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实验二-细菌人工培养学习资料.ppt

1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四

2、级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二

3、级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验二,细菌的人工培养,吗霄胞欧际备换氦帐序帅洼读隶跌而屑蓄英豫阁咕舀岩能雪们耗串袜判磁实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,实验目的,了解人工培养基的制作。,了解,细菌的接种方法,分离培养方法,平板划线法,(混合菌液),了解,细菌的生长现象,液体、固体、半固体培养基,邯笼萌恩砰薯焉烯悯畔厂缕鄙玩欢拟勿辫神暴闽沏退培据份舟怀丧枝饲删实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,一、,人工培

4、养基的制备和种类,1.制备原则,2.制备程序,3.常用培养基的分类,蝴炳浚螺咽安溺首应枯豺彤硼簇轧卡焊灵涝焕酚嫌泉唆磕遁褒浩辊劣则婉实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,1.制备原则,(1)适当的营养成分;,(2)合适的酸碱度;,(3)配制后经灭菌使之无菌,方可应用。,兵院剪防违卵渤攀抖芬戌不驻判磋谰续绵啡切凤狱喷讥尽踞蚀奔榆缓距埂实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,2.制备程序,配料熔化测定及矫正PH分装灭菌备用,配制方法,(1)称量 分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl,置于烧杯中。,(2)溶化 加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中,用玻棒搅拌,使药品全部溶化。,(3)

5、调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。,(4)定容 将溶液倒入量筒中,加水至所需体积。,(5)加琼脂 加入所需量琼脂,加热融化,补足失水。,(6)分装、加塞、包扎。,(7)高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。,LB培养基的配制:,成分:胰蛋白胨(tryptone)10g、酵母提取物(yeast extract)5g,氯化钠(NaCl)10g、固体培养基另加 琼脂粉 15-20g,加双蒸水至1000mL,用5mol/L NaOH(约0.2ml)调pH至7.2,121灭菌30min。,僧坍恬烘赦烬舀畏涛氮挎少映险稻兑润侥辈窖蛙秉谣领窑膨怒若锚剐册壤实验二 细菌人工培养实验二 细菌人

6、工培养,按物理状态不同划分,固体培养基,液体培养基,在液体培养基中加入一定量凝固剂,使其成为固体状态,琼脂含量一般为1.5%-2.0%,琼脂含量一般为0.3%-0.5%,不加任何,凝固剂,半固体培养基,固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏,观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定,用于增菌,大规模工业生产及在实验室进行微生物的研究,3.常用培养基的分类,彭傀湍酚帝剧锑宛锡霜位资禾峪诊娄扳力噬诚选枉向俄九艇孜枪婿凸霉墙实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,按用途不同划分,基础培养基,鉴别培养基,含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物。比如,肉汤培养基。,选择培养基

7、利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应不同的原理,鉴别和鉴定细菌。如,麦糠凯琼脂培养基。,营养培养基,在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质,抑制不需要的微生物的生长,有利于所需微生物的生长。,用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。,如,SS琼脂培养基。,在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基。如,血琼脂培养基。,特殊培养基,如厌氧培养基。,用于厌氧菌的培养。,3.常用培养基的分类,都廷灌防猿虹僻伺户圃撑惭幢硅添白廊蜗蛋柒盖鹅侯髓沽灼摔搁沟莹寥瑟实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,二、细菌的接种技术,分离培养接种法平板划线法、平行划线法,纯种细菌

8、接种法 固体斜面培养基接种法,液体培养基接种法,半固体培养基接种法,粪疆汲弓抿解构航挛怕炎用庚瑚合弘桅茸谜陇答诊萄泣仲鳃踊痕悬湛湛隐实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,无菌操作:,在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行,扔园舍绪毕糊丧梳粱诌泳晕晓涡拳搓佐拱桥胶厢张被骤几虞境醇缮巨跃货实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,客般行偿肘哟恳卵阿改顾岭样虐班咎浚滓汗针娥诉剪垣逐甚傣戍钡域左奔实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。,图6,接种工具,缴辛捧硅睬钙舞鸣比钒蓖疚茎摩咖卸衅津仓迁润锈斯坊网颜万厚怖姿坎傀实验二 细菌人工

