维生素类药物的分析.ppt

第九章第九章第九章第九章维生素类药物维生素类药物的分析的分析维生素：维生素：是维持人体正常代谢机能所是维持人体正常代谢机能所必需的必需的 微量营养物质。微量营养物质。人体不能合成维生素。人体不能合成维生素。VitA、D2、D3、E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitPP-H 维生素维生素A醇醇-COCH3 维生素维生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A棕榈酸酯棕榈酸酯R:第一节第一节 维生素维生素 A A的分析的分析为一个具有共轭多烯侧链的为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯环己烯（一）（一）结构与性质结构与性质一、一、v 具有具有UVUV吸收吸收v 存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物维生素维生素A 325.5 100%新维生素新维生素Aa 328 75%新维生素新维生素Ab 320.5 24%新维生素新维生素Ac 310.5 15%异维生素异维生素Aa 323 21%异维生素异维生素Ab 324 24%相对生物效价相对生物效价VitA2VitA3v 易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应聚合反应聚合反应 鲸醇鲸醇（二）（二）性质性质 1 溶解性溶解性不溶于水不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等易溶于有机溶剂和植物油等2 2 不稳定性不稳定性共轭多烯侧链易被氧化共轭多烯侧链易被氧化v 或有金属离子存在时氧化或有金属离子存在时氧化环氧化物环氧化物VitAVitA醛醛VitAVitA酸酸4 4 与三氯化锑发生呈色反应与三氯化锑发生呈色反应CHCl33 3紫外吸收特性紫外吸收特性 325-328325-328的范围有最大吸收的范围有最大吸收（一）三氯化锑反应（一）三氯化锑反应（Carr-price 反应）反应）条件：无水，无醇。条件：无水，无醇。CHCl3鉴别鉴别二、二、蓝色蓝色逐渐变紫红逐渐变紫红方法方法 取维生素取维生素A A油溶液油溶液1d1d，加氯仿加氯仿10 ml10 ml，振摇溶解，振摇溶解，取出两滴，加氯仿取出两滴，加氯仿2 ml2 ml，与，与25%25%三氯化梯氯仿液三氯化梯氯仿液0.5 ml0.5 ml反反应，成兰色，渐成紫红。应，成兰色，渐成紫红。（BPBP（20002000）max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UVUV法法（二）（二）max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰去水去水VitA（VitA3）VitA讨论讨论 维生素维生素 A A有五个共扼有五个共扼双键，无水乙醇溶液在双键，无水乙醇溶液在 326 326 nmnm处有最大吸收，盐酸催化加处有最大吸收，盐酸催化加热脱水，成热脱水，成5 5个双键，故，波个双键，故，波长红移，同时在长红移，同时在350-390350-390之间之间出现出现3 3个吸收峰。个吸收峰。USP USP 显色剂显色剂 磷钼酸磷钼酸 规定斑点颜色和规定斑点颜色和RfRf值值BP BP 杂质对照品法杂质对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑TLCTLC法法（三）（三）立体异构体立体异构体氧化产物及光照产物氧化产物及光照产物合成中间体合成中间体去氢维生素去氢维生素A A（VitAVitA2 2）去水维生素去水维生素A A（VitAVitA3 3）UVUV法法（一）（一）三三 含量测定含量测定三、点校正法（三、点校正法（P208P208）1.1.条件：条件：（1 1）杂质的吸收在）杂质的吸收在310340nm310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；波长的增大吸收度减小；（2 2）物质对光的吸收具有加和）物质对光的吸收具有加和性。性。2.波长的选择：波长的选择：（1）1 VitA的的 max（328nm）（2）2 3 分别在分别在 1 1的两侧各选一点的两侧各选一点对吸收有影响的杂质见书对吸收有影响的杂质见书209液液测定对象：测定对象：VitAVitA醋酸酯醋酸酯第一法第一法 等波长差法等波长差法第二法第二法 等吸收度法等吸收度法(皂化法皂化法)测定对象：测定对象：VitAVitA醇醇3.3.测定法测定法（1 1）基本步骤）基本步骤:v第一步第一步 A A选择选择选择依据：选择依据：所选所选A A值中杂质的干扰已基本消除值中杂质的干扰已基本消除注意：注意：C 为混合样品的浓度为混合样品的浓度 第二步第二步 求求第三步第三步 求效价求效价换算因数由纯品计算而得：换算因数由纯品计算而得：第四步：求标示量第四步：求标示量（二）（二）(二二)三氯化锑比色法三氯化锑比色法 标准曲线法标准曲线法优点优点 简便简便 快速快速max max 618nm618nm620nm620nm缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定 （5 10s5 10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差11专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性注意事项注意事项1 1 颜色不稳，动作要快。