中脑腹侧被盖区MAPK在脑源性神经营养因子调节酒精偏好行为中的作用机制.pdf

中脑腹侧被盖区 在脑源性神经营养因子调节酒精偏好行为中的作用机制王家晞熊君伟武晓彬王鹏宇王佳佳关艳中(牡丹江医学院黑龙江 牡丹江)摘要:目的 研究腹侧被盖区()中丝裂原活化蛋白激酶()参与脑源性神经营养因子()调节酒精偏好的作用机制 方法 大鼠随机分为饮水组(只)和饮酒组(只)采用间歇性主动饮酒()范式建立酒精依赖模型饮水组双瓶自由选择饮水饮酒组在第 天进行脑立体定位手术并在 内植入套管 饮酒组在术后创伤恢复期继续饮酒至第 日待饮酒组酒精摄入量达到稳定水平后开始酒精戒断 再将其随机分为 组、组、(抑制剂)组、(激活剂)组 组和 组 每组分别在 注射相应的药物 后分别测量大鼠水和酒精的摄入量 结果 饮酒组和饮水组大鼠体重以及 总液体摄入量无统计学差异(.)饮酒组在第 日酒精摄入量达到(.)/且饮酒偏好达到(.)与 组和 组比较 组大鼠酒精偏好显著降低(.)组酒精偏好降低(.)值得注意的是 和 联合注射会增加大鼠酒精偏好即 拮抗 对大鼠酒精偏好的调节作用(.)./(.).(.).(.).(.).:年 月 牡丹江医学院学报 第 卷 第 期 酒精使用障碍()是一种精神疾病定义为不受控制的过量酒精摄入、不饮用酒精时的负性情绪状态和强迫饮酒 了解导致 的潜在神经生物学对于开发治疗该疾病的新药至关重要 有研究提出了描述成瘾不同阶段涉及的神经环路的概念框架其中参与奖赏和动机的脑区腹侧被盖()是有关酒精奖赏的重要脑区为受酒精暴露干预的众多脑区提供多巴胺能神经传递 神经营养因子()家族是一个蛋白家族它在调控所有中枢以及外周神经元系统活动中至关重要 的分泌依赖于神经元去极化且在脑区促进长时程增强发挥重要作用 的作用主要由其同源受体原肌球蛋白相关激酶()介导启动的下游通路主要有磷脂酶()、磷脂酰肌醇 激酶()和丝裂原活化蛋白激酶()等通路的活化是 发挥神经保护功能的基础 年 等人发现长期而非急性给予吗啡或可卡因可增加 中/通路中 激酶的催化活性而在 长期输注 可阻断吗啡诱导的 活性增加 结果表明 可以减弱慢性酒精暴露反应的增强这些机制很可能介导药物滥用对大脑功能的持久影响 此外 年 等人发现体内给予胶质细胞源性神经营养因子()导致 中/磷酸化强烈增加阻断 的 /信号通路可减轻酒精摄入 但 区 对大鼠酒精偏好行为调节的下游通路是否与/有关尚未知 本实验以/为靶点通过 区脑立体定位注药的操作方法观察在 作用下大鼠酒精偏好的调控情况来进一步探索 对酒依赖大鼠酒精偏好有益调节的下游通路 材料和方法.实实验验动动物物 雄性 级成年 大鼠体重()由牡丹江医学院动物比较医学中心提供实验动物生产许可证编号:(黑)于通风设备的有机玻璃笼中分别进行单笼饲养双瓶饮水适应一周后开始实验 玻璃笼内温度维持在()湿度维持在 左右维持每 的白昼交替规律 整个实验中提供足量水和粮食并保持通风 所有大鼠相关操作已参考实验动物医学会实验动物护理和使用指南并履行牡丹江医学院动物福利和伦理委员会条例.主主要要试试剂剂及及仪仪器器 食用酒精(浓度)(美国 公司)(美国 公司)(美国 公司)(美国 公司)(美国 公司)(美国 公司)(美国 公司)(美国 公司)脑立体定位仪颅骨钻不锈钢套管导管帽芯微量进样针.酒酒精精依依赖赖模模型型建建立立 大鼠建立(间歇性主动饮酒)模型后随机分组分为饮水组和饮酒组 饮水组双瓶自由饮用纯净水饮酒组为一瓶饮酒瓶(酒精)一瓶饮水瓶(纯净水)每隔 后将饮酒瓶更换为饮水瓶并交换双瓶位置以避免位置偏好 记录每 的饮水量()和饮酒量()并于每周一测量 大鼠体重 大鼠酒精摄入量从逐渐上升到达稳定水平即表明酒精依赖模型建模成功 每 酒精摄入量的计算方法为:饮酒量()酒精浓度 酒精密度/大鼠体重()酒精偏好计算方法为:饮酒量()/总液体摄入(饮水饮酒)量().实实验验分分组组及及处处理理 大鼠随机分组饮水组 饮酒组 饮水组双瓶饮水饮酒组按照 模型建模建模 时对饮酒组大鼠进行脑立体定位植入套管(.)并固定操作创伤恢复期间继续建模 直至第 大鼠酒精摄入量达到稳定水平后戒断 再随机分组为 组 组 组 组 组和 组 用 溶解到 /用 溶解到 /溶于配置好的工作液中(./加到 玉米油中每 工作液)浓度为 /每组药物注射剂量均为./侧速度为./组和 组注射 剂量均为 注射后留针 等待药物彻底进入脑区并扩散 后给予 大鼠酒精并测量 饮水量和饮酒量再计算酒精偏好情况.