HIV抗体检测技术规程PPT课件.ppt

HIV抗体检测实验室技术规程天津市CDC HIV确证中心实验室 郑敏娜2013.6.251 HIVHIV病毒感染人体病毒感染人体过过程及免疫学机制程及免疫学机制2o明确明确HIV感染者（感染者（诊诊断）断）n控制控制传传播播n及早医学干及早医学干预预n血液血液筛查筛查o流行病学流行病学调查调查、高危人群、高危人群监测监测o开展开展VCT的基的基础础o职业职业保保护护HIV抗体抗体检测检测在艾滋病防治中的作用在艾滋病防治中的作用3主要内容oHIV抗体检测的相关规范性文件oHIV抗体检测的方法和注意事项oHIV抗体确证实验的相关规程和结果解释o目前我市HIV筛查实验室中存在的问题4HIV抗体检测的相关规范性文件o医疗机构临床实验室管理办法卫医发200673号 o全国艾滋病检测工作管理办法卫疾控发2006218号 o全国艾滋病检测技术规范(2009年版)5HIV抗体检测的相关规范性文件o全国艾滋病检测工作管理办法卫疾控发2006218号 o检测工作要求第十二条艾滋病检测实验室应在规定的职能范围内开展检测工作，遵守国家法律、法规和有关规范。检测技术及程序应符合全国艾滋病检测技术规范的要求。6HIV抗体检测的方法和注意事项oHIV抗体检测的主要方法金标准o包括初筛实验和确证实验 7p初筛实验:p试剂必须经国家食品药品监督管理局注册批准，在有效期内的，批批检合格p敏感性和特异性好：p方法包括：ELISA，化学发光法和快速检测法（免疫层析，颗粒凝集等方法）p样本：血清、血浆；干血斑；唾液；尿液 HIV抗体检测的方法和注意事项快速免疫层析明胶颗粒凝集法（PA）HIV ELISA8试剂质量评估：http:/ 在有效期内使用o试验试验操作操作 形成良好的操作形成良好的操作习惯习惯：加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。严严格按格按试剂说试剂说明明书书操作操作:空白孔不加样品和酶标试剂 操作操作过过程中集中精力程中集中精力：避免加样错误13注意事注意事项项o保证实验室温度，室温过低有可能造成吸光度值偏低。o ELISA试验的敏感性很高，如果操作不当很容易出现非特异性反应。在操作过程中，尤其应注意洗涤过程。洗涤彻底可减少假阳性的机会。o进行ELISA试验时，必须用酶标仪进行测定，不得目测结果。使用酶标仪时，要避免酶标孔内产生气泡，影响判读结果。14ELISA操作中的注意事操作中的注意事项项o试剂试剂准准备备o加加样样o温育温育o洗板洗板o显显色色o比色比色操作示范操作示范请请看教学片看教学片15ELISA试验假阳性产生原因？o样样品加品加错错位置，位置，标标本搞本搞错错o洗板机洗板机设设置不当，洗板置不当，洗板时时洗洗涤涤液溢出，液溢出，污污染其它孔染其它孔o洗板机内部管道有真菌生洗板机内部管道有真菌生长长o实验实验中，中，实际实际孵育孵育时间过长时间过长，温度，温度过过高高o待待测标测标本溶血或含有血本溶血或含有血细细胞。胞。o待待测标测标本本长长菌或其它原因混菌或其它原因混浊浊。o其它原因：其它原因：与与试验试验操作无关操作无关 16HIV抗体筛查和复检的流程与2004版检测规范的不同报告HIV抗体检测阴性17HIV感染产妇所生婴幼儿的抗体检测18HIVHIV抗体确抗体确证实验证实验的相关的相关规规程和程和结结果解果解释释o复检阳性或一阴一阳的样本 确认实验 送确认前，应核对身份，补充个人信息（姓名，身份证号等）填写”HIV抗体复检检测单”样本“三级包装”第一层：带盖的试管第二层：防水，防漏第三层：包装箱（内附缓冲材料）19HIV抗体确认实验o包括：免疫印迹免疫印迹实验实验(WB)条条带带免疫免疫试验试验(LIA)免疫免疫荧荧光光试验试验(IFA)放射免疫沉淀放射免疫沉淀试验试验(RIPA)20HIV抗体确抗体确认实验结认实验结果果a 强强阳性阳性对对照（照（HIV-1和和HIV-2）b弱阳性弱阳性对对照（照（HIV-1）c阴性阴性对对照照d典型的典型的HIV-2血清阳性反血清阳性反应应 a b c d a b c dgp160gp160gp120gp120 p66 p66p55p55p51 p51 gp41gp41p39p39 p31 p31P24P24p17p17 血清血清血清血清对对对对照照照照HIV-2HIV-2特异特异特异特异带带带带21HIV抗体确抗体确认实验结认实验结果果22HIV抗体确证实验的流程23HIV抗体检测的样本保存o用于抗体和抗原检测的血清和血浆样本：1周内 2-8保存 1周-20 保存o筛查阳性样本：送确证o筛查阴性样本：根据具体情况，至少1-2个月o确证样品：保存10年以上24目前我市HIV筛查实验室中存在的问题o实验室布局不合理，没有严格分区；没有标识 应设严应设严格分区（格分区（污污染区、半染区、半污污染区和染区和洁净洁净区）；生物安全区）；生物安全标标识识o个别实验室设备不全，没有安全柜o仪器没有定期校准 酶酶标仪标仪/洗板机、加洗板机、加样样器，温度器，温度计计，高，高压灭压灭菌器，生物安全柜菌器，生物安全柜每年校准，每季度期每年校准，每季度期间间核核查查o没有HIV实验室生物安全管理制度和SOP 实验实验活活动动的基本依据，必的基本依据，必须须建立，每年建立，每年应进应进行行检查检查修修订订，并，并有有记录记录25目前我市HIV筛查实验室中存在的问题o没有质控记录：很多实验室都有o人员流动性大，经培训的专业技术人员严重不足，部分人员未经专业技术培训就上岗 保证实验室负责人和主要技术 人员的稳定，两年一培两年一培训训，考核合格，持，考核合格，持证证上上岗岗o实验室技术人员生物安全意识淡薄 增强安全意识，做好防护，保护自身安全o实验室原始记录不规范，缺乏可溯源性 应应体体现现加加样样步步骤骤和位置；和位置；试剂试剂厂家、批号、效期，厂家、批号、效期，检测检测人和复核人人和复核人26目前我市HIV筛查实验室中存在的问题o复检阳性结果的报告问题 筛查实验阴性直接出报告；复检后为阳性或一阴一阳的样本报告为“HIV抗体代确证”，用“HIV抗体复检检测单”进行报告o送错样本 认真核对样本，补充个人信息，必要时采集第二份血o质控品的使用时限 -20 有效期内均可使用；解冻后的1周内用完o送检样本包装不合格，没有送检单（HIV复检检测单）o阴性样本的保存问题 建建议议至少保存至少保存1-21-2月月27HIV确证结果的反馈、解释和报告o一般5个工作日出具结果，国家规范是10天o第一时间上传到网报系统o结果查询电话24333419oHIV-1抗体检测不确定结果的解释2829