靶向肝纤维化ppt课件.ppt

发病机制发病机制促肝纤维化形成细胞因子有促肝纤维化形成细胞因子有：转化生长因子1(T GF-1)结缔组织生长因子(CTGF)血小板源性生长因子(PDGF)肿瘤坏死因子(TNF-)白细胞介素1(IL-1)等;抑制肝纤维化形成的细胞因子有抑制肝纤维化形成的细胞因子有：干扰素(IFN)肝细胞生长因子(HGF)白细胞介素10(IL-10)等。（1）许多体外和体内模型机制的确认和抗纤维化因子试验方面的限制。）许多体外和体内模型机制的确认和抗纤维化因子试验方面的限制。（2）缺乏量化肝纤维化程度和肝纤维化的动态进展以及患者肝纤维化逆转的敏）缺乏量化肝纤维化程度和肝纤维化的动态进展以及患者肝纤维化逆转的敏感方法。感方法。理论应用到临床实践上受到了阻碍：理论应用到临床实践上受到了阻碍：本文主要讨论当前在抗肝纤维化药物的研制方面的问题和易犯的错误，以及本文主要讨论当前在抗肝纤维化药物的研制方面的问题和易犯的错误，以及克服临床验证障碍的策略。克服临床验证障碍的策略。p HSC的活化和增殖p 上游引起HSC激活的细胞的激活p 致纤维化生长因子，细胞因子和其他调节因子p 在HSC细胞内致纤维化途径和上游细胞的激活p 刺激纤维降解过程逆转当前的纤维化 Promising Targets for Antifibrotic Therapies有前景的靶向抗肝纤维化治疗有前景的靶向抗肝纤维化治疗 抗纤维化治疗的靶点有细胞，信号转导通路和在肝纤维化形成或逆转抗纤维化治疗的靶点有细胞，信号转导通路和在肝纤维化形成或逆转过程中的关键性分子。过程中的关键性分子。例如：例如：In Vitro Models(体外模型)Animal Models(动物模型)Antifibrotic Drug Development(抗纤维化药物开发)Serum Fibrosis Markers(血清纤维化标志物)Imaging of Liver Fibrosis(肝纤维化的影像学检查)Preclinical Models to Test Potential Antifibrotics检测潜在抗肝纤维化的临床前模型检测潜在抗肝纤维化的临床前模型In Vitro Models(体外模型)p培养激活的肝星状细胞和肝星状细胞系培养激活的肝星状细胞和肝星状细胞系 p肝纤维化过程中涉及的其他类型细胞的培养肝纤维化过程中涉及的其他类型细胞的培养p组织精细切片培养组织精细切片培养 p人工器官组织培养工程人工器官组织培养工程优点：低成本、高重复性优点：低成本、高重复性 缺点：不能反映体内控制纤维形成或纤维溶解的复杂的相互作用缺点：不能反映体内控制纤维形成或纤维溶解的复杂的相互作用 培养激活的肝星状细胞和肝星状细胞系培养激活的肝星状细胞和肝星状细胞系 肝星状细胞的多种起源肝星状细胞的多种起源典型肝星状细胞系：典型肝星状细胞系：uCCL4诱导的肝纤维化分离出的小鼠自发永久性HSC的克隆uSV40病毒T抗原诱导的人HSC系LX-1和和LX-2永久细胞u端粒酶逆转录酶基因的逆转录酶病毒载体转染生成的TWNT其他类型细胞的培养其他类型细胞的培养:活化胆管上皮细胞系、肝细胞、库普弗细胞、各种淋巴细胞亚群离体新鲜精细肝切片能维持肝离体新鲜精细肝切片能维持肝细胞至少细胞至少24小时小时的代谢功能的代谢功能与传统细胞培养相比优势：与传统细胞培养相比优势：n切片可以直接从包含自然发生激活的肝星状细胞的纤维化肝脏制备切片可以直接从包含自然发生激活的肝星状细胞的纤维化肝脏制备 n相当于三维重建的真实纤维化的肝细胞（实质细胞和间质细胞）微环境相当于三维重建的真实纤维化的肝细胞（实质细胞和间质细胞）微环境n 从少数动物制备的切片中可以有效地筛选多种药物从少数动物制备的切片中可以有效地筛选多种药物n可以同时对药物的肝毒性进行测试可以同时对药物的肝毒性进行测试组织精细切片培养组织精细切片培养毒理学研究毒理学研究人工器官组织培养工程人工器官组织培养工程通过生物工程方法在精确控制的环境中，以恢复正常或病理肝脏结构通过生物工程方法在精确控制的环境中，以恢复正常或病理肝脏结构为目标的微型和纳米技术已经取得了很快的发展。为目标的微型和纳米技术已经取得了很快的发展。物理工程生物物理工程生物3D:更加生理，具有重建体外多细胞性肝更加生理，具有重建体外多细胞性肝环境的潜力。环境的潜力。Animal Models(动物模型)p动物模型实验结果的解释动物模型实验结果的解释p胆汁性肝纤维化的动物模型胆汁性肝纤维化的动物模型p肝毒素诱导的肝纤维化动物模型肝毒素诱导的肝纤维化动物模型p非酒精性脂肪性肝炎的动物模型非酒精性脂肪性肝炎的动物模型p转基因和基因敲除在体模型转基因和基因敲除在体模型小鼠模型优点：小鼠模型优点：u有经济效益u需要更少的数量（可能是药物开发早期阶段的一个限制因素）u允许使用基因改造（转基因或基因敲除）的动物彻底验证目标 需要特别注意小鼠的遗传背景，这会影响它们发生肝纤维变性的敏感度。