特殊染色ppt课件.pptx

区别）区别HE染色中不能鉴别的组织病变，如染色中不能鉴别的组织病变，如VG染色染色区别胶元纤维和平滑肌。区别胶元纤维和平滑肌。（3）显示某些常规染色中不能着色的物质，如网染）显示某些常规染色中不能着色的物质，如网染才能显示网状纤维，常规才能显示网状纤维，常规HE染色是染不出来的。染色是染不出来的。因此，特殊染色也是制片染色中不可缺少的组成部分，因此，特殊染色也是制片染色中不可缺少的组成部分，它在病理诊断常着辅助作用，也为科研提供依据。它在病理诊断常着辅助作用，也为科研提供依据。二、学习特染技术应掌握的重点二、学习特染技术应掌握的重点（注意事项）（注意事项）（1）染色方法的成败，应该在温度、浓度、时间和）染色方法的成败，应该在温度、浓度、时间和PH值等方面找原因。值等方面找原因。（2）注意特染的应用范围，如某种病变应用什么方）注意特染的应用范围，如某种病变应用什么方法染色才能达到目的，一般先在法染色才能达到目的，一般先在HE切片所见的要求去切片所见的要求去选择适当的特染方法，一种或多种选择适当的特染方法，一种或多种。（3）必须掌握各种特殊染色的结果，避免）必须掌握各种特殊染色的结果，避免导致错误的结论或严重的误诊，如在网染时导致错误的结论或严重的误诊，如在网染时把胶元纤维误以为网状纤维。把胶元纤维误以为网状纤维。（4）尽量要阳性切片作对照，便于选择特）尽量要阳性切片作对照，便于选择特染方法，并与染方法，并与HE切片作对照。切片作对照。（5）特染的组织，在其固定、脱水根据要）特染的组织，在其固定、脱水根据要求选择。所用的器皿都必须化学清洗。求选择。所用的器皿都必须化学清洗。三、玻璃器皿的清洁三、玻璃器皿的清洁在病理实验室可用的玻璃器皿，在病理实验室可用的玻璃器皿，都必须经过清洗干净才能使用，清洗都必须经过清洗干净才能使用，清洗的方法依玻璃器皿的新旧而不同。的方法依玻璃器皿的新旧而不同。1、新购玻璃器皿的处理、新购玻璃器皿的处理对于新购买的玻璃器皿应先用洗衣对于新购买的玻璃器皿应先用洗衣粉浸泡洗刷，自来水冲洗后再用粉浸泡洗刷，自来水冲洗后再用12%盐酸水溶液浸泡数小时后，用自来水冲盐酸水溶液浸泡数小时后，用自来水冲洗干净，必要时可用少量蒸馏水洗洗干净，必要时可用少量蒸馏水洗2次次2、使用后玻璃器皿的处理、使用后玻璃器皿的处理每次使用后的玻璃器皿都必须及时彻底每次使用后的玻璃器皿都必须及时彻底清洗干净，以供下次实验之用，如轻视这一清洗干净，以供下次实验之用，如轻视这一步骤，可用的玻璃器皿不够干净，则会影响步骤，可用的玻璃器皿不够干净，则会影响染色效果，甚至导致染色失败，特别在酶组染色效果，甚至导致染色失败，特别在酶组化和银离子反应操作过程中更有严格的要求，化和银离子反应操作过程中更有严格的要求，使用后的玻璃器皿在一般清洗后，还要求用使用后的玻璃器皿在一般清洗后，还要求用硫酸清洗液浸泡。硫酸清洗液浸泡。硫酸清洗液配制硫酸清洗液配制重铬酸钾重铬酸钾80g自来水自来水1000ml浓硫酸（工业用）浓硫酸（工业用）120m新配制的清洁液为红褐色，反复使用一新配制的清洁液为红褐色，反复使用一段时间后，慢慢变成绿色，说明清洁液段时间后，慢慢变成绿色，说明清洁液已失败，不能继续使用应重新配制。已失败，不能继续使用应重新配制。