颜色不稳，动作要快。2 2 用无水氯仿作溶剂测定用无水氯仿作溶剂测定,要求无水。要求无水。3 3 温度恒定。温度恒定。4 4 非专属性，结果偏高。非专属性，结果偏高。5 5 有腐蚀性。有腐蚀性。三三 HPLC HPLC氨基嘧啶环氨基嘧啶环CHCH2 2噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱)第二节第二节 维生素维生素B B1 1HClCl-（二）（二）性质性质1 1 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性2 2 硫色素反应：硫色素反应：噻唑环在碱性介质噻唑环在碱性介质中开环，在与嘧啶环环合，经铁中开环，在与嘧啶环环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。的硫色素。3 3 盐酸液的盐酸液的246nm246nm波长处测定吸收度，波长处测定吸收度，吸收系数为吸收系数为421421。UV UV 共轭双键共轭双键 max=246nmmax=246nm4 4 碱性碱性 嘧啶环嘧啶环 伯氨伯氨 噻唑环噻唑环 季铵季铵1 1、可与酸成盐、可与酸成盐2 2、与生物碱沉淀剂沉淀。、与生物碱沉淀剂沉淀。3 3、含量测定、含量测定 非水碱量法非水碱量法二、鉴别试验二、鉴别试验（一）（一）硫色素反应，硫色素反应，ChPChP硫色素硫色素2H方法方法 取本品约取本品约5 mg5 mg，加氢氧，加氢氧化钠与正丁醇化钠与正丁醇2.5ml2.5ml，强烈振摇。，强烈振摇。放置分层，上面醇层显强烈兰色放置分层，上面醇层显强烈兰色荧光。加酸消失，再加碱又重现。荧光。加酸消失，再加碱又重现。专属性反应。专属性反应。VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反应（二）沉淀反应S元素反应元素反应Cl-反应反应（三）其他反应（三）其他反应三三含量测定含量测定（一）（一）非水滴定法非水滴定法 1 1 原理原理 两个碱性的，已成两个碱性的，已成盐的伯胺与季胺的基团，在盐的伯胺与季胺的基团，在非水溶液中，醋酸汞存在下，非水溶液中，醋酸汞存在下，均可与高氯酸作用，根据消均可与高氯酸作用，根据消耗高氯酸的量进行计算。耗高氯酸的量进行计算。喹那啶红亚甲蓝喹那啶红亚甲蓝 （紫红（紫红天蓝）天蓝）2 2 方法方法 取本品取本品0.15g0.15g，精密，精密称定，置称定，置100ml100ml具塞锥形瓶中加具塞锥形瓶中加冰醋酸，醋酸汞，喹那啶红亚冰醋酸，醋酸汞，喹那啶红亚甲蓝甲蓝2d2d，高氯酸滴定。由紫红，高氯酸滴定。由紫红天蓝，天蓝，1ml1ml相当于相当于16.86mg16.86mg。二二 紫外光谱法紫外光谱法 维生素维生素B1B1片的测定，片的测定，取取2020片称定。严细。称取细粉片称定。严细。称取细粉适量，相当于适量，相当于25 mg25 mg，置，置100ml100ml量瓶中，取量瓶中，取5ml5ml，在定溶于，在定溶于100ml100ml，246nm246nm测。标准吸光系测。标准吸光系数数421421。注意所使用的溶剂。注意所使用的溶剂。=421（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=%=A=ECL规格规格g/g/片片g/100mlgChPChP片剂片剂维生素维生素B1注射液的测定注射液的测定取本品相当于取本品相当于B1 50mg，置，置200ml量瓶中，加水置刻度，量瓶中，加水置刻度，取取5ml，用盐酸定溶于，用盐酸定溶于100ml，246nm测。标准吸光系数测。标准吸光系数421。注射剂（每注射剂（每mlml）相当于标示量的）相当于标示量的%=%=规格规格g/mlmlNaOH（三）（三）硫色素荧光法硫色素荧光法原理原理1、激发波长激发波长365nm365nm发射波长发射波长435nm435nm方法与计算方法与计算2、+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾+异丁醇异丁醇+NaOH+异丁醇异丁醇+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾+异丁醇异丁醇+NaOH+异丁醇异丁醇S SdAb对照液对照液供试液供试液特点特点3、（1 1）灵敏度高，线性范围宽）灵敏度高，线性范围宽（2 2）代谢产物不干扰，适用于）代谢产物不干扰，适用于 体液分析体液分析第三节第三节 维生素维生素C CL L抗坏血酸抗坏血酸（一）结构（一）结构 为为L-L-抗坏血酸，在化学结抗坏血酸，在化学结构上和醣类似。有构上和醣类似。有4 4种光学异构种光学异构体，体，L L右旋活性最强。具有二稀右旋活性最强。具有二稀醇的结构，具有内酯环，具有两醇的结构，具有内酯环，具有两个手性碳（个手性碳（C4C4，C5C5），性质活泼。），性质活泼。