药物分析黄酮类化合物整培训.ppt

Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,2009062006,郑梅霞,*,Click to edit Master title style,黄酮类化合物,2009062006,郑梅霞,Flavonoids,2009062006,郑梅霞,黄酮类,理化性质与颜色反应,结构与分类,生物活性,检识与结构测定,概 述,提取、分离,黄酮类,2009062006,郑梅霞,黄酮类化合物广泛分布于,植物界,中，而且生理活性多种多样，引起了国内外的广泛重视，研究进展很快。,黄酮类化合物大多具有,颜色,，在植物体内大部分与糖结合成苷，一部分以,游离,形式存在。,第一节 概述,2009062006,郑梅霞,表 黄酮类化合物存在的植物,编号,植物种类,芦丁检出部位,拉丁名,中文名,1,Myricanana cheval.,矮杨梅,叶,2,Fagopyrum esculenlom.,荞麦,毛状根、果实,3,Hovenia acerba lindl.,枳根,叶,4,Euphorbia pukherrima.,一品红,茎、叶,5,Saussurea involucrata.,新疆雪莲,花,6,Carthamus tinctorius Flowers.,红花,花,7,Bupleurum chinense DC.,北柴胡,全草,2009062006,郑梅霞,二、结构分类,一、基本结构,第二节结构与分类,2009062006,郑梅霞,一、基本结构,定义：,泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物。,6C3C6C,2009062006,郑梅霞,二、黄酮类化合物结构分类,黄酮及黄酮醇类,二氢黄酮与,二氢黄酮醇,查耳酮类,异黄酮和,二氢异黄酮类,橙酮类,双黄酮类,2009062006,郑梅霞,第三节、理化性质与颜色反应,一、性状,1,二、旋光性,2,三、荧光,3,四、溶解性,4,五、酸碱性,5,六、显色反应,6,2009062006,郑梅霞,一性状,多为,晶性固体,，少数为无定形粉末。,颜色,：,与分子中是否存在交叉共轭体系及助色,团的类型、数目及取代位置有关。,黄酮、黄酮醇及其苷类,灰黄黄,色,查耳酮,黄橙黄,色,二氢黄酮及醇、异黄酮,不显色或,微黄,色,2009062006,郑梅霞,二、旋光性,（1）游离的各种苷元母核中，除,二氢黄酮（醇）、黄烷（醇）,有旋光性外，其余无光学活性。,（2、3位无双键时，具有旋光性）,（2）,苷类,具有糖分子，均具有旋光性，一般为左旋。,2009062006,郑梅霞,三、荧光,荧光,C,3,-OH,在紫外光下有强烈,（,亮黄色,或,亮绿色,）,。,C,3,-OH成苷后荧光减弱,2009062006,郑梅霞,四、溶解性,黄酮苷元,难溶,或不溶于H,2,O,易溶,MeOH、EtOH等溶剂,易溶,稀碱液,黄酮苷,易溶于水、MeOH、EtOH等溶剂,（苷元引入,OH多，则水中溶解度大）,2009062006,郑梅霞,五、酸碱性,分子中多,Ar-OH,显酸性,（可溶于碱性水溶液、吡啶等溶剂中）,由于Ar-OH数目、位置不同，酸性强弱也不同,酸性,碱性,-吡喃酮环上1-位氧原子，因,有未共用电子对,显,微弱,的碱性,可与强无机酸（H,2,SO,4,、HCl）等生成盐。,2009062006,郑梅霞,六、显色反应,1.,盐酸,-,镁粉（或锌粉）反应,2.,四氢硼钠（钾）反应,3.,铝盐,4.,铅盐5.,锆盐,2009062006,郑梅霞,六、显色反应,6.,镁盐,7.,氯化锶（,SrCl2,）,8.,三氯化铁反应,9.,硼酸显色反应,10.,碱性试剂显色反应,2009062006,郑梅霞,第四节、生物活性,Vp样作用：芦丁、橙皮苷等有Vp样作用，能降低血管脆性及异常通透性，可用作防治高血压及动脉硬化的辅助治疗剂。,一、对心血管系统的作用,二、抗肝脏毒作用,（,+,）,-,儿茶素,(catergen),也可抗肝脏毒作用，治疗脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起的中毒性肝损伤。,三、抗炎,芦丁及其衍生物羟乙基芦丁、二氢槲皮素等具抗炎作用。