大肠杆菌的分离和培养实验PPT优质课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,大肠杆菌的分离和培养实验,第一部分 微生物的利用,微生物,：是指,结构简单、形体微小,的,单细胞,、,多细胞,或,没有细胞结构,的,低等生物,，如酵母菌、细菌、放线菌、霉菌、蓝细菌和病毒等。,绝大多数,微生物,与传染病无关,，,90%,以上,的微生物是,对人类有益,的。,微生物有,多种用途,，许多,抗生素,来源于,放线菌和霉菌,；有些食品由,微生物发酵,制成，如,酒,由,酵母,发酵产生，,腐乳,由,红曲霉,和,毛霉,发酵制成。,实验,1,大肠杆菌的培养和分离,基本要求,1.,进行大肠杆菌的,扩增,，利用,液体培养基,进行细菌,培养,的操作。,2.,进行大肠杆菌的,分离,，用,固体平面培养基,进行细菌的培养。,一、大肠杆菌,革兰氏,阴,性、,兼性厌氧,的肠道杆菌,在肠道中一般对人无害,但也有一些菌株对人体是有害的，可侵袭肠粘膜并产生毒素,任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。,结晶紫 碘液,95%,乙醇,革兰氏染色法,1min,革兰阳性,革兰阴性,1min,脱色,复染,菌落,（,colony,）：,一个,细菌,细胞,在,固体培养基,上发展成一个,肉眼可见,，具一定形态结构的,子细胞群,。,光滑型菌落,粗糙型菌落,二、细菌的培养和分离,1,、实验仪器设备：,移液枪,接种环,玻璃刮刀,超净工作台,（保证,无菌,环境）,高压蒸汽灭菌锅,恒温培养箱,摇 床,2,、培养基：,平板,斜面,固体培养基,LB,培养基：,蛋白胨：,0.5g,酵母提取物：,0.25g,NaCl:0.5g,H,2,O:50mL,琼脂：,1g,液体培养基,固体培养基,调,pH,值,菌膜,菌沉淀,均匀浑浊,对照,液体培养基（培养液）,3,、实验步骤：,（,1,）培养基、培养皿灭菌,高压蒸汽灭菌法,将配制好的,50ml LB,液体和固体培养基,分别装入,250ml,三角瓶中，加上,封口膜,；,将培养皿用,牛皮纸,包好；,置于灭菌锅内,1kg,压力,灭菌,15min,（,121,）,无菌技术,最常用的灭菌方法是,高压蒸汽灭菌,，它可以杀灭,所有,的生物，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。,有些,玻璃器皿,也可采用,高温干热灭菌,。为防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用,棉花塞（不能用脱脂棉：易吸水引起后引起污染）,，也可采用各种金属、塑料、,封口膜,及硅胶帽，它们,只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过,。,（,160,2h,或,170,1h,）,高压蒸汽灭菌法：,玻璃器皿、金属、移液枪头等,（火焰）灼烧,：接种环、试管口、三角烧瓶口,紫外灯,+,过滤风,：超净台灭菌,消毒：,70%,酒精棉球,（,消毒：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。）,（,2,）倒平板,灭菌后，待,灭菌锅压力与大气压力,相同,时打开锅盖,将有培养基的三角瓶和培养皿放到,超净台,上,打开超净台的,紫外灯和过滤风,，待固体培养基,冷却,到,60,时，关闭紫外灯,用,酒精棉球,消毒,桌面和手。,倒平板：,10-12ml,培养基,/,培养皿,每倒入一个后立即置于水平位置上，,轻轻晃动,，使培养基,铺满,平皿底部，,待凝,，并形成平面。,酒精灯旁：,左手？右手？,制作,试管斜面,：,将配制好的呈熔化状态的培养基,转移,到试管中时必须用,三角漏斗,灭菌试管冷却到,50,左右，,把试管棉塞一端搁在玻棒上，,待冷凝后即成试管斜面,将分装好的含培养基的试管,灭菌,P21,小字部分,1/3,在试管外，,2/3,在试管内,正确,不正确,棉塞制作,（,3,）接种培养,左,手：将大肠杆菌,斜面,和有,液体,培养基,的,三角烧瓶,，靠近酒精灯火焰；,右,手：拿,接种环，,并用,无名指,和,小指,夹住斜面的棉塞和三角瓶的封口膜；,接种环在,火焰,上烧红，再深入到斜面，,使环接触培养基,，再取菌体；,将菌体放入三角瓶的,液体,培养基中，,瓶口封口膜和管口棉塞复原；,将三角瓶置于,37,摇床,振荡,培养,12h,。,（,4,）划线分离,在酒精灯火焰上,灼烧,接种环；,将摇床上培养了,12h,的菌液 打,开，接种环,部分,深入到菌液中；,在固体培养基的平板上,连续,划线，接种环只,在菌液中蘸菌液,一次,，划线后盖好培养皿；,将培养皿,倒置,（盖在下面），,放到恒温培养箱中培养,12-24h,后，可看到在划线的,末端,出现不连续的,单个菌落,，表明菌已被,分离,。,划线分离法,划线的起点要有菌，且每一次新的起点应比前一次的起点菌含量（浓度）,低,划线的最终点,不能,与前面的划线点,重叠,除第,1,次外，其余几次划线前，都要将接种环火焰灼烧,恒温培养箱,平板倒置,防止,培养皿盖,上的,冷凝水滴,落入,培养基表面,，使菌落中的菌随水扩散，造成污染。,划线分离法,（,5,）斜面接种保存,在无菌操作下将单菌落用,接种环,取出，再用划线法接种在,斜面上,。,37,培养,24h,后，,4,冰箱,保存,。,涂布分离法,首先，涂布分离法的操作比划线分离法更复杂。因为涂布分离法包括先将菌液稀释的步骤，而且通常要稀释多个浓度，常稀释到,10,-5,-10,-7,倍。（稀释实验过程见,P26,图）在涂布时，从不同稀释度的稀释菌液中各取,0.1ml,放在平板固体培养基上，再用玻璃刮刀涂布后培养。,其次，涂布分离法更易分开单菌落。通常培养皿中有,20,个以内,的单菌落为最合适。,土样稀释,液样稀释,未稀释的结果,培养基根据凝固剂加入量的多少，产生不同的物理性质。可以分为：,液体培养基,半固体培养基（如,0.2,0.5,的琼脂）,固体培养基（约,2,的琼脂或,5-12,的明胶）,