液基薄层细胞制片技术培训.ppt

液基细胞学技术液基细胞学技术湖南省丽拓生物科技有限公司湖南省丽拓生物科技有限公司液基细胞学制片技术的发展液基细胞学制片技术的发展液基细胞学液基细胞学制片技术的应用优势制片技术的应用优势TBS报告系统的解读报告系统的解读影响制片效果的因素及操作要点影响制片效果的因素及操作要点珠海珠海.丽拓丽拓液基细胞学制片技术的发展细胞病理学：细胞病理学：根据细胞内异常状况，研究疾病发生的原因，发病原理,以及疾病发生过程中，细胞的生理功能发生改变的规律，从而提出诊断和防治疾病的依据。主要涵盖脱落细胞学和细针吸取细胞学。脱落细胞学：脱落细胞学：采集人体各部位，特别是管腔器官表面的脱落细胞，经染色后用显微镜观察这些细胞的形态，并作出诊断的一门临床检验学科，又名诊断细胞学或临床细胞学。主要包括宫颈脱落细胞学、痰液脱落细胞学等。液基细胞学制片技术的发展宫颈脱落细胞学的检查意义：宫颈癌是妇女最常见的恶性肿瘤。据统计，宫颈癌的发病率与死亡率居女性恶性肿瘤的第二位。在我国，每年约有15万新发病例，约占世界的14,每年约有8万患者死于宫颈癌。在发达国家，宫颈癌的发病率已明显下降，这在很大程度上归因于对癌前病变的早期诊断和治疗。在发展中国家，由于宫颈筛查工作尚不完善，因此宫颈癌发生率是发达国家的6倍。特别应引起警惕的是，由于环境污染和不良的生活卫生习惯，使原本在妇女50岁左右才比较多发的宫颈癌，如今已盯上了年轻女性。据北京友谊医院有关专家对上万例宫颈病变患者的筛查结果显示，发现异常607例，最后确诊宫颈癌前病变345例，宫颈癌9例。宫颈癌前病变最年轻者23岁，宫颈癌患者年龄分布在3448岁，其中40岁以下者占33.3，4048岁者占66.6，宫颈癌已严重威胁到中青年女性的健康和生命。液基细胞学制片技术的发展 宫颈癌防治的关键在于定期进行妇科检查，及时发定期进行妇科检查，及时发现和治疗宫颈癌前病变，终止其向宫颈癌的方向发展现和治疗宫颈癌前病变，终止其向宫颈癌的方向发展。由于宫颈癌有一系列的前驱病变，它的发生、发展是由量变到质变，渐变到突变的过程。通常由子宫颈鳞状上皮不典型增生(癌前病变)发展到原位癌再到早期浸润癌，最后发展到浸润癌的连续发展过程有6-8年的时间。在这期间如果对宫颈病变及时的诊断和正确的治疗，就能预防及早期治愈宫颈癌。液基细胞学制片技术的发展宫颈脱落细胞学的传统诊查手段宫颈脱落细胞学的传统诊查手段巴氏涂片巴氏涂片 希腊医生希腊医生PapanicolaouPapanicolaou GNGN（巴氏（巴氏)通过对通过对阴道细胞的长期观察，发现了源于子宫颈癌的阴道细胞的长期观察，发现了源于子宫颈癌的细胞，巴氏理论和技术对恶性肿瘤和癌前病变细胞，巴氏理论和技术对恶性肿瘤和癌前病变诊断起了重要的作用，诊断起了重要的作用，自自19431943年巴氏涂片应用年巴氏涂片应用以来，以来，宫颈癌的发生率和死亡率在宫颈癌的发生率和死亡率在5050年间降低年间降低了了70%.70%.液基细胞学制片技术的发展1943年发明的巴氏宫颈涂片法应用半个多世纪以来，为早期诊断子宫癌及降低死亡率发挥了重要作用。直到80年代中后期，美国报道了大量巴氏宫颈涂片诊断为假阴性（2%-50%）的病例，使人们认识到对制片技术进行进一步改进的必要性。细胞学专家通过研究发现，传统的巴氏涂片漏诊或误诊的主要原因是取材时细胞丢失和涂片质量差，涂片上存在着大量的红细胞、白细胞、粘液及脱落坏死组织等。针对上述缺陷，美国新柏氏公司于1996年，率先推出了液基薄层细胞涂片技术（Thin-layerlogyTest,TCT），并于1998年引入中国市场，通过近10年的市场推广，得到了长远发展。液基细胞学制片技术的发展液基薄层细胞涂片技术：液基薄层细胞涂片技术：通过特制采样器，采集标本，将细胞100%保存于细胞保存液内，再通过技术手段，去除红细胞、粘液等非诊断成分，通过不同原理的制片技术将细胞均匀、薄层的涂布于载玻片上。1996年新柏氏推出了基于高精密过滤膜的制片技术，简称TCT；1998年超柏氏推出了基于密度梯度离心和自然沉降的制片技术，简称LCT。2001年推出了替代巴氏五级分类法的报告系统，简称为TBS报告系统。