非发酵菌.ppt

非发酵革兰阴性杆菌l非发酵菌是一群需氧、无芽孢、氧化分解利用糖类或是不利用糖做为能量来源的革兰阴性杆菌。l非发酵菌与其它苛养非糖发酵的革兰阴性杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。非发酵菌的共同特征1、为需氧菌，KIA培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色，葡萄糖O/F试验为氧化型或产碱型2、氧化酶阳性（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌阴性），但并非所有氧化酶阳性的革兰阴性杆菌都是非发酵菌。3、大多动力阳性（不动杆菌、金色杆菌、莫拉菌属阴性）4、在分类学上分别属于不同的科、属、种，多为条件致病菌 分类、命名主要的非发酵革兰阴性杆菌属被分成6个科：假单胞菌科：根据rRNADNA同源性分为5个rRNA群 1rRNA群群/假单胞菌属假单胞菌属2rRNA群群/伯克霍尔德菌属伯克霍尔德菌属3rRNA群群/丛毛单胞菌属、食酸菌属丛毛单胞菌属、食酸菌属4rRNA群群/短波毛单胞菌属短波毛单胞菌属5rRNA群群/窄食单胞菌属窄食单胞菌属6其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等产碱杆菌科：产碱杆菌属黄杆菌科：金黄杆菌属莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属甲基球菌科根瘤菌科非发酵菌常见菌属假单胞菌属(Pseudomonas)不动杆菌属(Acinetobacter)寡养单胞菌属(Stenotrophmonas)伯克菌属（Burkholderia）产碱杆菌属(Alcaligenes)无色杆菌属(Achromobacter)莫拉菌属(Moraxella)金氏杆菌属(Kingella)金黄杆菌属(Chryseobaterium)艾肯杆菌属(Eikenella)土壤杆菌属(Agrobacterium)黄单胞菌属(Xanthomonas)丛毛单胞菌属(Comamonas)食酸菌属（Acidovorax）2013年瑞金医院的菌种构成（5596株）假单胞菌属直或微弯无芽孢革兰阴性杆菌，氧化酶+，动力+（一个或多个极鞭毛），严格需氧，氧化利用葡萄糖、触酶阳性、MAC生长，可产水溶性色素。本属包括铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌等。药敏试验非发酵革兰阴性杆菌除铜绿假单胞菌、不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽寡养单胞菌外药敏试验不能用纸片法，可用稀释法铜绿假单胞菌生物学特性细长革兰阴性杆菌，极单鞭毛，严格需氧，氧化利用葡萄糖、MAC生长在普通琼脂平板上产生特征性的蓝绿色水溶性绿脓素和黄绿色青脓素（荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌也可产生）血平板上形成扁平，湿润，边缘不齐，有金属光泽，有生姜气味的灰绿色菌落，并形成透明溶血环有时可产生水滴样样菌落，无色素不溶血（囊性纤维化病人）最适生长温度35，4不生长，42可生长O/F试验（氧化型）抗原性具有菌体具有菌体(O)抗原、鞭毛（抗原、鞭毛（H）抗原）抗原O抗原有两种成分：外膜蛋白和脂多糖，抗原有两种成分：外膜蛋白和脂多糖，前者具有属特异性，后者具有型特异性，前者具有属特异性，后者具有型特异性，可用于细菌分型可用于细菌分型抵抗力对外界因素的抵抗力比其他无芽孢菌强在潮湿环境中能长期生存（烧伤病房）临床株对多种抗生素不敏感。致病物质侵袭力侵袭力 ：菌毛、荚膜多糖（藻朊酸盐）：菌毛、荚膜多糖（藻朊酸盐）外毒素外毒素 外毒素外毒素A A 内毒素内毒素溶血素溶血素蛋白溶解酶蛋白溶解酶临床意义 分布广泛，是非发酵菌中最具临床意义的细菌，也是医院内感染最多见的细菌，主要引起条件感染。感染多发生于烧伤、急性白血病、器官移植病人等正常防御机制改变或缺损的患者，感染多位于潮湿部位，如气管造口、留置的导管创面、外耳道、角膜等囊性纤维化病人呼吸道分离的铜绿假单胞菌具有生物膜（大量藻酸盐包围了菌体），导致本病的治疗困难其淡蓝色脓性渗出物及闻到绿脓素的生姜样气味具有特征性。