3、玻璃器皿的清洗方法、玻璃器皿的清洗方法任何玻璃器皿都必须用自来水冲洗，然后把任何玻璃器皿都必须用自来水冲洗，然后把残余药液或残余药液或染染液洗去。液洗去。用毛刷沾洗衣粉擦干净。用毛刷沾洗衣粉擦干净。自来水冲洗，蒸馏水洗自来水冲洗，蒸馏水洗2次。次。把晾干的器皿轻轻置入清洁液浸泡数日。把晾干的器皿轻轻置入清洁液浸泡数日。取出器皿，用自来水把器皿内外彻底冲洗干取出器皿，用自来水把器皿内外彻底冲洗干净，最后用蒸馏水洗净，最后用蒸馏水洗2次。次。把玻璃器皿倒置于有孔架上自然晾干或温箱把玻璃器皿倒置于有孔架上自然晾干或温箱中烤干，最后存放橱内备用。中烤干，最后存放橱内备用。常用的特染常用的特染第一节第一节结缔组织染色结缔组织染色一、胶元纤维染色（一、胶元纤维染色（VG染色）染色）胶元纤维的分部组成成分胶元纤维的分部组成成分胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之一，分布最为广泛，含量最多。主要分布一，分布最为广泛，含量最多。主要分布于真皮、腱、韧带、骨、透明软骨、动脉、于真皮、腱、韧带、骨、透明软骨、动脉、肠壁肠壁、子宫和基底膜等。胶原纤维具有韧、子宫和基底膜等。胶原纤维具有韧性大，抗拉力强的特点。胶原纤维单位主性大，抗拉力强的特点。胶原纤维单位主要由纤维母细胞合成。要由纤维母细胞合成。苦味酸苦味酸酸性品红法酸性品红法1VG染液试剂配制染液试剂配制1%酸性品红酸性品红10ml苦味酸饱和液苦味酸饱和液90ml此液常分别配制临用时加以混合，不此液常分别配制临用时加以混合，不能久用。能久用。【染色步骤染色步骤】（1）组织固定于）组织固定于10%早醛液中，常规脱水包埋早醛液中，常规脱水包埋（2）组织切片脱腊至水。）组织切片脱腊至水。（3）V-G染液染液2-5（酸性品红（酸性品红1：苦味酸饱和液：苦味酸饱和液9）（4）倾去染液，无水酒精急速脱水，用滤纸吸干）倾去染液，无水酒精急速脱水，用滤纸吸干（5）二甲苯透明，中性树胶封片。）二甲苯透明，中性树胶封片。【结果结果】胶元纤维呈红色，肌纤维、胞质及胶元纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞黄色。红细胞黄色。胶元纤维染色应用胶元纤维染色应用胶原纤维染色在病理诊断上主要用于鉴定梭胶原纤维染色在病理诊断上主要用于鉴定梭形、纤维形细胞肿瘤的组织来源；形、纤维形细胞肿瘤的组织来源；常常要在纤维、平滑肌和神经三者之中作出常常要在纤维、平滑肌和神经三者之中作出选择。选择。观察动脉硬化的心脏，在观察动脉硬化的心脏，在H切片中，心肌切片中，心肌内散在的小疤痕灶和心肌均被染作红色，而作胶内散在的小疤痕灶和心肌均被染作红色，而作胶原纤维染色可将胶原组织和肌肉上明显地区分开原纤维染色可将胶原组织和肌肉上明显地区分开来。来。早期肝硬化用胶原纤维染色，也可使小叶之早期肝硬化用胶原纤维染色，也可使小叶之间少量增生的胶原纤维突出地显示出来。间少量增生的胶原纤维突出地显示出来。二、二、网状纤维染色网状纤维染色网状纤维染色的形态特点和染色原网状纤维染色的形态特点和染色原理理网状纤维是网状结缔组织内的一种网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维。