对分子诊疗设备的要求和应用中的问题发送省名师优质课赛课获奖课件市赛课一等奖课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,国 家 认 可,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢,ISO15189,认可,对分子诊疗设备,要求及应用中问题,沈佐君,shenzuojun,第1页,主要内容,一、开展分子诊疗检测国家及行业相关要求,二、开展分子诊疗检测包括主要设备,三、,ISO 15189,在,分子诊疗,领域应用说明,介绍,四、,ISO 15189,对分子诊疗设备性能要求,五、,ISO 15189,对分子诊疗检测系统完整性要求,六、分子诊疗设备制造商在帮组用户经过,ISO 15189,认可过程中应注意问题,第2页,第一部分,开展分子诊疗检测国家及行业相关要求,第3页,分子诊疗基本概念,基因体外扩增检验，通常称为,PCR,检验,-,年,:,该检验项目是当前我国临床检验项目中唯一一项需要经过卫生部或省级临床检验中心现场技术验收合格方可开展临床检验技术准入项目。,年,5,月,1,日后：,卫生部关于印发,医疗技术临床应用管理方法,通知,（,卫医政发,18,号,）和,医疗机构临床基因扩增检验试验室管理方法（卫办医政发,194,号）,。,第4页,医疗技术分为三类：,第一类,：,医疗技术是指安全性、有效性确切，医疗机构经过常规管理在临床应用中能确保其安全性、有效性技术。,第二类,：,医疗技术是指安全性、有效性确切，包括一定伦理问题或者风险较高，卫生行政部门应该加以控制管理医疗技术。,（如,PCR,）,第三类,：,医疗技术是指含有以下情形之一，需要卫生行政部门加以严格控制管理医疗技术：（,1,）包括重大伦理问题；（,2,）高风险；（,3,）安全性、有效性尚需经规范临床试验研究深入验证；（,4,）需要使用稀缺资源；（,5,）卫生部要求其它需要特殊管理医疗技术。,（共,19,项第,8,项,基因芯片诊疗技术,，现划为第二类,）,第5页,卫生部负责第三类医疗技术临床应用管理工作。,第三类医疗技术目录由卫生部制订公布，并依据临床应用实际情况，给予调整。,省级卫生行政部门负责第二类医疗技术临床应用管理工作。,第二类医疗技术目录由省级卫生行政部门依据本辖区情况制订并公布，报卫生部立案。,第6页,医疗技术临床应用,能力审核,属于第三类医疗技术首次应用于临床前，必须经过卫生部组织安全性、有效性临床试验研究、论证及伦理审查。,第二类医疗技术和第三类医疗技术临床应用前实施第三方技术审核制度。,对医务人员开展第一类医疗技术临床应用能力技术审核，由医疗机构自行组织实施，也能够由省级卫生行政部门要求。,卫生部指定或者组建机构、组织（以下简称技术审核机构）负责第三类医疗技术临床应用能力技术审核工作,（,1.,中国医学科学院,、,2.,中华医学会,、,3.,中国医院协会,、,4.,中华医师协会,、,5.,中华口腔医学会,）,。,省级卫生行政部门指定或者组建技术审核机构负责第二类医疗技术临床应用能力技术审核工作。,卫生部能够委托省级卫生行政部门组织对指定第三类医疗技术进行临床应用能力技术审核工作。,第7页,对开展分子诊疗检测试验室要求：,试验室流程布局,人员上岗证书,试验室管理（参考,ISO 17025,，,10,章,38,款）,规范应该是：试验室验收合格证书,（技术审核汇报）,+卫生行政部门登记（诊疗科目）,第8页,第二部分,开展分子诊疗检测包括主要设备,第9页,主要设备,（,5.5,检验,过程）,1,、核酸提取仪,2,、,PCR,（,1,）普通,PCR,仪,（,2,）实时荧光,PCR,仪,（,3,）液体芯片,3,、杂交仪,4,、基因芯片,5,、一体化,/,工作站,6,、测序仪,第10页,辅助设备（,5.2,设施和环境条件,）,1,、加样器,2,、金属浴,3,、离心机,4,、冰箱,5,、生物安全柜,6,、,UPS,7,、纯水器（能除,RNA,酶）,第11页,第三部分,ISO15189,在,分子诊疗,领域应用说明,介绍：,5.2,、,5.3,、,5.5,及附录,第12页,医学试验室质量和能力认可准则在,分子诊疗,领域应用说明,CNAS-CL36,年,4,月,21,日第一次修订，,年,11,月,1,日实施,第13页,1,范围,本文件要求了,CNAS,对分子诊疗领域认可要求，包含：,病原体核酸和人体基因等领域包括核酸扩增试验、杂交试验（包含解剖病理中原位杂交试验）、核酸电泳分析等,。