肿瘤超早期筛查在体检中的应用.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,P,o,w,e,r,B,a,r,中国专业,PPT,设计交流论坛,preMiD,肿瘤（超）早期预警筛查,体检中的应用,癌症分子解析,preMiD技术在肿瘤早期筛查中的应用,案例分享,总结,主要内容,恶性肿瘤现状,恶性肿瘤已成为人类的,“,头号杀手,”,。,全球每年新发肿瘤1400万人，死亡约820万人。,预计2025年，因人口增加和老龄化等因素，每年新增超2000万病例。,“,2012年中国肿瘤登记年报,”,数据表明，,中国每年新发肿瘤约310万人，死亡270万人,（右上图）,。,近60年来,癌症致死率没有明显下降,（右下图）,。,世卫组织（WHO）,：,早发现 早诊断 早治疗,“,三早,”,是关键，,“,早发现,”,是根本!,目前还无法攻克癌症（尤其是中晚期）,；,癌症可防、可治：,癌前阶段：可实现近,100%预防,早期癌症：可以实现80%治愈率,晚期癌症：仅30%人活过5年。,按照平均寿命74岁计算，人一生中患癌几率是22%。,从年龄看，45 岁以后发病率上升明显，,应在40岁开始重视针对肿瘤的专项检查,。,2014世界癌症报告,“,抗击癌症，重在预防,”,癌症的分子解析,ICGC：癌症基因组学研究,国际癌症基因组联盟(International Cancer Genome Consortium，ICGC)2014年2月4日公布超过1万个癌症基因组的数据。,2013年12月5日ICGC宣布：在原来白血病、膀胱癌、胃癌的基础上，中国又发起针对肠癌、食道癌、肝癌的,驱动基因,检测项目。,“,眼下癌症诊治急需新的途径。如果能更好地从基因组来了解癌症，那么将更有利于,癌症的预防和控制,。,Tom Hudson,安大略癌症研究所（OICR）所长、ICGC创始人之一,www.icgc.org,致癌突变（oncogenic mutations）到肿瘤形成需要10-20年；,期间，涉及多基因的异常发生具有早期性和特异性：,（早期性：,分子异常是癌症发生的早期事件；,特异性：分子异常,是癌症发生的特有标记）,癌变的分子事件,Alfred G.Knudson,Nature Rev.Cancer,1,157-162(2001),Carlo M.Croce,N.Engl.J.Med.,358,502-511(2008),原癌基因（,Proto-oncogene,）,原癌基因是是细胞内与细胞增殖相关的高度保守的基因。,原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时（此时转化为癌基因），使细胞过度增殖。,抑癌基因（,Tumor Suppressor,）,抑癌基因一般调控,DNA,的修复和细胞凋亡。,在被激活情况下它们具有抑制细胞增殖作用。,抑癌基因突变能导致活性降低或消失，从而减弱甚至消除抑癌作用。,Sanger研究所：Cosmic数据库,Emerging landscape of oncogenic signatures across human cancers,Nature Genetics 45,1127,1133(2013),cancer.sanger.ac.uk/cancergenome/projects/cosmic/,肠癌中基因异常发生率,Gao H.et al,Cancer Res.,54,4342-4346(1994),Morgan C.et al,Br.J.Cancer,89,1314-1319(2003),preMiD技术,在肿瘤早期筛查中的应用,传统检测,突变检测,癌症的“冰山学说”,早期癌症几乎没有症状，极其容易被传统检测所忽视，一旦检出，则大部分为中晚期。,preMiD超早期防癌检测，提前约,3,年预防发现潜伏体内的癌症或癌前病变。,preMiD,超早期防癌检测，提前临床症状,3-5,年预警！,突变,preMiD,技术检测的是来自于肿瘤相关的原癌基因和抑癌基因的异常突变。,基因突变类型如下：,血液循环肿瘤,DNA,（ctDNA）来源,Nat Rev Cancer.2011 Jun;11(6):426-37,c,t,DNA,由癌变细胞死亡、凋亡或主动分泌进入循环系统,cfDNA,的长度一般为,100-500,碱基，携带有癌症细胞内部所含异常信息，如突变、copy数变化、甲基化、融合基因及染色体异常等。,血液中含有驱动突变或致癌突变分子，意味身体内有癌变细胞。