液基细胞学液基细胞学制片技术的应用优势制片技术的应用优势取材部位：鳞状上皮细胞与柱状上皮细胞交接区-移形带液基细胞学液基细胞学制片技术的应用优势制片技术的应用优势取材优势：取材优势：传统的取材器传统的取材器 取材方法：采用硬质刮片，沿取材方法：采用硬质刮片，沿宫颈口，按一个方向，刮取宫颈口，按一个方向，刮取一定圆周范围，创伤较大；一定圆周范围，创伤较大；由于操作人员不同，可能造由于操作人员不同，可能造成病变部位未取到的情况成病变部位未取到的情况n n新型的取材器新型的取材器新型的取材器新型的取材器n n n n n n取材方法：采用软质毛取材方法：采用软质毛取材方法：采用软质毛取材方法：采用软质毛刷，沿宫颈口，按一个刷，沿宫颈口，按一个刷，沿宫颈口，按一个刷，沿宫颈口，按一个方向，旋转方向，旋转方向，旋转方向，旋转3-53-5圈；确圈；确圈；确圈；确保整个宫颈口圆周区域保整个宫颈口圆周区域保整个宫颈口圆周区域保整个宫颈口圆周区域内各部位细胞均被取到，内各部位细胞均被取到，内各部位细胞均被取到，内各部位细胞均被取到，创伤较小。创伤较小。创伤较小。创伤较小。液基细胞学液基细胞学制片技术的应用优势制片技术的应用优势细胞保存优势：细胞保存优势：巴氏涂片：将刮片从载玻片一头推至另一头，丢弃刮片。可能造成刮片未接触玻片面的细胞不被取到，丢弃大量细胞。液基细胞学制片：将刷头上细胞充分洗入细胞保存液内，使得制片前细胞不发生丢失。液基细胞学液基细胞学制片技术的应用优势制片技术的应用优势诊断优势：传统的巴氏涂片可能由于人员操作差异，导致部分涂片可观察细胞少，粘液等大量聚集，覆盖观察成分，造成诊断失误。n n n n液基细胞制片技术：液基细胞制片技术：n n 将细胞充分混匀，通过技将细胞充分混匀，通过技术手段制成镜下观察细胞呈薄术手段制成镜下观察细胞呈薄层分布，粘液等非诊断成分少层分布，粘液等非诊断成分少的薄片，更有利于诊断。的薄片，更有利于诊断。TBS报告系统的解读巴氏五级分类法：巴氏五级分类法：级：正常：未见异常细胞.级：炎症：发现异常细胞,但均为良性.级：可疑：发现可疑恶性细胞.（1）性质不明细胞.（2）细胞形态明显异常,难于肯定其良,恶性,需要近期复查核实.（3）未分化或退化的可疑恶性细胞与恶性裸核.级：高度：发现待证实的癌细胞（高度可疑的恶性细胞）,具有恶性特征但不够典型;或更典型但数目太少,需要复核,例如高度可疑的未分化或退化癌细胞,或少数低分化癌细胞.级：恶性：发现癌细胞,其恶性特征明显或数目较多,可作互相比较以确定为恶性者,例如高分化的鳞癌或腺癌细胞;成群未分化或低分化癌细胞.TBS报告系统的解读 以级别来表示细胞学改变的程度易造成假象，每个级别之间有严格的区别，使临床医师仅根据分类级别的特定范围处理患者，实际上、级之间的区别并无严格的客观标准，主观因素较多；对癌前病变也无明确规定，可疑癌是指可疑浸润癌还是CIN不明确；不典型细胞全部作为良性细胞学改变也欠妥，因为偶然也见到CIN伴微小浸润癌的病例；未能与组织病理学诊断名词相对应，也未包括非癌的诊断。2001年推出的TBS报告系统已逐步取代传统的巴氏五级分类法。TBS报告系统的解读处理原则：（1）对涂片的满意程度 分为满意、基本满意、不满意。（2）结果为正常，则每年定期进行TCT检查。（3）良性细胞改变 感染：滴虫性阴道炎；霉菌性阴道炎；形态学似放线菌感染；形态学似乳头瘤病毒感染；形态学似单纯疱疹病毒感染。反应性改变：炎症（包括典型修复细胞的出现）；萎缩性改变及炎症；放疗后改变；放置宫内节育器的改变及其它。TBS报告系统的解读（4）上皮细胞的异常改变鳞状上皮细胞异常结果为ASC-US（不能明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞），建议36个月后重复 TCT检查。结果为ASC-H（非典型鳞状上皮细胞不排除高度鳞状上皮内病变），应在阴道镜下行组织活检以及HPV检测。结果为LSIL（低度鳞状上皮内病变，包括CIN），建议36个月后重复TCT检查。复查阳性者，尤其对HPV阳性者，应在阴道镜下行组织活检，以及HPV检测。复查结果阴性者，则每年定期进行TCT复查。结果为HSIL（高度磷状上皮内病变,包括CIN、CIN、原位癌、鳞癌），应在阴道镜下行组织活 检以及HPV检测。