选修DNA的粗提取与鉴定版面精美流程图详细PPT课件.ppt

DNA粗提取与粗提取与鉴鉴定定1.学学习习目目标标知知识识目目标标1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。2、理解DNA粗提取与鉴定的原理。能力目能力目标标掌握DNA粗提取及鉴定方法，能利用DNA的性质进行实验设计和操作。态态度度观观念目念目标标通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。2.1 1、鸡鸡鸡鸡血血血血细细细细胞做胞做胞做胞做实验实验实验实验材料，一是因材料，一是因材料，一是因材料，一是因为鸡为鸡为鸡为鸡血血血血细细细细胞核的胞核的胞核的胞核的DNADNA含量丰富，材料易得；二是含量丰富，材料易得；二是含量丰富，材料易得；二是含量丰富，材料易得；二是鸡鸡鸡鸡血血血血细细细细胞极易吸水胞极易吸水胞极易吸水胞极易吸水胀胀胀胀破。破。破。破。2 2、DNADNA在不同在不同在不同在不同浓浓浓浓度的度的度的度的NaClNaCl溶液中溶解度不同，溶液中溶解度不同，溶液中溶解度不同，溶液中溶解度不同，3 3、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶酶酶酶，其作用是分解，其作用是分解，其作用是分解，其作用是分解蛋白蛋白蛋白蛋白质质质质，使提取出的，使提取出的，使提取出的，使提取出的DNADNA纯纯纯纯度度度度较较较较高高高高4 4、预预预预冷的乙醇溶液具有以下冷的乙醇溶液具有以下冷的乙醇溶液具有以下冷的乙醇溶液具有以下优优优优点：一是抑制核酸水点：一是抑制核酸水点：一是抑制核酸水点：一是抑制核酸水解解解解酶酶酶酶活性，防止活性，防止活性，防止活性，防止DNADNA降解，二是降低分子运降解，二是降低分子运降解，二是降低分子运降解，二是降低分子运动动动动，易于，易于，易于，易于形成沉淀析出，三是低温有利于增加形成沉淀析出，三是低温有利于增加形成沉淀析出，三是低温有利于增加形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNADNA分子柔分子柔分子柔分子柔韧韧韧韧性，性，性，性，减少断裂；减少断裂；减少断裂；减少断裂；5 5、洗、洗、洗、洗涤剂涤剂涤剂涤剂等去等去等去等去污剂污剂污剂污剂可以溶解可以溶解可以溶解可以溶解细细细细胞的胞的胞的胞的细细细细胞壁，破坏胞壁，破坏胞壁，破坏胞壁，破坏细细细细胞膜，同胞膜，同胞膜，同胞膜，同时时时时也能使蛋白也能使蛋白也能使蛋白也能使蛋白质变质变质变质变性；性；性；性；6 6、在、在、在、在60756075度条件下加温度条件下加温度条件下加温度条件下加温处处处处理，蛋白理，蛋白理，蛋白理，蛋白质变质变质变质变性，而性，而性，而性，而DNADNA结结结结构不会受到破坏，提取构不会受到破坏，提取构不会受到破坏，提取构不会受到破坏，提取纯纯纯纯度度度度较较较较高的高的高的高的DNADNA7 7、甲基、甲基、甲基、甲基绿绿绿绿能使能使能使能使DNADNA染成染成染成染成绿绿绿绿色色色色3.