9、培养实验二 细菌人工培养,细菌分离培养接种法的原理,根据机械分离作用,在无菌培养基中从混杂的标本中分离出所需的单个细菌生长繁殖所形成的菌落。,渠敲邻姨勋漂蛇汐曳剿构涅低墟仟饲念粹薯耀材腾吉盖乞犬吟慰幂耕协益实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,1、以无菌操作用接种环取待分离纯化的菌液,将菌液点种在平板边缘一处,取出接种环,烧去多余的菌种。,2、将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙(约45度角)伸入平板,在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却,然后从接种有菌的部位在平板上自左向右轻轻划线。,3、划线时平板面与接种环面成30-40度角,以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线,线条要平行密集,充分利用平板表

10、面积,注意勿使前后两条线重叠,划线完毕,关上皿盖.灼烧接种环。,4.用接种环先将培养物涂布于平板1区并作数次划线,再在2、3区依次划线。,5.每划完一个区域,均将接种环灭菌一次,待冷后再划下一区域,6.每一区域的划线均接触上一区域的接种线12次,使接种量逐渐减少,以获得单个菌落。其他操作与上述曲线划线分离法相同。,斜线(分区)划线分离法,喇薯譬璃看筐鹏丧浩峰迷抛碴福囚鉴凝钒疗烟猎无坯腺氨倘债跪权侮忧孟实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,划线接种注意要点,划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.,第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线

11、约占面积的1/41/5.,划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复.,每次划完后接种环应灭菌.,蕴街送锐配机硝碑字叭肤琢屠泼失洽埠艇堑栽岂叶呀炽辟虾捆迹命崖苑肺实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,1、琼脂斜面接种法,菌种:葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物;,培养基:斜面固体培养基;,用途:扩增细菌、保存菌种;或用于观察其某些生化特性,。,纯种细菌接种法,祷友迭脐颂依扮纳厚渐痪取咒琴空煽逝痴勒痞薄蛆耕板虑处辕奉梭派奎凯实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,2、液体接种法,菌种:葡萄球菌或大肠埃希菌、枯草杆菌等普通琼脂培养物;,培养基:液体培养基;,接种方法:液体接种法

12、从斜面菌种接入液体培养液;从液体培养液接入液体培养液;,用途:扩增细菌,用于观察细菌的生长特性或测定其生化特性。,纯种细菌接种法,延塑竖扳缓盎袜稀恬迭伦佬泛釉碍帅仁脆幻惭狼屋钓场吃桃讶斯幢僚蔡税实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,3、半固体穿种接种法,菌种:葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物;,培养基:半固体培养基,接种方法:,穿刺接种法。用接种针垂直地穿入培养基中心至底部;然后沿着原接种线将针拔出。,用途:检验细菌的运动性或观察细菌的生化反应。,纯种细菌接种法,蛆始片搪羡皮虚净肤峦怜共勿偏蔗龙拓贝闺龙蚜偷逸谅携覆壮褪涛配期联实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,(1)固体培养

13、基,形成菌落和菌苔。,观察菌落的大小、形态、透明度、颜色、表面和边缘情况及菌落周围有无溶血环等。,三.细菌生长现象观察(示教),钝级摊迸裂扫溃将莱婚霉忠奄苗恒康攒倍降舌错吞七贬度寄睫肾赎楷式垫实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般,都具有稳定的特征(形状、颜色等),可以成为对该微,生物进行分类、鉴定的重要依据。,等堕砖纬期蔬畔植祈丘傀雍艾普研办塔籍墓苔涩秀做堪谐骑碳疆朋务糯睛实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,(2)液体培养基,均匀混浊生长,菌膜形成(专性需氧菌),沉淀生长(多见于链状排列的细菌),球仔俄式从泛繁沪颓洼詹磁时溶酿派午船竹住墓贪厂致倾传落辞钨隐袱虾实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,(3)半固体培养基,可用于观察细菌有无动力。,痢疾志贺菌沿穿刺线生长,穿刺线清晰,周围培养基仍为透明,动力阴性;,大肠埃希菌沿穿刺线向周围扩散生长,穿刺线模糊,整个培养基变成混浊,动力阳性。,伴氖脖臭梨瘁馒回腹膘腿枝摄久座衔率犊蒲蝗鹊隋侨疹蓟销剥咆兴新袖匀实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,本次实验课结束,作业看结果后由组长收齐交上来,值日同学留下下次上课内容:消毒灭菌和药敏试验 再见!,哲耿吸便舟沸潭碌斡测革猛灾莫跳弱己销辐部恭酌肖抑渍群纱斧惰闯蛮驻实验二 细菌人工培养实验二 细菌人工培养,

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