,注：“分子诊疗”包含检验医学领域“分子检验”以及病理学检验领域“分子病理”。,2,规范性引用文件,以下文件对于本文件应用是必不可少。凡是注日期引用文件仅注日期版本适合用于本文件。凡是不注日期引用文件，其最新版本（包含修改单）适合用于本文件。,GB/T 20468-,临床试验室定量测定室内质量控制指南,CNAS-RL02,能力验证规则,CNSA-CL31,内部校准要求,临床技术操作规范,病理学分册,医疗机构临床基因扩增检验试验室工作导则,病理科建设与管理指南（试行），卫办医政发,31,号,3,术语和定义,第14页,标本接收与处理：流程和标本是否合格关键点,试剂耗材质检：为何要质检、怎样做,核酸提取：原理和操作技术要领,防污染：办法和意识,质量控制：程序和实际运行情况、失控分析处理,结果分析与判断：结果审核、汇报发放,评审中考评主要内容,第15页,5.2,设施和环境条件,5.2.1,应实施安全风险评定，假如设置了不一样控制区域，应制订针对性防护办法及适当警告。,5.2.2包括基因扩增检验试验室标准上分四个独立工作区域：试剂贮存和准备区；样品制备区；扩增区；扩增产物分析区。如使用自动分析仪（扩增产物闭管检测），扩增区和扩增产物分析区可合并。详细试验室分区应依据其所使用技术平台及检验项目和工作量而定。,上述每个区域应有充分空间以确保：,样品处置符合分析前、后样品分区放置；,仪器放置符合维修和操作要求；,样品制备区放置生物安全柜、离心机和冰箱等仪器设备,；,打印检验汇报时交叉污染控制。,第16页,5.2,设施和环境条件,工作区域应符合以下要求：,c,）试验室各分区应配置固定和移动紫外线灯，波长为,254nm,，照射时离试验台高度普通为,60,90cm,；,e,）样品制备区应配置二级生物安全柜和洗眼器，试验室附近应有喷淋装置。,全部分子病理试验室均应设置独立标本前处理区，包含切片区和脱蜡区，用于组织切片、脱蜡、水化、染色等。脱蜡、水化及染色应在通风设施中进行。,第17页,5.2,设施和环境条件,5.2.3,用以保留临床样品和试剂设施应设置目标温度和允许范围，并统计。试验室应有温度失控时处理办法并统计。,5.2.6,不一样试验区域应该有其各自清洁用具以预防交叉污染。工作结束后应马上对工作区进行清洁，必要时进行消毒及去污染。,应依据所用分析设备和试验过程要求，制订环境温湿度控制要求并统计。应有温湿度失控时处理办法并统计。,扩增仪应配置不间断电源（,UPS,）应依据用途（如：,RNA,检测用水），制订适宜水质标准（如：应除,RNase,），并定时检测。,分子检验各工作区域应有明确标识。进入基因扩增试验室各工作区应按照单一方向进行，即试剂贮存和准备区,样品制备区,扩增区,扩增产物分析区。不一样工作区域宜使用不一样工作服（如不一样颜色）。工作人员离开各工作区域时，不应将工作服带出。,第18页,5.3,试验室设备、试剂和耗材,5.3.1.1,如从事,RNA,检测，宜配置,70,冷冻设备。,需要时，配置,高速冷冻离心机,。标本制备区使用一次性加样器吸头应带有滤芯。,PCR,试验用容器应可密闭，不一样工作区域内设备、物品不能混用。,组织标本前处理区设备通常应包含切片机、裱片机、切片刀、电热恒温箱、脱蜡缸、水化缸及,HE,染色缸等。,第19页,5.3,试验室设备,5.3.1.4,应按国家法规要求对强检设备进行检定。应进行外部校准设备，假如符合检测目标和要求，可按制造商校准程序进行。应最少对分析设备加样系统、检测系统和温控系统进行校准（适用时）。分析设备和辅助设备内部校准应符合,CNAS-CL 31,内部校准要求。,ABI 5700,FAM/SYBR Green I,，,VIC/JOE,，,NED/TAMRA/Cy3,，,ROX/Texas-Red,和,Cy5,应定时对基因扩增仪、加样器、温度计、恒温设备、离心机和生物安全柜等进行校准。