根据以上原理可根据以上原理可设计设计提取和提取和纯纯化化DNA的方案：的方案：方案一：方案一：30mL含含DNA的的滤滤液液2mol/L NaCl同方向同方向搅搅拌，拌，DNA溶解溶解加入蒸加入蒸馏馏水水DNA析出析出过滤过滤得到得到过滤过滤物物放到放到2mol/LNaCl溶液中溶解溶液中溶解DNA-NaCl溶解溶解液液方案二：方案二：30mL滤滤液嫩肉粉（木瓜蛋白液嫩肉粉（木瓜蛋白酶酶）静置静置1015分分钟钟DNA滤滤液液方案三：方案三：30mL滤滤液液6075恒温保温恒温保温1015分分钟钟过滤获过滤获得得DNA滤滤液液4.两种材料的两种材料的DNA粗提取与粗提取与鉴鉴定定过过程程以以鸡鸡血血为为材料材料以花菜以花菜为为材料材料释释释释放放放放组织细组织细组织细组织细胞中的胞中的胞中的胞中的DNADNA，粗提取粗提取粗提取粗提取DNADNA，将粗提取的将粗提取的将粗提取的将粗提取的DNADNA进进进进一步一步一步一步纯纯纯纯化，化，化，化，鉴鉴鉴鉴定提取物是定提取物是定提取物是定提取物是DNADNA5.鸡鸡鸡鸡血血血血细细细细胞胞胞胞植物植物植物植物组织组织组织组织.0.1g/ml.0.1g/ml的的的的柠柠柠柠檬酸檬酸檬酸檬酸钠钠钠钠溶液溶液溶液溶液,按按按按1:21:2的比例与新的比例与新的比例与新的比例与新鲜鸡鲜鸡鲜鸡鲜鸡血混血混血混血混合合合合搅搅搅搅拌均匀。拌均匀。拌均匀。拌均匀。.将血液置于冰箱中将血液置于冰箱中将血液置于冰箱中将血液置于冰箱中2424小小小小时时时时,弃上部澄清液弃上部澄清液弃上部澄清液弃上部澄清液.取取取取烧烧烧烧杯中的血杯中的血杯中的血杯中的血细细细细胞液胞液胞液胞液约约约约510ml510ml加入到加入到加入到加入到100ml100ml烧烧烧烧杯中，杯中，杯中，杯中，向向向向烧烧烧烧杯中加入杯中加入杯中加入杯中加入20ml20ml蒸蒸蒸蒸馏馏馏馏水，用玻棒沿一个方向水，用玻棒沿一个方向水，用玻棒沿一个方向水，用玻棒沿一个方向快速快速快速快速搅搅搅搅拌拌拌拌5 5分分分分钟钟钟钟，加速血，加速血，加速血，加速血细细细细胞在低渗溶液中的破裂胞在低渗溶液中的破裂胞在低渗溶液中的破裂胞在低渗溶液中的破裂.将将将将2mol/L2mol/L的的的的氯氯氯氯化化化化钠钠钠钠溶液溶液溶液溶液50ml50ml缓缓缓缓缓缓缓缓倒入倒入倒入倒入烧烧烧烧杯中，用玻杯中，用玻杯中，用玻杯中，用玻棒沿一个方向棒沿一个方向棒沿一个方向棒沿一个方向搅搅搅搅拌，使拌，使拌，使拌，使DNADNA溶解于溶解于溶解于溶解于氯氯氯氯化化化化钠钠钠钠溶液中，溶液中，溶液中，溶液中，滤滤滤滤除除除除杂质杂质杂质杂质，获获获获得粘稠状的得粘稠状的得粘稠状的得粘稠状的鸡鸡鸡鸡血血血血细细细细胞胞胞胞DNADNA提取液提取液提取液提取液.将将将将鸡鸡鸡鸡血血血血细细细细胞胞胞胞DNADNA提取液置于提取液置于提取液置于提取液置于较较较较大的大的大的大的烧烧烧烧杯中，沿杯中，沿杯中，沿杯中，沿烧烧烧烧杯杯杯杯内壁内壁内壁内壁缓缓缓缓缓缓缓缓倒入蒸倒入蒸倒入蒸倒入蒸馏馏馏馏水，并不断水，并不断水，并不断水，并不断搅搅搅搅拌，直到粘稠状拌，直到粘稠状拌，直到粘稠状拌，直到粘稠状DNADNA不再析出不再析出不再析出不再析出为为为为止。用玻棒止。用玻棒止。用玻棒止。用玻棒搅搅搅搅拌，使析出的拌，使析出的拌，使析出的拌，使析出的DNADNA缠绕缠绕缠绕缠绕于玻棒末端。于玻棒末端。于玻棒末端。于玻棒末端。.