需要特别注意小鼠的遗传背景，这会影响它们发生肝纤维变性的敏感度。结果解释的主要内容：结果解释的主要内容：u肝纤维化研究敏感品系的选择u遗传背景的纯洁性u使用野生型同窝的对照 肝毒素诱导的肝纤维化动物模型肝毒素诱导的肝纤维化动物模型四氯化碳（四氯化碳（CCl4）诱导的反复肝细胞死亡所致肝纤维化）诱导的反复肝细胞死亡所致肝纤维化 可以对急性肝损伤、肝纤维化进展和纤维化逆转的研究可以对急性肝损伤、肝纤维化进展和纤维化逆转的研究 缺点：严重的肝细胞坏死、对大量氧化应激的依赖缺点：严重的肝细胞坏死、对大量氧化应激的依赖肝毒素硫代乙酰胺肝毒素硫代乙酰胺(TAA)的长期注射的长期注射非酒精性脂肪性肝炎的动物模型非酒精性脂肪性肝炎的动物模型l最有效的模型利用代谢综合征患者的遗传易感性与高脂饮食最有效的模型利用代谢综合征患者的遗传易感性与高脂饮食相结合。相结合。l当添加蛋氨酸胆碱缺乏饮食时，自发代谢综合征及当添加蛋氨酸胆碱缺乏饮食时，自发代谢综合征及2型糖尿病型糖尿病动物模型动物模型(OLETF大鼠大鼠)在在8周内发生肝硬化。周内发生肝硬化。Antifibrotic Drug Development(抗纤维化药物开发抗纤维化药物开发)p靶向途径靶向途径p替代和补充药物替代和补充药物p药物重新定位药物重新定位p靶向药物输送到纤维化的肝细胞靶向药物输送到纤维化的肝细胞靶向途径靶向途径替代和补充药物替代和补充药物靶向药物输送到纤维化的肝细胞靶向药物输送到纤维化的肝细胞u增加局部药物浓度增加局部药物浓度u减少副作用减少副作用 Noninvasive Means to Assess Liver Fibrosis and Fibrogenesis(评估肝纤维化及纤维形成的无创性方法评估肝纤维化及纤维形成的无创性方法)p血清纤维化标志物血清纤维化标志物p用蛋白质组学和转录组学方法寻找更好的血清标志物的尝试用蛋白质组学和转录组学方法寻找更好的血清标志物的尝试p肝纤维化的影像学检查肝纤维化的影像学检查l超声弹性成像（超声弹性成像（FibroScan）l肝纤维化和纤维形成的分子成像肝纤维化和纤维形成的分子成像 纤维化标志物组合：更好地反映结缔组织的动态改变纤维化标志物组合：更好地反映结缔组织的动态改变 uFibro Test:2-巨球蛋白、载脂蛋白、肝珠蛋白、总胆红素、巨球蛋白、载脂蛋白、肝珠蛋白、总胆红素、-谷氨酰胺转肽酶）谷氨酰胺转肽酶）uELF评分评分:年龄、年龄、HA、血清前胶原肽（、血清前胶原肽（PNP）、）、TIMP-1 ELF评分研究显示：评分研究显示：82%88%患者可避免肝活组织检查。患者可避免肝活组织检查。血清标志物血清标志物蛋白质组学蛋白质组学 转录组就是转录后的所有转录组就是转录后的所有mRNA的总称。与基因组不同的总称。与基因组不同的是，转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细的是，转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下，其基因表达情况是不胞在不同的生长时期及生长环境下，其基因表达情况是不完全相同的。完全相同的。通常，同一种组织表达几乎相同的一套基因通常，同一种组织表达几乎相同的一套基因以区别于其他组织。以区别于其他组织。转录组谱可以提供什么条件下什么基因表达的信息，并转录组谱可以提供什么条件下什么基因表达的信息，并据此推断相应未知基因的功能，揭示特定调节基因的作用据此推断相应未知基因的功能，揭示特定调节基因的作用机制。通过这种基于基因表达谱的分子标签，不仅可以辨机制。通过这种基于基因表达谱的分子标签，不仅可以辨别细胞的表型归属，还可以用于疾病的诊断。别细胞的表型归属，还可以用于疾病的诊断。转录组学转录组学 转录组学是从转录组学是从RNA水平研究基因表达的情况。研究转录组的一个重要方水平研究基因表达的情况。研究转录组的一个重要方法就是利用法就是利用DNA芯片技术检测有机体基因组中基因的表达。芯片技术检测有机体基因组中基因的表达。超声弹性成像（超声弹性成像（FibroScan）以超声（以超声（5MHz）和低频弹性波（）和低频弹性波（50Hz）结合的测量组织硬度的仪器。通过）结合的测量组织硬度的仪器。通过测定肝脏瞬时弹性图谱来反映肝实质硬度，通过肝脏硬度来判断肝脏纤维化测定肝脏瞬时弹性图谱来反映肝实质硬度，通过肝脏硬度来判断肝脏纤维化的程度的程度，并对肝纤维化进行准确分级。，并对肝纤维化进行准确分级。分子成像分子成像