铜绿假单胞菌的鉴定95%以上的铜绿假单胞菌可通过以下几个特征鉴定：氧化酶阳性。菌落较大，生姜样气味。绿脓素产生。鉴定无色素/只产生青脓素的铜绿假单胞菌42能够生长乙酰胺酶的碱化作用硝酸盐还原铜绿假单胞菌的耐药性细菌耐药机制复杂：外膜通透性降低外膜通透性降低产生灭活酶或钝化酶产生灭活酶或钝化酶主动外排系统将抗生素泵出胞外主动外排系统将抗生素泵出胞外产生生物膜产生生物膜本菌对多种抗菌药物（氨苄西林、四环素、一、二代头孢菌素、头霉素、大环内酯类、磺胺等）天然耐药各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可能发生耐药性改变。铜绿假单胞菌对-内酰胺类抗菌药物的耐药机制L.Silvia Munoz-Price&Robert A.Weinstein.N Engl J Med.2008;358:1271-81.膜孔蛋白缺失：亚膜孔蛋白缺失：亚胺培南胺培南外排泵：美罗培南外排泵：美罗培南-内酰胺酶水解内酰胺酶水解：所有所有2007各医院铜绿假单胞菌对各种抗菌药物的耐药率医院HSH BJH TJH PUHZJHRJHGZHPEDSCH GSH716616 53047344332932917013768头孢他啶39.74316.7 27.725.522.233.15.529.94.7头孢吡肟3342.6 22.7 18.924.114.333.71.24.47.6舒普深26.4 39.7 19.6 22.31618.623.51.883特治星45.8 47.9 27.3 33.726.922.927.41.821.96.5亚胺培南47.8 50.6 22.5 34.139.123.736.57.327.73.2阿米卡星30.6 15.7 22.4 17.419.616.113.11.24.43环丙沙星50.4 27.8 25.9 25.428.224.435.41.22.215.4铜绿假单胞菌的分型血清学分型：菌体O抗原噬菌体分型重复序列PCR脉冲场凝胶电泳脉冲场凝胶电泳荧光假单胞菌产青脓素（荧光素），但不能产绿脓素，4生长,42 不生长,单端鞭毛3根以上，明胶液化阳性。见于水和土壤中，是人类少见的条件致病菌具有嗜冷性，和污染的血制品关系密切，可见于近期受 过血液制品而致菌血症的患者。不动杆菌属属于莫拉氏菌科。根据DNA-DNA杂交和营养特征分为25个基因种醋酸钙不动杆菌鲍曼不动杆菌溶血不动杆菌琼氏不动杆菌约氏不动杆菌洛菲不动杆菌生物学特性生物学特性严格需氧、氧化葡萄糖、无动力、氧化酶阴性、硝酸盐还原阴性的革兰染色阴性球杆菌。常似双球菌，有时不易脱色，易误认阳性菌；血平板培养24小时后，形成光滑，不透明，凸起，无色素形成；溶血不动可产生溶血大多数菌株麦康凯平板上生长良好，呈无色或淡粉红色 鲍曼不动杆菌革兰染色 鲍曼不动杆菌菌落特征鲍曼不动杆菌42 可生长临床意义该菌广泛存在于自然界，属条件致病菌，在非发酵菌中分离阳性率仅次于铜绿假单胞菌，可引起呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染。能够在大多数环境表面生存，医院获得性感染最常见的是呼吸道或手术部位、应用器械或ICU的住院患者超级细菌：泛耐药鲍曼不动杆菌（伊拉克菌）瑞金医院鲍曼不动杆菌敏感率变化趋势窄食单胞菌属窄食单胞菌属有5个菌种，最常见为嗜麦芽窄食单胞菌1961年根据其鞭毛特征命名为嗜麦芽假单胞菌1983年归入黄单胞菌属，命名为嗜麦芽黄单胞菌，但其无黄单胞菌素，无植物病原性，能在37生长，与其他黄单胞菌不同1993年此菌命名为嗜麦芽窄食单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌为有动力革兰阴性杆菌，具有极丛鞭毛，血平板上菌落粗糙呈淡黄色或浅绿色，有氨气味。根据 赖氨酸和DNA酶阳性、氧化酶阴性可很容易与其他假单胞菌区别，葡萄糖氧化缓慢，可快速氧化分解麦芽糖。本菌的一个重要特征是对氨基糖苷类抗生素、碳青霉烯类天然耐药，但对TMP/SMZ敏感。