,第20页样本升降温速率,：快速模式：,1.6-,0.8,/,秒,标准模式：,1.6,/,秒,加热块最高升降温速率,：,2.5,/,秒,温度范围,：,4-100,温度精度,：设置值,/,显示温度,0.25(35,至,95)(,时钟开启后,3,分钟开始测量,),温度均一性,：,0.5(35,至,95)(,时钟开启后,30,秒开始测量,),光学系统,：五色激发光滤光片，五色发射光滤光片和,CCD,成像系统,安装时已校准染料,：,SYBR,Green I,，,FAM,，,VIC,，,JOE,，,NED,，,TAMRA,，,ROX,，,Texas,Red,，,Cy3,，,Cy5,。,被动参考染料,：,ROX,第21页,5.3,试验室设备,5.3.1.5,设备故障后，应首先分析故障原因，假如设备故障可能影响了方法学性能，故障修复后，可经过以下适当方式进行相关检测、验证：,(a),可校准项目实施校准验证，必要时，实施校准；,(b),质控物检验；,(c),与其它仪器或方法比对，偏差符合附录,A.3,要求；,(d),以前检验过样品再检验，偏差符合附录,A.5,要求。,第22页,5.3,试验室设备,5.3.2.1,试验室应建立试剂和关键耗材（如离心管、带滤芯吸头）验收程序，对应程序中应有明确判断符合性方法和质量标准（宜参考附录,A,）。,5.3.2.3,试验室应对新批号或同一批号不一样货运号试剂和关键耗材进行验收，验收试验最少应包含：,外观检验,：肉眼可看出，如包装完整性、使用期等；,性能验证,：经过试验才能判断，如试剂核酸提取效率和核酸扩增效率、试剂批间差异、关键耗材抑制物等。,第23页,5.3,试验室设备,试剂性能验证统计应能反应,该,批试剂核酸,提取效率,和核酸,扩增效率,。普通情况下，临床试验室在新批号试剂或关键耗材使用前，应验证试剂批间差异和耗材抑制物，符合附录,A.6,要求即可视为满足要求。特殊情况下，如试验室怀疑提取试剂有质量问题，可采取凝胶电泳试验比较核酸提取物与核酸标准物确认核酸片段提取完整性、,260nm,紫外波长测定确认核酸提取产率、,260nm/280nm,比值确认核酸提取纯度。,第24页,靶核酸提取质量,纯化靶核酸完整性：,可使用凝胶电泳将样本核酸提取物与一核酸标准比较测定。,核酸提取产率：,可在,A260,读数测定。,核酸纯度：,可经过提取物,A260/A280,比率判定,血清或血浆中病原体核酸纯化纯度：,采取一个间接方法，即使用已知病原体含量溶血和,/,或脂血标本用待评价试剂提取，然后进行扩增检测，比较所得到结果。,第25页,用于定性检验试剂，选择阴性和弱阳性样品进行试剂批号验证。,用于定量检验试剂，应进行新旧试剂批间差异验证，方法和要求参考附录,A.6,要求。,耗材抑制物验收：对关键耗材应检测是否存在核酸扩增抑制物，方法和要求参考附录,A.6,要求。,5.3,试验室设备,第26页,试剂质检,强调采取,患者,标本进行试剂质检意义：,PCR,试验时两个关键步骤,：,（,1,）,从标本中提取核酸；,（,2,）提取核酸扩增。,商品化质控品和标准曲线结果良好，并非能反应提取试剂质量。,第27页,推荐试剂质检方案,标本选择：,普通选择已用老试剂测定过患者标本,5,份，其中一份阴性，其余,4,份普通要尽可能涵盖高、中、低、临界等浓度差。,结果判断：,用新试剂重复测定上述,5,份标本，计算偏差,(%),；判断标准,(,依据试验室室内质控,RCV,和能力验证允许总误差,TEa),；关注临界值和高值！,第28页,5.5,检验,过程,5.5.1.2,定量检测方法和程序分析性能验证内容最少应包含精密度、正确度、线性、测量和,/,或可汇报范围、抗干扰能力等。定性检测项目验证内容最少应包含测定下限、特异性、准确度（方法学比较或与金标准比较）、抗干扰能力等。验证结果应经过授权人审核。,应使用验证过核酸抽提和纯化方法，必要时进行核酸定量。,第29页,对产前检验，在完成份子诊疗前应保留备份培养物并跟踪监测试验准确性；在检验胎儿标本前，应检验父母一方或双方突变状态，宜由同一试验室检验；如有足够标本，应从两份不一样标本中提取,DNA,进行双份检验。