它由网状细胞产生，网状纤维细而纤维。它由网状细胞产生，网状纤维细而有分支，穿行于细胞体和突之间，共同构有分支，穿行于细胞体和突之间，共同构成网状支架。这种纤维用成网状支架。这种纤维用HE染色一般不染色一般不易辨认。若用银氨溶液浸染能使纤维变成易辨认。若用银氨溶液浸染能使纤维变成黑色，故又称嗜银纤维。黑色，故又称嗜银纤维。（二）网状纤维染色的原理（二）网状纤维染色的原理网状纤维的染色方法很多，但是染色原理网状纤维的染色方法很多，但是染色原理基本相同，有以下方面。基本相同，有以下方面。（1）氧化）氧化使网状纤维具有选择性，不经氧使网状纤维具有选择性，不经氧化的切片，常用的氧化剂是高锰酸钾。化的切片，常用的氧化剂是高锰酸钾。（2）漂白）漂白一般采用一般采用2%草酸，漂白后无色草酸，漂白后无色（3）媒染）媒染多用多用2%硫酸铁氨（俗称铁明矾）。硫酸铁氨（俗称铁明矾）。这些试剂可增加网状纤维对银氨液的选择性。这些试剂可增加网状纤维对银氨液的选择性。（4）浸银）浸银也称镀银，使银氨配位化合物与网也称镀银，使银氨配位化合物与网状纤维结合，带正电荷的二氨合银状纤维结合，带正电荷的二氨合银Ag（NH3）+2被具有嗜银性物质的网状纤维吸附。被具有嗜银性物质的网状纤维吸附。（5）还原）还原甲醛液是还原剂，能把与网状纤维甲醛液是还原剂，能把与网状纤维结合的银氨配位化合物还原成棕黑色的金属银。结合的银氨配位化合物还原成棕黑色的金属银。（三）网状纤维纤维染色应用（三）网状纤维纤维染色应用判定病变组织支架的破坏情况，组织、判定病变组织支架的破坏情况，组织、脏器网状支架的存在与塌陷、完整与破坏、脏器网状支架的存在与塌陷、完整与破坏、网状纤维的分布及走行，有多少、粗细、疏网状纤维的分布及走行，有多少、粗细、疏密或有无断裂形态变化。密或有无断裂形态变化。用于显示和鉴别肿瘤的性质和来源用于显示和鉴别肿瘤的性质和来源显示和区分癌与肉瘤显示和区分癌与肉瘤来源于上皮组织的恶来源于上皮组织的恶性肿瘤（癌）仅癌巢周围有网状纤维包绕，巢内癌性肿瘤（癌）仅癌巢周围有网状纤维包绕，巢内癌细胞之间则没有网状纤维分部。来源于间叶组织的细胞之间则没有网状纤维分部。来源于间叶组织的恶性肿瘤（肉瘤），瘤细胞之间往往可见较多的网恶性肿瘤（肉瘤），瘤细胞之间往往可见较多的网状纤存在。状纤存在。用于某些肿瘤的诊断用于某些肿瘤的诊断根据染色所显示的网状纤维多少、分布根据染色所显示的网状纤维多少、分布及行走特点，可用于诊断下列肿瘤。及行走特点，可用于诊断下列肿瘤。1）平滑肌肉）平滑肌肉细胞之间见有大量平行分细胞之间见有大量平行分布的网状纤维。布的网状纤维。2）纤维肉瘤）纤维肉瘤可见大量网状纤维存在，可见大量网状纤维存在，并且密集包绕细胞。并且密集包绕细胞。3）滑膜肉瘤）滑膜肉瘤其梭形细胞也产生网状纤其梭形细胞也产生网状纤维，但不如纤维肉瘤多。维，但不如纤维肉瘤多。用于观察和研究癌组织的发生、发用于观察和研究癌组织的发生、发展及其恶性程度展及其恶性程度癌组织发生，发展过程以及癌组织生长速度，癌组织发生，发展过程以及癌组织生长速度，可通过网染进行观察和研究，如癌巢周围的网状纤可通过网染进行观察和研究，如癌巢周围的网状纤维包囊完整，说明癌组织生长较慢，恶性程度低；维包囊完整，说明癌组织生长较慢，恶性程度低；再如子宫颈鳞状细胞癌巢周围网状纤维分解，说明再如子宫颈鳞状细胞癌巢周围网状纤维分解，说明癌组织正在扩散，其恶性程度较高。