可用于纸片法药敏试验的抗菌药物：甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲噁唑、米诺环素和左氧氟沙星嗜麦芽寡养单胞菌端丛鞭毛临床意义嗜麦芽寡养单胞菌分布广泛，是一种重要的医院获得性病原体，可分离于几乎所有部位，居临床分离的非发酵菌第3位引起本菌定植和感染的危险因素有：机械通气、广谱抗生素的应用、化疗、插管和中性粒细胞减少等。伯克霍尔德菌属Burkholderia本属菌包括13个种，其中假鼻疽伯克霍尔德菌B.pseudomallei、洋葱伯克霍尔德菌B.cepacia、唐菖蒲伯克霍尔德菌B.gladioli和皮氏伯克霍尔德菌B.pickettii与人类疾病相关假鼻疽伯克霍尔德菌（B.pseudomallei）可致人或动物类鼻疽（可作为生物恐怖细菌）可潜伏感染，首次接触多年后复发。假鼻疽伯克菌的传播主要是通过呼吸道或破损的皮肤的直接接触，对类鼻疽的明确诊断依靠对临床标本中本菌的分离和鉴定假鼻疽伯克菌的生长有特定的生态区域，存在于赤道南北纬20度之间的土壤和不流动的水中，主要在泰国和越南。假鼻疽伯克霍尔德菌革兰阴性杆菌，两端浓染，极丛鞭毛常规培养基中易生长，菌落圆形突起有光泽，时间较久产生皱缩形菌落，同斯氏假单胞菌相似氧化酶阳性可氧化分解多种糖类洋葱伯克霍尔德菌（B.cepacia）植物病原菌，80年代早期开始作为条件致病菌出现，在慢性肉芽肿和囊性纤维化的病人中常引起高死亡率和肺功能的全面下降。可从各种水源和潮湿表面分离到，能在某些消毒剂中生长极丛鞭毛，氧化酶弱阳性（93%）是非发酵菌中仅有的两种赖氨酸脱羧酶阳性的细菌之一可用于纸片法药敏试验的抗菌药物：甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲噁唑、美罗培南、米诺环素和头孢他啶产碱杆菌属为氧化酶阳性的革兰氏阴性杆菌，通过周鞭毛运动，在含蛋白的肉汤中产氨。在肉汤培养基表面形成菌膜，管底有粘性沉淀有医学意义的产碱杆菌有 粪产碱杆菌 皮氏产碱杆菌大部分感染是条件致病，主要来自潮湿环境，如雾化器、呼吸机和灌洗液等，血、痰、尿是常见发现部位。产碱杆菌属粪产碱杆菌不分解糖类，某些菌株可产生特征性水果香味并使血平板变绿金黄杆菌属金色杆菌属氧化酶阳性，动力阴性，吲哚阳性，氧化葡萄糖，产黄色色素 产吲哚金黄杆菌 脑膜脓毒金黄杆菌 自然存在于土壤、水、植物和粮食中，在医院主要存在于有水的环境，不是人体正常军群金黄杆菌属 产吲哚金黄杆菌是本属临床标本中最常分离到的菌株，其菌落呈深黄色有水果香味脑膜脓毒金黄杆菌产生很浅的黄色素，是使人类致病最相关的菌种，对早产儿具有高度致病性，可致新生儿脑炎，可在婴儿室引起流行莫拉菌属莫拉菌属的生物学特征：细菌形态呈微小、无动力、细菌形态呈微小、无动力、革兰阴性双球菌或双杆菌革兰阴性双球菌或双杆菌血平板培养血平板培养24h后菌落小呈针尖样后菌落小呈针尖样氧氧化化酶酶阳阳性性（与与不不动动杆杆菌菌区区别别）、不不能能氧氧化化糖类（与奈瑟菌区别）糖类（与奈瑟菌区别）本菌可引起中耳炎、结膜炎、角膜炎、慢性鼻窦炎、心内膜炎及脑膜炎等氧化酶阴性，无动力氧化酶阴性，无动力不动杆菌属不动杆菌属氧化酶阴性，有动力氧化酶阴性，有动力嗜麦芽寡养单胞菌嗜麦芽寡养单胞菌氧化酶阳性，无动力氧化酶阳性，无动力莫拉菌属莫拉菌属金黄杆菌属金黄杆菌属氧化酶阳性，有动力氧化酶阳性，有动力产碱杆菌产碱杆菌洋葱伯克菌洋葱伯克菌类鼻疽伯克菌类鼻疽伯克菌铜绿假单胞菌及其他大部铜绿假单胞菌及其他大部分假单胞菌分假单胞菌非非发发酵酵菌菌初初步步鉴鉴定定脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液分 离 培 养血、麦康凯直接涂片染色血液粪 便分 离 培 养SS麦康凯.初步鉴定菌落特征，色 素、氧化酶、KIA、动力最后鉴定生化反应分型：血清学增 菌营养肉汤革兰阴性杆菌菌的检验程序直接涂片染色革兰阴性杆菌氧化酶氧化酶葡萄糖氧化葡萄糖发酵非发酵菌肠杆菌科葡萄糖发酵葡萄糖发酵非发酵菌动力阳性动力阴性气单胞、邻单胞、弧菌巴斯德菌不动杆菌、嗜麦芽寡养单胞菌葡萄糖氧化革兰阴性杆菌的初步鉴定革兰阴性杆菌的初步鉴定假单胞菌、产碱杆菌、金黄杆菌