,“,ctDNA是最有希望发现早期癌症,”,美国约翰霍普金斯大学Luis Diaz博士,Free-floating DNA from tumor could provide early warning！,USA today,分子癌变阶段,（,8-10,年）,细胞癌变阶段,（,3-5,年）,细胞簇形成,组织形成,早癌（,1-3,年）,中晚期癌（？）,1.,不死,2.,无限增殖,3.,表型正常,1.,逃避免疫监视,2.,形成新血管,3.,异性增生,常规手段可以检测,preMiD,可以,血浆突变检测技术,-preMiD,挑战,血浆游离,DNA,含量极低,突变,DNA,占比低于,0.1%,血浆成分复杂,某些屏障存在,应对,preMiD,检测基于,PCR,，扩增,DNA,融合,Blocker,、偏向扩增及熔点分析，极大提高灵敏度,纳米技术提高核酸萃取效率,新技术平台的融入,preMiD,=Blocker+ASA+MCA,突变偏向扩增系统（ASA）,PCR,引物的,3,端位必须和突变扩增子匹配，而野生不匹配,采用特异探针，实时,PCR,反应,熔解曲线分析（Melting Curve Analysis）,荧光,vs,温度作图得到,DNA,熔解曲线,DNA,溶解曲线是,DNA,序列的,“,指纹,”,核酸blocker阻滞野,生扩增,设计野生匹配blocker（含PNA修饰）,阻滞对野生片段扩增,三种已有技术的有机结合成preMiD，灵敏度达到,0.01%,，特异性近100%。,美国斯坦福癌症研究院近,30,年调查研究发现：,癌前阶段，癌症是,可逆性,“,工程,”,。,消除突变，抑制癌变,正常,DNA,DNA,突变,（肿瘤驱动基因）,DNA,修复,抑癌基因诱导凋亡,免疫监视,失败,癌,干预,（突变逆转）,早发现与早预防,突变筛查,免疫力,远离,致癌物,干预,突变定量分析1.,对于有基因突变的受检者，同时加做突变定量值，便于后期干预有效性的对比；,2.,随着样本量的增加，跟踪后续发展变化，将给出突变风险提示。,突变值,检测项目,相对信号差异,突变比率,干预,1,周血浆,7.84,21.6%,干预,1,月血浆,1.30,3.4%,干预,3,月血浆,0.03,0%,结果判读,胸腺肽干预后血浆中突变明显下降。,突变比率,相对信号差异值,0%,0.00,5%,1.42,10%,3.90,12%,4.68,15%,5.65,20%,7.39,25%,9.05,30%,10.54,QRAM-qPCR相对定量检测肿瘤特异突变位点在血浆中含量在干预前后的变化，判断效果。,干预有效性判断,主要用途：,1.直观反应干预或治疗方案的有效性，避免无效治疗。,2.,评估手术后患者基本状态，如体内有无残留或转移。,3.,判断有无复发。,preMiD,专业性,preMiD,德国标准生产质控体系,国际公认检测内容,COSMIC数据库，包含突变基因及位点信息，属于国际最权威机构最新研究成果。,国家批准专有检测试剂,美国Roche检测仪器,注册号:(进)字 2009 第3402689号,preMiD,血浆突变技术验证：,NSCLC组织和血浆中EGFR突变一致性研究,肿瘤组织,-,测序法,Total,突变,野生,血浆,-,preMiD,突变,345,18,363,野生,24,825,849,Total,369,843,1212,试验单位：,北京协和医院、浙江大学附属第一医院、江苏省肿瘤医院、青岛大学附属医院,Sanger,测序,1212,例非小细胞肺癌患者肿瘤组织EGFR突变；,preMiD,法检测对应,1212,例血浆,EGFR,突变。,总体结果：,阳性符合率为,80.49%,，阴性符合率为,94.66%,，总符合率为,90.35%,（唯一完成临床试验研究，血浆,-,组织突变一致性最高的结果）,（已完成CFDA批准临床实验，2011年12月28号-2013年12月28号）,中国唯一入选国际肿瘤学术大会,ASCO,会议的主讲报告,中国医师协会,preMiD,项目专家论证会ctDNA,在国际上的应用,NDRG4,BMP3,NDRG4,BMP3,KRAS,总灵敏度：,92%sensitivity,早期肠癌灵敏度：,94%,特异性：,87%,ColonGuard,（,EXACT,）,ColonVantage(QUEST),ColoVantage,检测血浆中,SEPTIN9,的甲基化状态，达到检测和预警结直肠癌的目的。