食品卫生微生物学检验培训课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,食品卫生微生物学检验,*,食品卫生微生物学检验,实验分组（40人）,俩俩相对4人为一个小组,组号编在电源插座上。,按从前到后从左到右顺序，编为1,5，6,10。,两个小组编为一个大组：1+2,4+5,6+7,9+10,3+8,。,甲 乙,4,丙 丁,甲 乙,3,丙 丁,甲 乙,2,丙 丁,甲 乙,1,丙 丁,甲 乙,5,丙 丁,甲 乙,8,丙 丁,甲 乙,7,丙 丁,甲 乙,6,丙 丁,甲 乙,10,丙 丁,甲 乙,9,丙 丁,讲,台,左,右,2,食品卫生微生物学检验,食品卫生微生物学检验一实验准备,培养基制备,高压蒸汽灭菌,器材预算,刻度吸管的无菌操作方法,3,食品卫生微生物学检验,培养基的制备,（40人份）,组号,培养基,称量g,水量ml,瓶数,分装量ml,1+2,+3+4,乳糖胆盐,发酵培养基,8.75,250,4瓶,10,5,营养琼脂,5,130,8瓶,6,氯化钠,2,225,9瓶,6,氯化钠,0.9,100,9瓶,7、8,伊红美蓝,10.8,300,3瓶,7、8,EC肉汤,7.4,200,1瓶,5,加热时常摇动，煮至完全溶解,分装于带有倒放小倒管的试管中,试管筐内,罩上硫酸纸、牛皮纸，扎好,高压蒸汽灭菌15分钟,4,食品卫生微生物学检验,1500W电炉,安全警告,1.电源插塞与电炉插孔接触良好,插头插入插座。,2.如果培养基潽了，流入电炉；必须立即,切断电源、拔除插头；,以免,触电，危及生命！,东西两侧边台各一个电炉，每个电炉,可同时放置3个500ml锥形瓶进行,加热,。,5,食品卫生微生物学检验,培养基隔石棉网煮沸，使完全溶解。,加热时,常摇动。,沸腾时，不能摇动！,6,食品卫生微生物学检验,标准的分类,根据适用范围分为国家标准、行业标准、地方标准和企业标准四级。,根据法律的约束性分为强制性标准和推荐性标准。,标准号:代号+序号+年份组成,GB/T 4789.2-2003,代号GB表示国家标准，T指推荐性标准。,序号4789指食品卫生微生物学检验，点2指该检验的第二部分（菌落总数测定）。,2003是指该标准制定或修改的年份。,8,食品卫生微生物学检验,食品卫生标准中的微生物指标,指示菌,概念:在常规安全卫生监测中，用以指示检样卫生状况及安全性的指示性微生物。,项目：菌落总数、大肠菌群、耐热大肠菌群、,总大肠菌群,。,食源性致病菌及其毒素,沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、,变形杆菌、,单核细胞增生李斯特菌、阪崎肠杆菌、空肠弯曲菌、致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、,肉毒梭菌、产气荚膜梭菌,等。,霉菌、酵母菌及其毒素,黄曲霉毒素B1、B2等。,9,食品卫生微生物学检验,菌落总数,菌落总数是指被检样品的单位重量(g)、容积(ml)、表面积(cm,2,)或体积(m,3,)内，所含有的能在某种固体培养基上,经一定条件、一定时间培养后长出的菌落数量。,包括细菌、霉菌和酵母菌的菌落总数。,菌落总数所用培养基、培养温度、培养时间的差异会影响到菌落计数的结果。因此，必须严格遵照国家规定的检验方法中的操作条件，以获得始终可比的结果。,菌落总数的食品卫生意义：判定检样被微生物污染的程度，预测食品存放的期限。,10,食品卫生微生物学检验,大肠菌群,大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而是指具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，是评价食品卫生质量的重要指标之一。,大肠菌群在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37能分解乳糖产酸产气的革兰阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯菌属和肠杆菌属等四个属的细菌。,大肠菌群是作为粪便污染指示菌提出来的，该菌群的检出，可推测检样中存在着肠道致病菌污染的可能性。,大肠菌群的食品卫生意义：作为粪便污染食品的指示菌，作为肠道致病菌污染食品的指示菌。,11,食品卫生微生物学检验,大肠菌群,属,代表种,致病性,埃希菌属(Escherichia）,大肠埃希菌,(E.coli),肠道外感染，急性腹泻。,枸橼酸杆菌属(Citrobacter),弗劳地枸橼酸杆菌(C.freundii),条件致病菌，引起继发性感染。