技有限公司,人工授精的概念,种畜配种：自然交配、人工授精,人工授精是指利用器械采取公畜的精液，经过适当的检查和处理，再用器械把精液输送到母畜生殖道的适当部位，使之受孕的配种方法。,人工授精的发展,试验阶段：,1780年意大利生理学专家司拜伦谨尼（Spallanzani）第一次进行狗的人工授精。20世纪初对马试验成功。,实用阶段：在20世纪30年代形成了一套较完整的操作方法。4060年代，欧洲多数国家，北美、大洋洲国家及日本人工授精已相当普及。,冷冻精液阶段：,出现：1949年英国波芝（Polge）对鸡精液冷冻成功。,发展：1950年英国的史密斯（Smith）和波芝研究开发了牛精液冷冻保存技术。1960年后冷冻精液的人工授精技术广泛展开。我国的人工授精技术始于50年代（猪），但精液冷冻技术70年代才得以推广。,人工授精的意义,充分发挥优秀种公畜的种用价值和配种效能，加快品种改良步伐。,提高母畜的受胎率。,防止疾病特别是传染病的传播。,克服因家畜体形悬殊造成的配种困难。,冷冻精液的应用使种畜的利用不受时间和空间的限制。,是发展繁殖新技术的一项基础措施。,人工授精技术程序,采精,精液品质检查,精液稀释,精液保存,输精,采精,采精的准备,采精方法,采精频率,公畜的采精频率,公牛：每周两天，每天两次。,公猪、马：宜隔日一次，如果连续两天采精，要休息2-3天。,公羊：每天数次，连续数周。,精液的品质检查,外观检查,精子活力检查,精子密度检查,精子畸形率检查,其他检查,精液的外观检查,精液量,精液色泽,精液气味,云雾状,项目,乳牛,肉牛,水牛,猪,绵羊,每周采精次数,26,26,26,25,725,平均每次射精量（ml）,510,48,36,150300,0.81.2,精子活率（%）,5075,4075,6080,5080,6080,精子活力检查,平板压片法,悬滴法,载玻片预温,精液稀释,取样检查,镜检,活力估测,活力记录,将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37,，然后放在载玻片,将生理盐水与精液等温后，按1:10稀释,取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片,在,40,0,倍,显微镜下,观察,判断视野中,直线,前进运动精子,所,占的百分率,按,十,级,一分,制,评分和记录,精子活力检查的程序,精子密度检查,估测法,血细胞计计数法,精子密度仪测定,估测法,密：在整个视野中，精子间空隙不明显，看不清单个精子运动。10亿ml。,中：在整个视野中，精子间空隙明显，可容纳1,2个精子，3,10亿ml,稀：在整个视野中，精子间空隙较大，可容纳数个精子，1,3亿ml。,(二)血细胞计数法：,在显微镜看清血细胞计数板上的方格,：,稀释精液：,用移液管吸取精液50微升置于小试管中，再吸取3%NaCI溶液450或950微升与精液混匀。,镜检,：,在400倍的显微镜下找出具有代表性的五个中方格，四角和中间一个或对角线五个，用计数器计数其中的精子数。,计算：1毫升原精液精子数=5*5*10*1000*稀释倍数,精子密度仪,各种家畜精子密度比较,畸形率的检查,畸形精子：头部畸形、颈部畸形、尾部畸形,精子畸形率：精液中畸形精子占总精子数的百分率。,优质精液精子畸形率应小于：牛18%、羊15%、猪18%、马12%,畸形率的检查,取一滴原精液，均匀的涂在载玻片上，干燥12分钟。,用96%以上酒精固定23分钟。,用美蓝或墨水染色12分钟。,用蒸馏水轻轻冲洗。,干燥后镜检，,其他检查,顶体异常率,精子生存时间和生存指数的测定,PH测定,美蓝褪色试验,果糖分解试验,精子耗氧量测定,顶体异常率的检查,取鲜精适量，在37下用生理盐水稀释。,涂片，干燥，用5%福尔马林固定10分钟。,姬姆萨液染色1.52小时。,干燥后用树脂封闭，制成标本。,400600倍镜检，数5001000个精子，计算项体异常率。,精子生存时间和生存指数的测定,精子生存时间：指精子在某温度下在体外的总的生存时间。