注：宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasias，CIN)是一组与宫颈浸润癌密切相关的癌前期病变的统称包括宫颈不典型增生和宫颈原位癌，反映了宫颈癌发生中连续发展的过程，即由宫颈不典型增生(轻中重，CIN、)原位癌早期浸润癌浸润癌的一系列病理变化。CIN已被国内外病理学者和妇科肿瘤学者所接受。TBS报告系统的解读腺上皮细胞异常结果为AGC-US（不能明确诊断意义的非典型腺上皮细胞），建议36个月后重复TCT检查。结果为非典型腺细胞倾向原位腺癌，应在阴道镜下行组织活检以及HPV检测。结果为AGC（非典型腺上皮细胞），应在阴道镜下行组织活检以及HPV检测。结果为可疑腺癌、腺癌（包括宫颈腺癌、子宫内膜腺癌、子宫外的腺癌及来源不明的腺癌等），应在阴道镜下行组织活检以及HPV检测。下面主要介绍2006ASCCP循证医学指南介绍具体处理流程。最新临床处理指南，请参照最新临床处理指南，请参照2011NCCP2011NCCP宫颈癌筛查指宫颈癌筛查指南。南。影响制片效果的因素及操作要点影响制片效果的因素及操作要点符合符合TBSTBS系统的满意的制片其评价标准为：系统的满意的制片其评价标准为：玻片有标识；涂片上有足够量的形态保持良好的鳞状上皮细胞（50000个以上），细胞覆盖面积不得少于30%；包含有移行区成分（5个以上的宫颈内膜腺上皮细胞或鳞状上皮化生细胞至少有两团）；涂片上至少有75%以上的细胞能观察清楚。注意：镜下视觉美观的细胞涂片不等于是对临床诊断有意义的细胞涂片。有成堆存在，但结构清晰、可观察的细胞涂片往往对临床诊断有重要的诊断价值，因为病变细胞往往成堆出现，且伴随阳性背景。影响制片效果的因素及操作要点影响制片效果的因素及操作要点 使用LT-YJ2000型自动液基薄层细胞涂片机，制出有利于临床诊断的片子，主要影响因素为标本取材、标本预处理、仪器制片、后续染色。1 取材：仪器只能基于所取到的样本进行制片，取得的细胞量过少或者全部为粘液成分，会造成所制得的片子上诊断成分不足。影响制片效果的因素及操作要点影响制片效果的因素及操作要点取样前：应先用棉签将宫颈口表面的粘液尽可能的擦拭干净取样：施加一定的力度，朝一个方向旋转3-5圈。应特别注意，施加力度不够或者表面粘液过多时，刷头会在粘液表面打滑，取到的成分全是粘液（非诊断成分），细胞成分少。取样后：将刷头在细胞保存液内反复刷洗5-8次，将细胞洗入保存液内，丢弃刷头，盖紧瓶盖。注：若将刷头丢至保存液瓶内，盖紧瓶盖后，应立即摇动，将刷头上细胞洗脱，避免细胞粘附在刷头表面，后续震荡不能从刷头上脱落并且易成块。影响制片效果的因素影响制片效果的因素2标本预处理适当的预处理能提高制片成功率。预处理前首先观察标本性状，针对不同性状标本进行不同的预处理，常见标本性状如下图所示：影响制片效果的因素及操作要点影响制片效果的因素及操作要点 如图所示，从左数起，第1瓶和第2瓶为血性标本，含中量粘液，粘度较大；第3瓶为黄色，原因为使用了药物，第四瓶浅黄色，为粘液偏多，第5瓶本色透明，粘液少。1 取样后隔夜后制片更好，不得少于20min。2 在粘液偏多的标本瓶内加入1ml清洗液1，血性标本不需要针对红细胞作任何处理，所有标本在振荡器上强烈震荡10min，或者涡旋振荡器上震荡（但应注意有效震荡，观察瓶内溶液，应呈高速漩涡状态）20s。标本量较少时，可直接用手强力振摇数次即可。3 上机前剔除不能被打散的蛋清样粘液团和未被打散的大块固态粘液团影响制片效果的因素及操作要点影响制片效果的因素及操作要点3 制片模式选择 首先要避免细胞越多越好的误区，利于诊断的片子上细胞量合适即可，关键是可被观察的细胞足够，若细胞量过多，亦会造成细胞重叠量大，影响诊断的结果。外观为透明本色，悬浮有白色颗粒的标本:一般选择模式1.外观为红色或黄绿色，但粘液量少的标本，用模式2制片。外观为红色或者黄绿色、粘度较大的标本:应确认无蛋清样粘液，选择模式3，制片后稍微阴干，再泡入95%乙醇固定。注意：制片过程中，定量吸管、载玻片应安装到位，盛放制片后载玻片的瓶子，可不加入95%乙醇，但底部应放入薄层棉花，防止玻片掉入时弹开。影响制片效果的因素及操作要点影响制片效果的因素及操作要点4 染色良好的染色效果能使得镜下观察轻松、诊断准确。用户应根据科室使用的染色液特性，进行染色。若采用巴氏染色必须进行封片阅片，最好为湿法封片。珠海珠海.丽拓丽拓