,克雷伯菌属(Klebsiella),肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae),肺炎，泌尿系、创伤感染、败血症等。,肠杆菌属(Enterobacter),产气杆菌(E.aerogenes),很少引起原发性感染。,12,食品卫生微生物学检验,实验预算,编写实验预算必须仔细阅读操作步骤，确认器材。,例如：P,10,7.操作步骤 7.1.1“以无菌操作将检样25g(ml)剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液灭菌玻璃瓶内。”,取“25ml”联想到10ml无菌刻度吸管和洗牙球，无菌吸管应该怎样包装灭菌？,“剪碎”固体样品需要无菌剪刀，如果是液体检品则不需要。,“225ml灭菌生理盐水”，应该装在250ml的盐水瓶里，怎样配制生理盐水？需要什么物品和器材？,考虑问题应该周到，设备、材料准备齐全，确保实验顺利进行。,13,食品卫生微生物学检验,器材准备,1.冰箱：04,2.恒温培养箱：35,37,3.恒温水浴箱：45,47,4.灭菌1ml刻度吸管：3支10组2倍,5.灭菌10ml刻度吸管：2支10组2倍,6.灭菌90mm平皿：7个10组2倍,7.灭菌70mm平皿：4个210组2倍,8.灭菌中试管：2支10组2倍,14,食品卫生微生物学检验,培养基预算,乳糖发酵管：微量乳糖发酵管（已购买）,乳糖胆盐发酵管（见P,205,4.9)：10ml10支10组120 300ml4瓶分装100支（倒放小倒管）,单独灭菌（115）,以下培养基121(0.12MPa)15分钟,营养琼脂培养基：（15ml7个平皿=105ml 120 130ml）130ml10组120（12瓶）,0.85%生理盐水：225ml1瓶10组120（12瓶）,0.85%生理盐水：100ml1瓶10组120（12瓶）,伊红美蓝平板：42块10组120（300 ml3瓶）,EC肉汤(见P,206,4.11)：5ml 4支10组120 250ml1瓶 分装50支（倒放小倒管）,(Escherichia coli Broth,简称 EC Broth),15,食品卫生微生物学检验,刻度吸管的无菌操作方法,吸球的选择：无菌操作时，一般不使用,洗耳球,。5毫升和10毫升刻度吸管用,洗牙球,，1毫升刻度吸管套用合适的小吸球。,无菌操作方法：左手手指捏住吸管头包装纸套约5厘米处，右手向前旋松纸套、撕断包装纸头，如果吸管头部外测有棉花絮，应该烧掉，然后套上吸球，以免连接部位漏气。此时，包装纸套出口处已经污染。应把包装纸反向拉开，折出一个,无菌倾斜出口,，退出吸管，管尖呈30,40度角离开无菌包装纸套。,吸球的按压程度，以按压松开以后，能吸取110的液体为宜。这个按压程度，很容易控制吸管中液体，移液过程中，也不会因为失控，对吸球过度加压或减压，液体就不会外流，空气也不容易进入吸管内，这样可以把污染降到最低程度。,16,食品卫生微生物学检验,刻度吸管的准备,吸管头塞脱脂棉1,1.5厘米，松紧合适，太松不能有效过滤微生物，太紧阻力大，影响吸取标本。,将大版报纸纵向裁成1/2和1/6版大小的纸条(长54cm，宽 20cm 和6.5cm）,。,用宽6.5cm的纸条包吸管，纸条与吸管呈30度角，从管尖部分开始包（不得从吸管头包起），纸条包住吸管向前转动几圈，将吸管尖退入纸筒内约3,4 厘米，把纸筒起始端压平，打折180度（折3,4 厘米长、纸筒壁厚度约三层纸，不容易被管尖扎破），转动并压住起始端打折部分，继续转动。转动时，右手将纸条向前推平，左手将吸管向后拉紧，同时向前转动，吸管就能够包得很紧。,纸筒形成以后,，把末端空心纸筒压平固定，打折，系牢，多余的纸撕掉。,每10支用1/2版（宽 20cm）的报纸包成1包。,高压蒸汽灭菌，烤干备用。,17,食品卫生微生物学检验,实验室人员基本要求 GB4789.1,检验人员应具有相应的教育、微生物专业培训经历，具备相应的资质，能够理解并正确实施检验。,检验人员应掌握实验室生物检验安全操作知识和消毒知识。,检验人员应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止人为污染样品。,检验人员应在检验过程中遵守相关预防措施的规定，保证自身安全。,有颜色视觉障碍的人员不能执行涉及到辨色的实验。,18,食品卫生微生物学检验,常用器材摆放顺序：电源插座试管架酒精灯污物盘。,试管架上器材：靠近插座一侧第1和第2列分别放置接种针和,接种环，另一侧中间两行放置油性笔和打火机。,器材使用后，必须放回原处，依次摆整齐。,19,食品卫生微生物学检验,实验室器材 整齐有序,20,食品卫生微生物学检验,