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凝血酶时间（TT）测定
（分析仪器法）

某某人民医院
检验科临检室
凝血酶时间（TT）测定
（分析仪器法）
编号:
版本:1
页数:共5页

1 实验原理：凝固法
确定量的血浆样本（100μl），加入凝血酶时间（TT）反应试剂（50μl）经过一定时间（3min）加湿后，采用波长660nm的光照射样本，凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定，然后通过标准曲线求出凝血酶时间。
2 标本采集
2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。
2.2 3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。
3 标本存放
1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。
4 标本运输：低温条件下运输。
5 标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。
6. 实验材料:
6.1 德国Dade Behring Marburg 公司凝血酶时间测定试剂,每瓶5ml（用配套稀释液溶解）共50人份,未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过7天。
6.2 Dade Citrol质控血浆.用蒸馏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。复溶后,室温保存2小时,2～8℃4小时。
7. 仪器设备:
7.1 仪器名称: Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪
7.2 仪器厂家:日本Sysmex公司
7.3 仪器型号:Sysmex CA-1500
7.4 仪器技术参数:
7.4.1 速度: 最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时
7.4.2 试剂位:36个,具冷藏功能。
7.4.3 样本位:50个,可自动连续添加。
7.5 仪器校准程序:
7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校准。
7.52 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)
8. 操作步骤:
8.1 检查前准备:
8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。
8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线)。
8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。
8.2 开机
先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定。
8.3 输入工作清单:
从主菜单选Work List→出现第一架样本工作清单输入画面,选ID NO Entry输入第一个样本号→按相应实验项目名称键PT,并同时输入此标本的其他测试项目,若选“凝血四项（PT、APTT、Fbg、TT）”，可按Profile #1组合选项选择，选中项目相应位置标记为“○”，选完项目后按ENTER确认，要删除某项目时只需按该项目（按键如PT○变为PT-）即可，→用↑↓键，同样输入其他标本编号项目。（快速输入可用Repeat键，输入重复标本数，复制同样项目的输入。
8.4 放置样本
按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)
8.5 按Start键开始测定.
盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按Start键,进样开始,→测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“◎”，此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架样本工作清单,按Rigester,继续确认测试任务,添加样本架继续测试,→测定完成,测定项目背景变为“●”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态。
8.6 每日维护:完成每日的测定后,关机前维护。
8.6.1 冲冼针Rinse Probe
8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯。
8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱。
8.7 关机:先关主机,再关打印机。
9．检验结果的判断与分析:
9.1 仪器测定TT的线性范围在5-600秒,测定完成后仪器显示TT秒数，若不能对参数进行正确计算,将出现下列信息:
﹡﹡﹡.﹡出现错误,不能得到分析数据
ˉˉˉ.ˉ不能计算参数
＋＋＋.＋数值超出线性范围.
9.2 仪器设定TT参考范围在14-20秒,如果得不到一个正常数值,在数据的左侧将出现下列标记:
﹡ 出现错误信息
< 数据低于可报告的低限
> 数据高于可报告的高限
10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S为警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则详见室内质控作业指导书。
11 临床意义：
11.1参考范围：14-20秒（不同厂家试剂有不同参考范围，请参照试剂说明书）
11.2 TT延长：患者血循环中AT-Ⅲ活性明显增高，肝素增多或类肝素抗凝物质存在，如SLE、肝病肾病等，异常纤维蛋白原血症，低（无）纤维蛋白原血症，FDP增多（如DIC），异常球蛋白增多（如MM）等。
11.3 TT缩短：常见于血样本有微小凝块或钙离子存在时。
12 变异的潜在来源
12.1 抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查
12.2 标本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成结果变异。
12.3 纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。
12.4 超剂量使用肝素使凝固时间延长。
12.5 FDP增加使凝固时间延长。
12.6 某些药物，如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结果。
13. 操作注意事项:干粉试剂及质控血浆溶解
13.1 确认溶剂类型，一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定
溶解液，必须按说明书要求使用。
13.2 溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。
13.3 复溶后，室温放置5-10分钟方可使用。
14. 仪器维护与保养
14.1 日常维护（见8.6）
14.2 每周维护
14.2.1 液路冲洗：仪器在“Ready”状态下，从主菜单按 Special Menu→按Maintain→按Rinse﹠Prepare → 按 Execute 键运行此程序→完成后按 Return 返回。
14.2.2 清洁仪器：定期用擦布擦干净仪器内外，包括试剂槽。
14.3 需要时维护：
14.3.1 调整压力：仪器在“Ready”状态下，以主菜单按Special Menu→按Maintain →按Pressure Adjust 键，显示压力是否在其调整范围内？若不在，则打开仪器右侧相应压力调整旋钮，旋动调整好压力，再锁紧旋钮。
14.3.2 更换灯泡：关机→从仪器右侧取下灯泡外盖及内盖→换上好的灯泡→装上内外盖→从主菜单按Special Menu→再按Maintain→按 Calib lamp→确认关上遮光盖，按Execute运行调整程序。
14.3.3 更换保险管：关机→从仪器左侧旋下保险盖→更换上好的保险管→装上保险管盖。
15. 参考文献
15.1 叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》第三版，东南大学出版社.
15.2 Sysmex公司《Sysmex CA-1500操作手册》 1998.6修订本.

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