1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验课题:观察,DNA,和,RNA,在细胞中的分布,一、实验原理,1.,碱性染料能使核酸着色,甲基绿和吡罗红均为碱性染料;,DNA,甲基绿,绿色,,RNA,吡罗红,红色。,甲基绿与吡罗红作为混合染料使用可显示细胞中,DNA,和,RNA,在细胞中的分布。,2.,盐酸能够改变细胞膜的通透性,,加速染色剂进入细胞,,同时,使染色体中的,DNA,与蛋白质分离,有利于,DNA,与染色剂结合,。,补:高温酸碱等条件能改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞。,我们观察到细胞核中的,DNA,被染成绿色,而细胞质中的,RNA
2、,被染成红色。,操作步骤,注意问题,解释,取口腔上皮细胞,制片,载玻片要洁净,滴一滴质量分数为,0.9%,的,NaCl,溶液,用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻刮几下取细胞,将载玻片在酒精灯下烘干,防止污迹干扰观察效果,保持细胞原有形态,消毒为防止感染,漱口避免取材失败,固定装片,水解,将烘干的载玻片放入质量分数为,8%,的盐酸溶液中,用,30,0,C,水浴保温,5min,改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞,促进染色体的,DNA,与蛋白质分离而被染色,冲冼,涂片,用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片,洗去残留在外的盐酸,染色,滴,2,滴吡罗红甲绿染色剂于载玻片上染色,5min,观察,先低倍镜观察,
3、选择染色均匀、色泽浅的区域,移至视野中央,调节清晰后才换用高倍物镜观察,使观察效果最佳,步骤总结,斐林试剂,苏丹,橘黄色,红色,砖红色沉淀,紫色,苏丹,双缩脲试剂,鉴定物质,试剂,实验现象,还原性糖,脂肪,蛋白质,淀粉,碘,蓝色,生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质和,DNA,的鉴定,1、实验原理:,还原性糖,+,斐林试剂,砖红色沉淀,还原性糖:葡萄糖、麦芽糖、果糖,非还原性糖:蔗糖、淀粉等,+,2、配制斐林试剂:,实验一:还原性糖的鉴定,水浴加热,实验一:脂肪的鉴定,1、实验原理:,脂肪,+,苏丹,橘黄色,脂肪,+,苏丹,红色,取少量脂肪样液,加入苏丹,,震荡,可看到溶液呈了橘黄色,本实验我们用
4、苏丹,做染液。,实验一:蛋白质的鉴定,1、实验原理:,蛋白质,+,双缩脲试剂,紫色络合物,2、材料用具:,豆浆、蛋清、牛奶都是很好的实验材料。,本实验我们用蛋清做实验材料,在用蛋清做实验材料时,要注意将蛋清稀释,如果稀释不够,反应后的产物会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底。,问题探讨,:,1,、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时,为什么要留出一部分样液?,作对照,2,、使用双缩脲试剂时为什么,B,液只能加,3,4,滴而不能,过量?,过量的双缩脲试剂,B,会与试剂,A,反应,使溶液呈蓝色,而掩盖生成的紫色。,3,、,为什么斐林试剂要现配现用,不能放置太久?,时间太长,,Cu(OH),2,悬浊液就沉
5、淀在试管底部而无法参与反应。,深化,比较项目,斐林试剂,双缩脲试剂,不,同,点,使用方法,甲液和乙液混合均匀后方可使用,且现配现用,使用时先加,A,液再加,B,液,呈色反,应条件,需水浴加热,不需加热即可反应,反应原理,还原糖中的醛基被,Cu(OH),2,氧化,,Cu(OH),2,被还原为,Cu,2,O,具有两个以上肽键的化合物在碱性条件下与,Cu,2,反应生成络合物,颜色,砖红色,紫色,浓度,乙液,CuSO,4,溶液浓度为,0.05 g/mL,B,液,CuSO,4,溶液浓度为,0.01 g/mL,相同点,都含有,NaOH,溶液、,CuSO,4,溶液两种成分,且所用,NaOH,溶液浓度都是,0
6、.1 g/mL,实验,绿叶中色素的提取和分离,实验原理:,色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中,实验关键点,:,1.,选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。如菠菜叶等。,2.,画滤液细线时,应以细、直、颜色浓绿为标准,重复画线时必须等上次画线干燥衙再进行,重复,2-3,次。,3.,层析时不要让滤液细线触及层析液。,绿叶中的,色素,不止一种,他们都,能溶解在层析液,中。然而,,它们在层析液中的溶解度不同,;,溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快;反之则慢。,这样,几分钟之后绿叶中的色素就会随着层析液在滤纸上的扩散而分离开。且,溶解度最高的是胡萝卜素,,它随层析液在滤纸上扩散的最快;,叶黄素和叶绿
7、素,a,的溶解度次之,,,叶绿素,b,的溶解度最低,扩散的最慢。,实验总结,(,1,),在研磨绿叶时,加入少许,SiO,2,是为了研磨得充分,加入少许的,CaCO,3,是为了防止研磨过程中色素受到破坏,加入,10ml,无水乙醇是使色素溶解在其中,便于提取;,(,2,),因无水乙醇和层析液都是易挥发且层析液是有一定毒性的有机溶剂,所以研磨要快,收集的滤液要用棉塞塞住,层析时要加盖,尽量减少有机溶剂的挥发。,(,3,)用毛细吸管画滤液细线时,线条越细越直效果越好,重复划几次的目的是使滤液细线中含有较多的色素,(,4,)如果层析液浸没了滤纸条上的滤液细线,滤纸条上就不会出现色素带,其原因是滤液细线中的色素溶解在了烧杯中的层析液中,会导致色素带不清晰,影响整个实验的效果。,