统统计计学学处处理理 数据使用 .统计软件绘图采用 .计量数据以“均数标准差”表示 组间比较采用 、检验分析样本并进行数据统计.被认为差异具有统计学意义 结果.成成功功建建立立大大鼠鼠酒酒精精依依赖赖模模型型.建模期间 大鼠饮酒组与饮水组体重以及 年 月 牡丹江医学院学报 第 卷 第 期 总液体摄入量情况 建模期间饮酒组与饮水组大鼠的体重相比较没有统计学差异(.)(图)两组大鼠 总液体摄入量()无统计学差异(.)(图).饮酒组大鼠酒精摄入量、酒精偏好情况随着时间推移 大鼠酒精摄入量和酒精偏好升高直至第 已达到稳定基线结果显示酒精依赖模型已被建立(图)图 间歇性饮酒模型建立情况注:饮水组和饮酒组 体重变化:饮水组和饮酒组 总液体摄入量情况:饮酒组 酒精摄入量情况:饮酒组酒精偏好情况.对对酒酒精精偏偏好好的的影影响响 大鼠成功建立酒精依赖模型后戒断 进行微量注射与 组和 组比较 组酒精偏好明显下降(.)(见图)差异有统计学意义()图 区微量注射 后酒精戒断大鼠酒精偏好情况.在在酒酒精精偏偏好好中中的的作作用用 大鼠成功建立酒精依赖模型后戒断 进行微量注射与 组和 组比较(激活剂)组酒精偏好降低(.)差异有统计学意义(.)(抑制剂)组酒精戒断大鼠酒精偏好无明显改变(见图)图 区微量注射 拮抗剂和激活剂后酒精戒断大鼠酒精偏好情况.参参与与 调调节节酒酒精精偏偏好好行行为为 大鼠酒精戒断 后进行 和 联合注药(见表)组酒精偏好量为(.)组酒精偏好量为(.)与 单独注射 组相较 拮抗了 对酒精偏好的调控表 区脑立体定位微量注射对酒精偏好的改变()组别酒精偏好()组.组.组.组.组.注:与 组、组比较 .与 组比较.讨论 是一种慢性复发性脑病对社会负担相当之大 可以导致诸多躯体和精神心理问题具体包括饮酒相关的焦虑症、抑郁和睡眠障碍等随着 的发展许多神经递质系统、神经肽、信号分子发生改变导致酗酒和上瘾的恶性循环 在运动和奖赏处理中发挥核心作用且有研究报道内侧 多巴胺神经元群比外侧 神经元群对酒精刺激更为敏锐 故本研究以 为切入点 作为最简单、有效性高和结果可靠的模型最近越来越受欢迎 与前期研究结果相似本实验采用 模型成功建立了相对稳定的酒精依赖模型研究结果显示随着时间推移和饮酒次数的上升 大鼠的酒精摄入量和酒精偏好也呈现逐渐增加并趋于稳定 本课题组成员前期研究也发现建立此模型可以使 大鼠逐渐上升到稳定的摄入量且 大鼠在酒精戒断 时酒精偏好相关行为较为明显 与神经可塑性的发展有关包括 年 月 牡丹江医学院学报 第 卷 第 期 能突触的长时程增强 与 结合介导的、这些主要通路的激活是 在中枢神经系统发挥功能的途径 已被证明在精神疾病和成瘾中发挥积极和消极的作用 啮齿类动物模型研究中发现 是维持稳态途径的重要组成部分调控与酒精暴露相关的一些不良反应 临床研究也表明 与酒精依赖和复发有关联课题组前期研究发现内注射(一种类似 的小分子化合物)减少大鼠酒精摄入量 通路主要通过调节细胞外信号调节激酶/(/)激活完成转录机制本实验以/的抑制剂 和/的激活剂 为切入点以 大鼠为研究对象在经过 酒精建模后进行戒断发现 微量注射 可以降低大鼠酒精戒断 后的酒精偏好而微量注射 对大鼠酒精戒断 后的饮酒偏好无影响 这进一步对 可能影响 大鼠酒精偏好提供了探索方向 和先前实验报道类似注入外源性 改善了大鼠酒精戒断 后的酒精偏好而 抑制剂 拮抗了 对大鼠酒精戒断 后饮酒偏好的有益调节 研究结果提示 可能是 调控大鼠酒精偏好的下游通路综上所述 外源性注入 可以改善 大鼠酒精戒断 后的酒精偏好而下游通路中 调节 大鼠酒精戒断后再饮酒量 此结果提示 影响 作用于酒精依赖的神经信号通路可以为 的防治提供新思路参考文献 .:.():.():.:.():.().():.():.():.:.():.:.():.():.():.():.():.:.():.():.():.(收稿日期:本文编辑:郭丽双)(上接 页).:.():.:.():.韩旭张雨婷.急诊重症监护室患者死亡的危险因素分析.中国医科大学学报():.():.(收稿日期:本文编辑:黄 蕊)年 月 牡丹江医学院学报 第 卷 第 期