癌组织正在扩散，其恶性程度较高。(5)(5)用于显示和研究肝组织病变用于显示和研究肝组织病变用网状纤维的染色法，观察肝脏病变处用网状纤维的染色法，观察肝脏病变处的网状支架形态、分布特点及其破坏情况，的网状支架形态、分布特点及其破坏情况，可以判定和研究其病变性质、程度及其发展可以判定和研究其病变性质、程度及其发展与转规。与转规。（四）（四）网状纤维染色的注意事项网状纤维染色的注意事项（1）用新蒸馏水配制最好用双蒸水配制。）用新蒸馏水配制最好用双蒸水配制。（2）所用玻璃器材及载玻片均要达到化学）所用玻璃器材及载玻片均要达到化学洁净程度洁净程度.（3）对已配制好的硝酸银液和氨银溶液，）对已配制好的硝酸银液和氨银溶液，要贮存冰箱中保存待用。要贮存冰箱中保存待用。（4）在染色过程中，用染氨银染液或硝酸银液）在染色过程中，用染氨银染液或硝酸银液的前后应用蒸馏水洗浸。的前后应用蒸馏水洗浸。（5）氯化金调色和硫代硫酸钠固定的时间不应）氯化金调色和硫代硫酸钠固定的时间不应太长，否则会引起网状纤维染色变淡。太长，否则会引起网状纤维染色变淡。（6）切片脱水后及时封片，不宜在空气中停留）切片脱水后及时封片，不宜在空气中停留时间过长，以免产生色素颗粒。时间过长，以免产生色素颗粒。【氨银液的配制氨银液的配制】1.取取10%10%硝酸银水溶液硝酸银水溶液5ml5ml于三角烧瓶内，一滴一滴地滴加于三角烧瓶内，一滴一滴地滴加氨水（氢氧化铵），并同时摇动容器氨水（氢氧化铵），并同时摇动容器 2.2.硝酸银遇到氨水立即产生沉淀，当其沉淀物被溶解时硝酸银遇到氨水立即产生沉淀，当其沉淀物被溶解时（不能完全溶解也可）（不能完全溶解也可）3.3.再加入再加入3%3%氢氧化钠水溶液氢氧化钠水溶液5ml5ml。溶液重新产生沉淀。溶液重新产生沉淀 4.4.此时再滴加氨水。至其沉淀被溶解后，（为避免氨水加此时再滴加氨水。至其沉淀被溶解后，（为避免氨水加入过量最好能有少许沉淀物为妥，以免脱片）最后加蒸馏水入过量最好能有少许沉淀物为妥，以免脱片）最后加蒸馏水稀释至稀释至50ml50ml。5.5.滤过，贮存于棕色瓶中存放入冰箱备用。临用前取出恢滤过，贮存于棕色瓶中存放入冰箱备用。临用前取出恢复室温再用。复室温再用。【染色步骤染色步骤】（1 1）切片脱蜡至水洗。切片脱蜡至水洗。（2）0.25%高锰酸钾液氧化高锰酸钾液氧化5。（3）自来水洗自来水洗2次。次。（4）2.5%草酸液漂白草酸液漂白1-2，水洗，水洗2。（5）2%硫酸铁铵媒染（铁明矾）硫酸铁铵媒染（铁明矾）10。（6）水洗，蒸馏水洗水洗，蒸馏水洗2次。次。（7）滴染氨银液滴染氨银液1左右。左右。（8）蒸馏水洗蒸馏水洗2次。次。（9）10%中性早醛还原中性早醛还原3。（10）蒸馏水洗蒸馏水洗12次。次。（11）0.2%的氯化金调色的氯化金调色55水洗。水洗。（1212）5%5%硫代硫酸钠固定硫代硫酸钠固定55。（1313）自来水冲洗，自来水冲洗，蒸馏水洗。蒸馏水洗。（1414）复染（对比染色）伊红、中性红、。复染（对比染色）伊红、中性红、。（1515）脱水、透明、封片。脱水、透明、封片。【结果结果】胶元纤维呈黄色，网状纤维成黑色。胶元纤维呈黄色，网状纤维成黑色。