,四、抗菌及抗病毒作用,如木樨草素、黄芩苷、黄芩素,五、解痉作用,异甘草素、大豆素：解除平滑肌痉挛；,2009062006,郑梅霞,六、雌性激素样作用,大豆素(daidzein)等异黄酮具有雌性激素样作用，可能与它们与己烯雌酚结构类似。,七、清除人体自由基作用,黄酮类化合物多具有酚羟基，易氧化成醌类而提供氢离子，故有显著的抗氧特点。,另外,还有降血脂、血糖，抗动脉粥样硬化及抗癌抗突变等作用。,第四节、生物活性,2009062006,郑梅霞,第五节、检识与结构测定,一、紫外光谱（,UV,）,二、核磁共振,1,H-NMR,三、核磁共振,13C-NMR,四、质谱（,MS,）,2009062006,郑梅霞,（一）紫外光谱（UV）,黄酮类化合物结构中的交叉共轭体系,苯甲酰基系统 桂皮酰基系统,(benzoyl)(cinnamoyl),Band II Band I,220280 nm 300400 nm,2009062006,郑梅霞,带,II(240-285nm),（苯甲酰系统）,带,I(300-400nm),桂皮酰系统,类 型,说 明,250-285,304-350,黄酮类,-OH,越多，带,I,带,II,越红移,B,环,3,4,有,-OH,基，带,II,为双峰（主峰伴肩峰）,328-357,黄酮醇类,(3-OR),352-385,黄酮醇类,(3-OH),245-270,270-295,300-400,异黄酮类,二氢黄酮（醇）,B,环上有,-OH,OCH3,对带,I,影响不大,220-270,340-390,或,340-390(Ia),300-320(Ib),查耳酮类,查耳酮,2-OH,使带,I,红移的影响最大,370-430(3-4,个小峰,),橙酮类,2009062006,郑梅霞,1.A环质子,2.B环质子,3.C环质子,4.糖端基碳上的质子,5.乙酰氧基上的质子,6.甲氧基上的质子,（二）,1,H-NMR,2009062006,郑梅霞,（二）,1,H-NMR,黄酮、黄酮醇、异黄酮,二氢黄酮、二氢黄酮醇,1.A,环质子,7-羟基黄酮类,6.707.00 d,6.306.40 d,7.908.20 d,7.707.90 d,6.707.10 dd,6.406.50 dd,2009062006,郑梅霞,（三）,13,C-NMR,1.骨架类型的判断,2.取代图式的确定方法,3.氧糖苷中的连接位置,4.双糖苷及低聚糖苷中苷键及糖的连接顺序,13,C-NMR在黄酮类化合物结构分析中的应用,2009062006,郑梅霞,（三）,13,C-NMR,1.骨架类型的判断,根据,中央三个碳,信号的,位置,、,裂分,等，推断其骨架类型。,2009062006,郑梅霞,（四）MS,大多黄酮苷元在电子轰击质谱（EI-MS）中，可获得分子离子峰（基峰）。,（除,极性强、难气化及对热不稳定的化合物,可制备成甲基化或三甲基硅烷化衍生物）,现在可应用,FD-MS,（场解析电离）、,FAB-MS,（快速原子轰击电离）、,ESI-MS,（电喷雾电离）等软电离质谱技术，可避免制备衍生物。,质谱在黄酮类结构测定中的应用,2009062006,郑梅霞,（四）MS,途径-II,黄酮类化合物两种基本裂解途径,途径-I（RDA裂解）,2009062006,郑梅霞,（四）MS,黄酮类,途径 I 或 II,碎片进一步减-CO,离子,黄酮醇,途径 II（主要）,减-CO,离子,两种基本裂解途径是,相互竞争,，,相互制约,的。,途径-I 与途径-II得到的碎片离子的丰度,互成反比,。,即若一种途径碎片离子丰度强，则另一种途径碎片离子丰度就弱。,2009062006,郑梅霞,第六节、提取、分离,方法,溶剂萃取,方法,碱提酸沉,方法,离子交换,A,极性,C,解离性,B,酸性,D,方法,炭粉吸附法,(,主要适用于,苷类成分,的精制,),一、提取,THANK YOU,SUCCESS,2025/1/15 周三,29,可编辑,2009062006,郑梅霞,一、提取,1.溶剂萃取法,2009062006,郑梅霞,一、提取,1.溶剂萃取法,2009062006,郑梅霞,一、提取,2.碱提取酸沉淀法,例如：芦丁的提取,2009062006,郑梅霞,一、提取,3.离子交换树脂法,注意：应用此法主要目的是除杂质,。,2009062006,郑梅霞,一、提取,4.炭粉吸附法2009062006,郑梅霞,二、分离,方法,吸附、分配色谱,方法,pH,梯度萃取,方法,金属盐络合,A,极性,C,特殊结构,B,酸性,2009062006,郑梅霞,二、分离,1.