试验室应了解检验方法受母体细胞污染影响，应有程序评定并降低这种影响。,应有明确和统一原位杂交（,ISH,）阳性信号标准，并建立本试验室阳性阈值。组织病理,ISH,，应结合组织形态进行结果判读，并采取国际通用评分标准。,5.5,检验,过程,第30页,5.6,检验,结果,质量确保,5.6.2.1,总则,应制订室内质量控制程序，定量测定可参考,GB/T 20468-,临床试验室定量测定室内质量控制指南。质量控制程序中应有针对核酸检测防污染详细办法。,应保留,DNA,质量评价统计,。需要时，应对,RNA,质量进行评价，并选择适当“管家”,mRNA,作为内对照以评价所提取,RNA,完整性，并保留,RNA,质量评价统计及假阴性率监测统计。,对用于基因突变检测石蜡包埋样品，应有病理医师从组织形态学对,肿瘤细胞存在是否及其数量进行评价,，并决定是否需要对肿瘤细胞进行富集。,当分子诊疗结果与临床和其它试验结果不符时，应统计并分析原因，适当初采取纠正办法。,第31页,5.6,检验,结果,质量确保,5.6.2.2,质控物,定性检测项目,，每次试验应设置阴性、弱阳性和,/,或阳性质控物。如为基因突变、基因多态性或基因型检测，则应包含最能反应检测情况突变或基因型样品，每批检测质控最少应有一个基因突变或基因型。,定量检测项目,，每次试验应设置阴性、弱阳性和阳性质控物。,第32页,5.6,检验,结果,质量确保,5.6.2.3,质控数据,质控规则应确保试验稳定性和检验结果可靠性。,定量检测项目,：,控图应包含质控结果、质控物名称、浓度、批号和使用期、质控图中心线和控制界限、分析仪器名称和唯一标识、方法学名称、检验项目名称、试剂和校准物批号、每个数据点日期和时间、干扰行为统计、质控人员及审核人员签字、失控时分析处理程序和纠正办法等。,定性检测项目,：阴阳性符合预期。,第33页,5.6,检验,结果,质量确保,5.6.3.2,经过与其它试验室（如已获认可试验室、使用相同检测方法试验室、使用配套系统试验室）比正确方式确定检验结果可接收性时，应满足以下要求：,（,a,）,要求比对试验室选择标准；,（,b,）,样品数量：最少,5,份，包含正常和异常水平或不一样常见基因突变或基因型；,（,c,）,频率：最少每年,2,次；,（,d,）判定标准：应有,80%,结果符合要求。,第34页,5.6,检验,结果,质量确保,5.6.4,试验室使用两套及以上检测系统检测同一项目时，应有比对数据表明其检测结果一致性，比对频次每年最少,1,次，样品数量不少于,20,，浓度水平应覆盖测量区间；应定时（最少每年,1,次，每次最少,5,份临床样品）进行检验人员结果比对、考评并统计。比对结果应符合附录,A,要求。,使用不一样生物参考区间检测系统间不宜进行比对。,比对统计应由试验室责任人审核并签字，并应保留最少,2,年。,第35页,普通核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出原理,核酸分离纯化,靶核酸提取质量,临床标本及核酸提取中可能存在抑制和干扰物质,核酸样本制备及扩增检测质控,产物检测质控,核酸样本制备、扩增检测及其质量控制,第36页,普通核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出原理,靶核酸能够与宿主细胞整合，核内游离及胞浆内各种构形存在于细胞内，如测定是病原微生物,则靶核酸存在于细菌、病毒、原虫或真菌细胞内，假如上述细胞破裂,则靶核酸亦可存在于细胞外。,普通均使用去垢剂,(,如,Triton-100),裂解细胞，用一个蛋白裂解酶,(,如蛋白酶,K),消化结合于核酸蛋白质，从而将靶核酸从细胞内释放出来。,第37页,核酸分离纯化,核酸分离纯化就是要将蛋白、脂类等干扰核酸扩增物质去除。,经典方法,硅吸附法,磁珠吸附法,对于商品核酸提取试剂盒，临床试验室在使用前，必须对其核酸提取纯度和效率进行评价。,第38页,临床标本及核酸提取中可能存在抑制和干扰物质,临床标本中：,血清或血浆中血红素及其代谢产物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份、降解靶核酸核酸酶等。