,生存指数：将精液在某温度下，每隔812小时检查一次精子活力，直至无活动精子为止，相邻两次检查的平均活力与间隔时间的积之和为生存指数。,PH测定,正常精液PH：牛、羊6.56.9、猪、马7.47.5,同种精液PH偏低的，品质较好，PH偏高的受精率、生活力和保存效果都显著降低。,美蓝褪色试验,精液稀释,稀释的目的,稀释液的成分及作用,稀释液的配制方法,稀释倍数的确定,稀释方法,稀释的目的,大精液容量，增加了一次采精量的可配母畜数。,延长精子存活时间。,有利于精液的保存和运输。,稀释液的成分及作用,稀释剂,：单纯扩大容量的等渗液。0.9%NaCl、5%葡萄糖。,营养剂：,主要提供营养，以补充精子在代谢过程中消耗营养。,（1）奶类：奶粉(脱脂、速溶)1012%；鲜奶经消毒加入1020ml。,（2）卵黄，通常加入20%。,（3）糖类，3%葡萄糖，11%蔗糖。,保护剂：,主要保护精子免受各种不良外界环境因素的危害。,（,1）非电解质或弱电解质,：降低精液电解质浓度，常用糖类、氨基乙酸。,（,2）缓冲物质,：维持精液的PH，常用柠檬酸盐、酒石酸钾钠、磷酸二氢钾和三羟甲基氨基甲烷（tris)等。,（3）防冷物质：,防止精子发生冷休克，常用卵黄、奶类。,（4）抗冻物质：,甘油、二甲基亚砜(DMSO)。,（5）抗菌物质,：青霉素、链霉素、氨基苯磺胺。,其他添加剂,：激素类、维生素、酶类、染料类、有机酸、精氨酸等。,稀释液的配制要求,药物原料应选用化学纯和分析纯制剂。,用具须洗净消毒。,药品用蒸馏水溶解后，要进行过滤和水浴消毒。,蒸馏水要新鲜。,卵黄要取自新鲜鸡蛋。,最好现用现配，卵黄、奶类、抗生素现用现加。,稀释倍数的确定,一头公牛一次采得鲜精12毫升，经检查精子活力为0.7，密度为11亿/毫升，如为母牛输精时要求有效精子数不少于0.1亿，输精量为0.25毫升，本次采得的精液可为多少头母牛输精？,（1）每毫升原精液中有效精子数：11*0.77.7亿/毫升,（2）稀释后每毫升精液中有效精子数：0.1/0.250.4亿/毫升,（3）稀释倍数：7.7/0.419.25取19倍,（4）可配母牛头数：12*19/0.25912头,稀释方法,将精液精液与稀释液同处在30的环境中。,检查精液品质，确定稀释倍数。,稀释时，将稀释液沿着精液容器的壁慢慢加入精液中，同时慢慢转动精液瓶，使之混匀。,如需高倍稀释，应先做35倍的低倍稀释。,精液稀释,精液保存,常温保存：1525,低温保存：05,冷冻保存：保存在液氮(-196)或干冰(-79)中。,液氮及其容器,液氮的特性：超低温性、易挥发性、抑菌性。,利用液氮：防冻伤、防窒息、防爆炸,液氮罐：,液氮罐的构造,液氮罐的使用,购买时要检查合格证，查看各部件是否齐备完好，测定液氮损耗率是否正常。,运输液氮要有专门的车辆，防止剧烈振荡。,贮存液氮要在专门的室内。,当液氮量达容积的1/3时要及时充氮。,每年要清洗保养一次,精液的冷冻保存原理,玻璃化假说：稀溶液在,冰晶化温区（060）,易形成冰晶，冰晶为分子有序排列、形态规则、颗粒较大的固体，可对精子产生渗压和机械危害。如溶液快速降温，则形成分子无序排列、颗粒较小的,玻璃化固体,，对精子危害小，再以同样的方式升温，精子即会恢复活力。,细管冻精的生产程序,采精及精液品质检查,精液稀释：二次稀释法,降温平衡：,分装,冻结：液氮熏蒸浸泡法,抽样检查,细管冻精的制作,人工授精技术,输精前的准备,输精的要求,输精方法,输精前的准备,母畜的准备：母畜经发情鉴定后，确定已到输精时间，将其适当保定，尾巴拉向一侧，清洗消毒外阴。,器械准备：输精所用的器械应彻底消毒，用稀释液冲洗后才能使用。,精液准备（,1）,液态保存的精液：轻轻振荡后升温至35，活力不低于0.6,（2）冷冻精液：需先解冻，活力在0.3以上。,术者准备：输精人员应穿好工作服，指甲必须剪短磨光，戴上长臂手套。,输精要求,输精时间的确定：母牛发情后924h输精两次，间隔8-12小时。