柱色谱法,（1）硅胶柱色谱,出柱先后顺序,：,若母核结构相同，而-OH取代数目不同，则-OH多的,后出柱,易形成分子内氢键的-OH，其极性变小,先出柱,如：邻二-OH 间二-OH （Rf值）,一般出柱顺序：,苷元 单糖苷 双糖苷 多糖苷,2009062006,郑梅霞,二、分离,1.柱色谱法,（2）氧化铝柱色谱,通常情况下，要求在分子的结构中,无酸性基团，或Ar-OH被甲基化。,（3）纤维粉柱色谱,其分离原理同纸层色谱。,2009062006,郑梅霞,二、分离,1.柱色谱法,（4）聚酰胺柱色谱,聚酰胺（Polyamide）是由酰胺聚合而成的一类高分子物质。商品名,绵纶、尼龙。,原理：,氢键吸附学说,聚酰胺分子内有很多酰胺键，可与酚类、酸类、醌类、硝基化合物等形成氢键，因而对这些物质产生了吸附作用。,2009062006,郑梅霞,二、分离,1.柱色谱法,（4）聚酰胺柱色谱,聚酰胺吸附物质的原理如下图：,2009062006,郑梅霞,二、分离,1.柱色谱法,（5）葡聚糖凝胶柱色谱,葡聚糖凝胶,（Sephadex gel）,用于黄酮类化合物的分离，主要有两种型号：,Sephadex-G型,Sephadex LH20型,（羟丙基葡聚糖凝胶）,2009062006,郑梅霞,二、分离,1.柱色谱法,（5）葡聚糖凝胶柱色谱,作用机理：,分离,游离黄酮,时,吸附,作用,（取决于游离Ar-OH的数目，,Ar-OH少则先出柱）,分离,黄酮苷,是,分子筛,起主导作用,（分子量大的先出柱）,2009062006,郑梅霞,二、分离,2.pH梯度萃取法,适用于,酸性强弱,不同的黄酮,苷元,的分离。,2009062006,郑梅霞,二、分离,3.铅盐沉淀法,根据分子中某些特定官能团进行分离。,2009062006,郑梅霞,第七节、实例,芦丁！,作用与用途,1,、抗炎作用：大鼠腹腔注射，对植入羊毛球的发炎过程有明显的抑制作用本品的硫酸酯钠,(Sod.rutin sulfate),对大鼠热浮肿 有很强的抗炎作用。,2,、维生素,P,样作用，具有维持血管抵抗力、降低其通透性、减少脆性等作用，对脂肪浸润的 肝有祛脂作用，与谷胱甘酞合用祛脂效果更明显。,3,、抗病毒作用：,200g/ml,浓度时，对水疱性口炎病毒有最大的抑制作用。,4,、抑制醛糖还原酶作用：,10-5M,浓度时抑制率为,95%,。这作用 有利于糖尿病型白内障的治疗。,5,、毒性：小鼠静脉注射,LD50 950mg/kg,。,6,、临床：用于防治脑溢血、高血压、视网膜出血、紫瘢和急性出血性肾炎。治疗慢性气管炎，有效率,84.8%,和,98%,。本品衍生物三羟乙芸香甙,(troxerutin),，即维路通，临床用于治疗烧伤、关节炎及各种血管疾病，国外已有商品出售。国内亦已研究成功，治脑血管病有效率,87.8%,，治视网膜水肿和出血有效率,88%,。,2009062006,郑梅霞,第七节、实例,芦丁！,2009062006,郑梅霞,第七节、实例,【药品名称】银杏叶片，依康宁,【成,分】银杏叶提取物,【性,状】本品为薄膜衣片，除去包衣后显浅棕黄色至棕褐色，味微苦。,【功能主治】,活血化瘀通络，用于瘀血阻络引起的胸痹心痛、中风、半身不遂，舌强语謇；冠心病稳定型心绞痛、脑梗死见上述证候者。,【用法用量】,口服，一次2片，一日3次：或遵医嘱。,【规,格】每片含总黄酮醇苷9.6mg，萜类内酯2.4mg。,【贮,藏】,密封。,【包,装】,铝塑包装，每板12片，每盒2板；每板12片，每盒3板。,【有 效 期】,2年。,【适 应 症】活血化瘀通络。用于瘀血阻络引起的胸痹心痛、中风、半身不遂、舌强语謇；冠心病稳定型心绞痛、脑梗死见上述证候者。,银杏叶片！,2009062006,郑梅霞,第七节、实例,【临床应用】,1.小儿呼吸道感染,2.急性菌痢,3.病毒性肝炎,4.疖疔、外痈、蜂窝组织炎、深部脓肿,5.急性胰腺炎,黄芩！,2009062006,郑梅霞,第七节、实例,物理性状：二水合物为黄色针状结晶（稀乙醇），在95-97,C成为无水物，熔点314,C分解）。1g溶于290ml无水乙醇，23ml沸乙醇，溶于冰醋酸，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。