将析出的将析出的将析出的将析出的DNADNA再溶解于再溶解于再溶解于再溶解于2mol/L2mol/L的的的的氯氯氯氯化化化化钠钠钠钠溶液中。溶液中。溶液中。溶液中。.在在在在DNADNA的的的的氯氯氯氯化化化化钠钠钠钠溶液中倒入溶液中倒入溶液中倒入溶液中倒入95%95%的酒精的酒精的酒精的酒精50 ml50 ml（冷（冷（冷（冷却却却却过过过过的酒精效果的酒精效果的酒精效果的酒精效果较较较较好），使好），使好），使好），使DNADNA再次析出，用玻棒再次析出，用玻棒再次析出，用玻棒再次析出，用玻棒搅搅搅搅拌，使拌，使拌，使拌，使DNADNA再次再次再次再次缠绕缠绕缠绕缠绕于玻棒末端。于玻棒末端。于玻棒末端。于玻棒末端。.DNA.DNA的的的的鉴鉴鉴鉴定：取两支定：取两支定：取两支定：取两支试试试试管，各加入管，各加入管，各加入管，各加入2ml0.0152ml0.015氯氯氯氯化化化化钠钠钠钠溶液，将溶液，将溶液，将溶液，将DNADNA溶解于其中一支溶解于其中一支溶解于其中一支溶解于其中一支试试试试管中，另一支做管中，另一支做管中，另一支做管中，另一支做为为为为对对对对照照照照组组组组。然后，在两支。然后，在两支。然后，在两支。然后，在两支试试试试管内加等量的二苯胺管内加等量的二苯胺管内加等量的二苯胺管内加等量的二苯胺试剂试剂试剂试剂，水浴加水浴加水浴加水浴加热热热热10min10min左右，冷却，左右，冷却，左右，冷却，左右，冷却，观观观观察察察察实验现实验现实验现实验现象。象。象。象。.取新取新取新取新鲜鲜鲜鲜植物植物植物植物组织组织组织组织（菜花）（菜花）（菜花）（菜花）放置于冰箱中冷却放置于冰箱中冷却放置于冰箱中冷却放置于冰箱中冷却1212天天天天.取取取取3030克植物克植物克植物克植物组织组织组织组织,切碎切碎切碎切碎,置于研体中置于研体中置于研体中置于研体中,倒入适量倒入适量倒入适量倒入适量洗洗洗洗洁洁洁洁精精精精,加入适量的加入适量的加入适量的加入适量的NaCl,NaCl,充分研磨充分研磨充分研磨充分研磨1010分分分分钟钟钟钟.过滤过滤过滤过滤研磨液，取上清夜研磨液，取上清夜研磨液，取上清夜研磨液，取上清夜置于冰箱中冷却几分置于冰箱中冷却几分置于冰箱中冷却几分置于冰箱中冷却几分钟钟钟钟.取取取取1 1倍体倍体倍体倍体积积积积的上清液，的上清液，的上清液，的上清液，加入加入加入加入2 2倍体倍体倍体倍体积积积积的的的的95%95%的的的的冷酒精当中，用玻棒冷酒精当中，用玻棒冷酒精当中，用玻棒冷酒精当中，用玻棒轻轻轻轻轻搅轻搅轻搅轻搅拌，沉淀拌，沉淀拌，沉淀拌，沉淀3535分分分分钟钟钟钟后可后可后可后可见见见见白色絮状白色絮状白色絮状白色絮状DNADNA缠缠缠缠绕绕绕绕于玻棒末端。于玻棒末端。于玻棒末端。于玻棒末端。.DNA.DNA的提的提的提的提纯纯纯纯同同同同鸡鸡鸡鸡血血血血细细细细胞胞胞胞为实验为实验为实验为实验材料的材料的材料的材料的实验实验实验实验操作操作操作操作步步步步骤骤骤骤6 6、7 7，具体数据有，具体数据有，具体数据有，具体数据有一定的差异。一定的差异。一定的差异。一定的差异。.鉴鉴鉴鉴定定定定6.