（第一次输精经产牛在发情后12h左右，初产20h）,例：早9点某经产母牛发情，当晚78：30时第一次输精，次日早59时可第二次输精，第二次输精前检查卵泡。,细管冻精1支，0.5ml或0.25ml，有效精子数不少于1000万。,直肠把握子宫颈输精法,操作要点,1、冻精的适宜解冻温度：3839,2、母牛的输精时间：发情开始后812小时一次，隔812小时一次。,3、适宜的输精部位：子宫颈深部和子宫体内。,4、精液解冻后要尽快输精。,5、精液解冻后要保存在3436下，温度不可波动过大。,6、细管装入枪内后，要检查一下精液是否能从套管外流出。,7、排出宿粪后，先擦洗牛外阴部，再插入输精器。,8、插入输精器时，先斜向上方前进1015cm，再水平插入。,9、向子宫颈插入输精器时，要注意两手协同操作。,10、输精器与子宫颈方向要保持一致。,11、注入精液困难时，要适当改变输精器方向或稍后拉，但切忌后退过多。,12、注入精液要缓慢，一般为10秒。,13、注入精液的同时要减缓母牛的努责，防止精液倒流。,14、输精同时要注意保护输精器不受粪便污染。,15、输精完毕后，先撤出输精器后撤出直肠内的手臂。,提高受胎率的措施,发情正常而屡配不孕的母牛大麦芽120克，当归、红花、生地、地骨皮各60克，黑豆5001000克，加水熬汤。母牛发情13天开始喂药，每日1剂，连服3剂，第3剂药服完后的第2天配种。,按碘片1克、碘化钾3克、蒸馏水6克的比例配成稀释液，同时取4毫升原液，加200毫升蒸馏水冲洗子宫。此方法对慢性子宫内膜炎、化脓性子宫炎、卡他性子宫炎、阴道炎等引起的母牛不孕症有明显疗效。,提高受胎率的措施,卵巢机能不全时，肌注0.5%新斯的明2毫升，连注3次，每次间隔48小时。第3次可同时注射孕马血清1000国际单位，82.4%的母牛可恢复机能。,对隐性子宫内膜炎的母牛，在发情配种前2小时，用生理盐水200500毫升冲洗子宫之后，注入青霉素40100万单位，链霉素100万单位，再适时输精，受胎率可达60%以上。,提高受胎率的措施,肌注维生素。输精后1520分钟，肌肉注射维生素E500毫克，情期受胎率可提高14.4%。在输精的当天，输精后的第56天，各肌注维生素A58万单位，维生素D310万单位，维生素E500毫克一次情期受胎率可提高20%。,50%70%葡萄糖溶液加入青霉素和链霉素100200万单位，于人工授精68小时后注入子宫体内，对患子宫内膜炎的母牛可提高受胎率26%50%。,提高受胎率的措施,在母牛分娩后的第一、二情期，输精后57分钟，各肌肉注射4050万单位的催产素一次，受胎率提高20%。,肌肉注射促性腺激素10毫克，受胎率可提高12%19.1%：屡配不孕的牛经注射后受胎率提高26.1%。,在母牛分娩后4560天肌肉注射前列素F两天，2025毫升、受胎率可达73%85%。长期不孕的牛，皮下注射初奶20毫升和0.5%新斯的明2毫升，受胎率提高24%。,提高受胎率的措施,益母草250克、红花30克、黑豆500克，煎汤内服。隔日1剂，连服23剂为宜。此方适于不发情母牛。,炒香附、云苓各45克，灸半夏、桔皮各40克，炒苍术50克，六曲100克。每日1剂，分两次煎服，连服6日，停药1日，为1个疗程。一般服一个以情周期（即3个疗程左右）为宜。此方适于体壮过肥，不发情或发情屡配不孕的母牛。,子宫内膜炎的治疗,扁豆花、鸡冠花、泽兰各30克，益母草、山楂各50克，红花、桃仁各20克。混合加水适量，煎后取其汁，与100克红糖调匀，1次给病牛灌服。,当归200克，红花、炙甘草各30克，益母草500克，鸡冠花150克，枳壳45克，野菊花90克。混合研为细末，平均分成3剂，每天1剂拌料喂服，连用3天。,酒当归50克，川芎15克，酒白芍35克，熟地50克，吴茱萸35克，丹皮30克，元胡20克，陈皮40克，制香附50克，白术50克，砂仁25克。共研细末，开水冲调，侯温灌服，每天1剂，连用23剂。,醋香附40g，醋元胡40g，盐故子40g，酒知母30g，酒黄柏30g，芡实40g，黄芩40g，连翘30g，甘草25g。共为末，开水调冲，候温灌服。1剂/d，连续服用25剂。适于脓性子宫内膜炎。,