,植物来源：,壳斗科,植物伊比利亚栎Quercus iberica 皮和叶，,小檗科,植物红八角莲Dysosma veitchii(Hemsl.et Wils.)Fu，,金丝桃科,植物,红旱莲,（湖南,连翘,）Hypericum ascyron L.全草，,夹竹桃科,植物红麻 Apocynum lancifolium Rus.叶。,作用与用途：本品具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。用于治疗慢性支气管炎。对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用。小鼠口服LD50为160mg/kg。,槲皮素！,2009062006,郑梅霞,第七节、实例,槲皮素！,2009062006,郑梅霞,黄酮类化合物与DNA传感器,基于黄酮类化合物与,DNA,相互作的,DNA,电化学传感器的研究,胡冷芝,用电化学方法研究了槲皮素与鲑鱼精,DNA,的相互作用,确定了配合物与,:DNA,的作用方式为静电作用。以,槲皮素为杂交指示剂,利用共价键合法制备了,DNA,修饰,玻碳电极,并制成了,DNA,电化学传感器,能有效识别与探针,ssDNA,互补的,ssDNA,片断,具有良好的选择性和灵敏性,检测靶,ssDNA,的线性范围为,4.90,10-8,2.43,10-7 mol,L-1,检测限为,1.32,10-8 mol,L-1,。,用带有羧基的,多壁碳纳米管,(MWCNTs-COOH),修饰玻碳电极,将,5,端氨基修饰的核苷酸通过羧基共价固定在碳纳米管上,电活性的,(2R-2H)Mn,作为杂交指示剂,制备了一种新颖、灵敏的,DNA,电化学传感器。该传感器检测靶,ssDNA,的线性范围为,1.60,10-9,4.80,10-8mol,L-1,检测限为,1.0,10-9mol,L-1,。,2009062006,郑梅霞,黄酮类化合物与DNA传感器,通过实验结果比较可以得到槲皮素合铺配合物与DNA相互 作用的能力大于槲皮素本身与DNA相互作用的能力，即与,稀土元素配合,后，槲皮素的药效会更强。,黄酮类化合物及其配合物与,DNA,的相互作用研究,卓琳,2009062006,郑梅霞,黄酮类化合物与DNA传感器,槲皮素对,抗坏血酸,具有很好的催化氧化效果。在pH4.0的缓冲溶液中加入一定浓度的抗坏血酸，会观察到明显的催化现象，氧化峰逐渐增大，还原峰逐渐减小。在3.1,10,-5,mol/L2.0,10,-3,mol/L的抗坏血酸浓度范围内，浓度与电流呈良好的线性关系，其检测下限为1.5,10,-5,mol/L。,槲皮素修饰电极的电化学研究,高丽萍,2009062006,郑梅霞,黄酮类化合物与DNA传感器,筛选出异鼠李素作为高灵敏度、高特异性的杂交指示剂,用于检测急性早幼粒细胞白血病PML-RAR融合基因。,当互补链DNA浓度在2.0,10,-8,1.2,10,-7,mol/L范围内,峰电流与其浓度呈良好的线性关系,线性回归方程为Ip(A)=0.2378 C(M)+2.269,相关系数r=0.9973,检出限为1.5,10,-9,mol/L(S/N=3)。本文首次研制的基于,异鼠李素为新型杂交指示剂,的电化学生物传感器用于检测急性早幼粒细胞白血病PML-RAR融合基因,获得了令人满意的结果。,基于异鼠李素为杂交指示剂的电化学,DNA,生物传感器的研究,林丽清,2009062006,郑梅霞,黄酮类化合物与DNA传感器,邻氨基酚为单体，无电化学活性的柚皮苷为模板分子，采用循环伏安法(扫速为100 mV/s)在碳电极上往复扫描30次，,电聚合,出具有识别柚皮苷分子功能的敏感膜。此传感器对柚皮昔有较好的选择性，响应快(30 s)，在6.0,10,-5,1.4,10,-4,mol/L范围内呈线性关系，且重现性好(RSD=1.8,n=5)；传感器对柚皮苷的检出限为1.6,10,-5,mol/L。,柚皮苷分子印迹传感器的制备与应用,马秀玲 陈日耀 郑曦,陈晓 陈震,2009062006,郑梅霞,黄酮类化合物与DNA传感器,1、用金电极或是电聚合纳米金，或是其他的纳米材料修饰电极，以增强灵敏度。,2、黄酮类化合物作为杂交指示剂，与稀土元素结合。,3、表征方法可以用阻抗法、计时库伦法等。,Thank You!,THANK YOU,SUCCESS,2025/1/15 周三,57,可编辑,