（二）性质（二）性质1 1溶解性溶解性易溶于水易溶于水水溶液呈酸性水溶液呈酸性2 2 酸性酸性C C3 3OHOH的酸性的酸性较强。较强。pKa=pKa=4.174.17，C C2 2OHOH的的酸性较弱酸性较弱pKa=pKa=11.5711.57。故表现。故表现为一元酸的性为一元酸的性质。能与碳酸质。能与碳酸氢钠成钠盐。氢钠成钠盐。二烯醇结构二烯醇结构二酮基结构二酮基结构3强还原性强还原性二烯醇结构的还原性极强。二烯醇结构的还原性极强。有活性有活性有活性有活性无活性无活性4 4光学活性光学活性L(+)L(+)抗坏血抗坏血酸酸活性最强手性活性最强手性C C（C C4 4、C C5 5）*5 5 水解反应与碱反应水解反应与碱反应 506 6 具糖的性质具糖的性质 结构与糖类相似结构与糖类相似 有糖类的显色反应有糖类的显色反应7 7 紫外特征紫外特征二、鉴别反应二、鉴别反应（一）与（一）与AgNOAgNO3 3反应反应 (ChP2000)具有强还原性具有强还原性：取本品取本品0.2 g,加水加水10 ml溶解，溶解，取取5 ml，加硝酸银，加硝酸银0.5ml，成，成-（二）、与（二）、与2 2，6-6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色还原型还原型蓝色蓝色OHOH(ChP2000)（玫瑰色）（玫瑰色）（无色）（无色）取本品取本品0.2 g,加水加水10 ml溶溶解，取解，取5 ml，加，加2 2，6-6-二二氯靛酚氯靛酚2d，成，成-（三）与其他氧化剂的反应（三）与其他氧化剂的反应与碱性酒石酸铜反应与碱性酒石酸铜反应USPUSP与与KMnOKMnO4 4反应反应（四）糖类的反应（四）糖类的反应 USPUSP或盐酸或盐酸50吡咯吡咯（蓝色）（蓝色）(糠醛糠醛)戊糖戊糖50(吡咯吡咯)（四）（四）UVUV0.01mol/L HCl0.01mol/L HCl三三杂质检查杂质检查（一）（一）溶液的澄清度与颜色溶液的澄清度与颜色检查检查注射液注射液 取本品适量，加水成取本品适量，加水成50mg/ml50mg/ml的溶液，的溶液，420nm 420nm 测，测，吸收度不得超过吸收度不得超过0.060.06。片剂片剂 取片粉适量（相当于取片粉适量（相当于1.0g1.0g），加水），加水20ml20ml溶解，滤过。溶解，滤过。成成50mg/ml50mg/ml的溶液，的溶液，440nm 440nm 测，测，吸收度不得超过吸收度不得超过0.070.07。在加工过程中有色杂质略有不在加工过程中有色杂质略有不同，故波长不同。同，故波长不同。（二）（二）铁，铜离子的检查铁，铜离子的检查指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液四、含量测定四、含量测定（一）碘量法（一）碘量法1 原理原理H+取本品约取本品约0.2g0.2g，精密称定，加新，精密称定，加新沸过的冷水沸过的冷水100ml100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml1ml，立即用碘滴，立即用碘滴定液（定液（0.1mol/L0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝）滴定，至溶液显蓝色，在色，在3030秒内不褪。每秒内不褪。每1ml1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg8.806mg的的C C6 6H H8 8O O6 62 2、方法、方法（1 1）酸性环境）酸性环境 d.HCl d.HCl （2 2）新沸冷）新沸冷H H2 2O O减慢减慢VitCVitC被被O O2 2氧化速度氧化速度4 4、讨论、讨论（3 3）立即滴）立即滴定定 赶走水中赶走水中O O2 2减少减少O O2 2的干扰的干扰（4 4）附加剂干扰的排除）附加剂干扰的排除片剂片剂 滑石粉滑石粉 过滤过滤注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 一缩二亚硫酸CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a（二）（二）2 2，6-6-二氯靛酚钠滴定法法二氯靛酚钠滴定法法1 1、原理、原理自身指示终点法自身指示终点法2 2、方法、方法（4 4）缺）缺点点 需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周不稳定不稳定干扰多干扰多 氧化力较强氧化力较强（三）（三）HPLCHPLC法法例例多种维生素片中多种维生素片中VitAVitA、VitBVitB1 1、VitBVitB2 2 、VitBVitB6 6 、烟酰胺、烟酰胺、VitCVitC、VitEVitE的含量测定的含量测定色谱柱色谱柱 ODS流动相流动相 A、水、水-甲醇（甲醇（4 ：1）B、甲醇、甲醇 （梯度洗脱）（梯度洗脱）抗氧剂抗氧剂 二巯基丙烷磺酸钠二巯基丙烷磺酸钠 水溶性维生素水溶性维生素 离子对色谱法（樟脑磺酸）离子对色谱法（樟脑磺酸）内标法内标法 +校正因子校正因子 内标物内标物苯酚苯酚脂溶性维生素脂溶性维生素 外标法外标法