,ColoVantage,是一种无创的检测方法,灵敏度达到,70%,特异性达到,89%,适用于各个分期的结直肠癌,ctDNA,在甲状腺癌检测中的应用,基因检测对甲状腺肿瘤诊断的准确率在,80%,以上,突变检测能够应对病理检测不能确定的情况,Nikiforov YE et al,J Clin Endocrinol Metab.2011 Nov;96(11):3390-7,案例分享,preMiD检测：,FLT3,突变,案例一：,FLT3基因突变，2年半后诊断大肠癌中晚期,个人不相信，不愿面对，,没有采取必要干预措施,案例二：,KRAS,突变,检测者：男性,，,35,岁，,重庆人,家族史：其父患肺癌,进行,preMiD,检测：,KRAS,基因突变,KRAS,突变,报告解读：,结合健康问卷及专家咨询,其父患肺癌,作息紊乱,干咳、胸闷,近期没有体检资料,结合该情况给出建议：,进行胸部增强,CT,检查，,判断突变在哪个阶段,（临床前期或临床阶段）,KRAS,突变,2014,年,5,月,8,日,右肺下叶斜裂旁小结节影,肝左叶多发小囊肿,KRAS,突变,干预方案,匹多莫德口服液,服用方法：,1,支（,10ml,）,/,次，,2,次,/,日（早晚空腹服用）,3,个月为一周期,KRAS,突变,-,跟踪随访,2014,年,9,月,9,日,胸部,CT,增强未发现肿瘤,干预后,4,个月进行突变复查及突变定量分析：,复查结果，基因仍有突变，并对再次突变情况进行与第一次的定量值分析，突变较之前下降。,KRAS,突变,-,复查及定量,案例三：,THR-,基因突变,检测者：男性,，,41,岁，,南京人,进行,preMiD,检测：,THR-,基因突变,THR-,基因突变,报告解读：,结合健康专家咨询,作息紊乱,20,年吸烟史，每日,1,包,近期没有体检资料,THR-,基因突变,右颈部、颌下多发小淋巴结，部分淋巴结,FDG,代谢增高；,甲状腺瘤可能,THR-,基因突变,-,干预方案,胸腺肽,a1,方法：,1,支（,1.6mg,）,/,次，,1,次,/,周，皮下注射,3,个月为一周期,干预后,3,个月进行突变复查及突变定量分析：,复查结果：突变消失。,THR-,基因突变,-,干预方案,病理：肺腺癌,案例四：,EGFR,突变确诊,6mm,早癌,检测者男性，,62,岁，无锡人士，某医院院长，体检发现肺内有,6mm,孤立影，不能确定其性质，经,preMiD,检测发现,EGFR,突变。,该检测者在上海肺科医院行胸腔镜手术，取出病理为肺腺癌。,案例五：,FHIT,突变确诊胃癌晚期,检测者男性，,62,岁，机关干部，既往慢性胃病史，平时喜食蒜泥等刺激食物。经,preMiD,检测：,FHIT,突变，后追加蛋白标志物,FMD1,值异常升高。,建议进一步胃镜检查，结果为低分化腺癌晚期，对化疗均不敏感。,病理：低分化腺癌,案例六：,宫颈癌复发监控案例,检测者女性，,29,岁，,2012,年,12,月确诊宫颈癌，术后、放、化疗后。,2013,年,5,月经,perMiD,检测发现,FHIT-exon8,位点和,HLA-A-c.835CT,位点有突变，确诊为术后复发。,案例七：,鉴别：前列腺癌or前列腺增生（,BPH,）？,PSA700,前列腺癌？！,PSA=25，BPH？,总 结,preMiD,检测原理,突变,preMiD,技术检测的是来 自于肿瘤相关的原癌基因和抑癌基因的异常突变。,c,t,DNA,由癌变细胞死亡、凋亡或主动分泌进入循环系统，携带有癌症细胞内部所含异常信息，如突变、copy数变化、甲基化、融合基因及染色体异常等。,血液中含有驱动突变或致癌突变分子，意味身体内有癌变细胞。,男性,18,肿瘤：,肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、食道癌、肾癌、甲状腺癌、结直肠癌、,膀胱癌、黑色素瘤、胆管癌、淋巴瘤、脑胶质瘤、胆囊癌、头颈癌、,前列腺癌、急性髓性白血病、骨髓增生异常综合症,女性,18,肿瘤：,肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、食道癌、肾癌、甲状腺癌、结直肠癌、,膀胱癌、黑色素瘤、胆管癌、淋巴瘤、脑胶质瘤、乳腺癌、卵巢癌、,宫颈癌、子宫内膜癌、急性髓性白血病,preMiD,检测项目,遗传背景,特种感染：,病毒性肝炎、,HIV,、脓毒症等,慢性炎症,环境污染,不良习惯,免疫低下,适宜人群,肿瘤个性：,抑郁、躁狂等,肿瘤体质：,微生态失衡、免疫失衡、营养代谢失衡,1.,候诊,2.,采5ml血,3.,检测,（7-10天）,4.,出具报告,服务流程,5、专家解读,We Keep Life From Cancer,谢谢！,