鸡鸡鸡鸡血血血血细细细细胞液中胞液中胞液中胞液中DNADNA的粗提取的粗提取的粗提取的粗提取实验实验实验实验流程流程流程流程图图图图7.2mol/L2mol/L鸡鸡鸡鸡血血血血细细细细胞液中胞液中胞液中胞液中DNADNA的粗提取的粗提取的粗提取的粗提取实验实验实验实验流程流程流程流程图图图图8.5 5、过滤过滤过滤过滤取取取取纱纱纱纱布上的布上的布上的布上的滤滤滤滤物物物物纱纱纱纱布布布布过滤过滤过滤过滤6 6、再次溶解、再次溶解、再次溶解、再次溶解DNADNA2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液溶液溶液溶液取取取取滤滤滤滤物物物物鸡鸡鸡鸡血血血血细细细细胞液中胞液中胞液中胞液中DNADNA的粗提取的粗提取的粗提取的粗提取实验实验实验实验流程流程流程流程图图图图9.7 7、加冷酒精使、加冷酒精使、加冷酒精使、加冷酒精使DNADNA析出（析出（析出（析出（纯纯纯纯化）化）化）化）冷酒精冷酒精冷酒精冷酒精鸡鸡鸡鸡血血血血细细细细胞液中胞液中胞液中胞液中DNADNA的粗提取的粗提取的粗提取的粗提取实验实验实验实验流程流程流程流程图图图图10.DNA的鉴定11.DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定实验实验原理原理DNA在不同在不同浓浓度度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同DNA与其他与其他细细胞成分在酒精中溶解度不同胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白和蛋白质对质对酶酶、高温和洗、高温和洗涤剂涤剂耐受性不同耐受性不同DNA与二苯胺呈与二苯胺呈现蓝现蓝色反色反应应DNA粗提取粗提取选择选择适宜材料适宜材料破碎破碎细细胞胞DNA的溶解和析出的溶解和析出DNA的的纯纯化化鉴鉴定定DNA与二苯胺混合，沸水浴，呈与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝现蓝色反色反应应总结总结：12.1.下列关于下列关于DNA粗提取与粗提取与鉴鉴定的定的说说法正确的是法正确的是 A氯氯化化钠钠的的浓浓度越低，度越低，对对DNA的溶解度越大的溶解度越大 B人血也可代替人血也可代替鸡鸡血血进进行行实验实验 C柠柠檬酸檬酸钠钠的主要作用是加速血的主要作用是加速血细细胞破裂胞破裂 DDNA不能溶于酒精不能溶于酒精2.在破碎在破碎鸡鸡血血细细胞胞时时，要先加入，要先加入20ml的蒸的蒸馏馏水，其作用是水，其作用是A.DNA溶解于水溶解于水 B 血血细细胞破裂，胞破裂，DNA释释放放C稀稀释释血液，防止凝固血液，防止凝固 D 有利于有利于搅搅拌拌3.若若选择选择的的实验实验材料材料为为植物植物细细胞，破碎胞，破碎细细胞胞时时要加入一定量的洗要加入一定量的洗涤剂涤剂和食和食盐盐，加入食，加入食盐盐的目的是的目的是A.利于利于DNA的溶解的溶解 B.分离分离DNA和蛋白和蛋白质质C.溶解溶解细细胞膜胞膜 D.溶解蛋白溶解蛋白质质4.在在DNA粗提取粗提取实验实验中，向在溶解中，向在溶解DNA的的NaCl溶液中，不断加入溶液中，不断加入蒸蒸馏馏水的目的是水的目的是A有利于溶解有利于溶解DNA B有利于溶解有利于溶解杂质杂质C减少减少DNA的溶解度的溶解度 D减少减少杂质杂质的溶解度的溶解度13.14.谢谢观看！