,核酸提取中：,许多试剂如乙二胺四乙酸,(EDTA),、去垢剂如十二烷基硫酸盐,(SDS),和,chaotrope,试剂如异硫氰酸胍和盐酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有机溶剂。,第39页,试验室质量控制方案,试验室应有室内质控方案和室间质评计划,1.,室内质量控制标准操作程序；,阳性对照、阴性对照、试剂空白对照、,阳性（临界值）对照,2.,试验室应参加,EQA,。,失控结果分析，纠正办法及其效果评价等。,第40页,质控物质量确保,无商品化质控物时，可采取自制质控物。,质控物评价：均一性、瓶间差、稳定性等。,理想质控物：,基质与待测样本一致；,所含待测物浓度靠近试验决定性水平；,稳定；,靶值或预期结果已定；,无已知生物传染危险性；,单批可大量取得；,价廉。,第41页,定量,PCR,试验,HCV-RNA,使用,GBW09151,标准物质验证准确性，定值,1.090.2710,5,IU/ml,，,实测,0.7910,5,IU/ml,，,偏差,27.5%,，,超出定值范围，未进行处理,（,5.6.3,）。,不符合项案例,第42页,直接计算：偏差,=,（,1.09-0.79,）,10,5,/1.09105,100%=27.5%,（同不符合项）；,不过，取对数计算：,log 1.0910,5,=5.0374,；,log 0.7910,5,=4.8976,；,偏差,=,（,5.0374-4.8976,）,/5.0374100%=2.78%,。,即：直接用,IU/ml,计算为,27.5%,（数值较大），取对数后为,2.78%,（数值较小）。,假定一个样品靶值为,110,4,，,假如检测结果为,110,3,，则（,110,3,-110,4,）,/110,4,=0.9=90%;,假如检测结果为,110,5,，则（,110,5,-110,4,）,/110,4,=9=900%,。,取对数计算：,log 110,3,=3,，,og 110,4,=4,，,log 11 0,5,=5,，则（,4-3,）,/4=0.25=25%,（非,90%,）,（,4-5,）,/4=-0.25=-25%,（非,900%,）。,以上数听说明，假如直接按,IU/ml,或,copies/ml,绘制质控图或计算,CV%,会造成失真，原因是我们经过体外扩增来推算样本中核酸模板量，但扩增产物是,2N,次方，放大了。这是强调为何要取对数计算原因。,第43页,附录,A,（规范性附录）,分子诊疗项目分析性能标准,A.1,应不低于国家标准、行业标准、地方法规要求。,A.2,自建检测系统不精密度要求：以能力验证,/,室间质评评价界限（靶值,0.4,对数值）作为允许总误差（,TEa,），重复性精密度,3/5TEa,；中间精密度,4/5TEa,。,A.3,设备故障修复后，分析系统比对：,5,份样品，覆盖测量区间，最少,4,份样品测量结果偏倚,7.5%,。,A.4,试验室内分析系统定时比对：样品数,n20,，浓度应覆盖测量区间，计算回归方程，系统误差应,7.5%,。,A.5,留样再测判断标准：按照项目稳定性要求选取最长久限样品，,5,个样品，覆盖测量区间，最少,4,个样品测量结果偏倚,7.5%,。,A.6,试剂批间差异、耗材抑制物验收判断标准：选取,5,个旧批号检测过样品，覆盖测量区间（包含阴性、临界值、低值、中值和高值），最少4,个样品测量结果偏倚,7.5%,，其中阴性和临界值样品必须符合预期。,A.7,没有标准和室间质评要求时，试验室间结果比对合格标准可依据制造商申明性能标准而制订。,第44页,附录,B,（规范性附录）,分子诊疗,领域申请认可项目要求,B.1,以下分子检验项目，每一组项目为完整能力项目，假如试验室开展以下项目组合，则申请该组中任一项目时，应同时申请其它项目（第,3,系列除外，但须最少申请其中,3,项）。同一项目使用不一样仪器,/,方法汇报结果时，全部仪器,/,方法均应申请认可。,1.,肝炎系列：,HBV,、,HCV,（试验室仅开展,1,项者除外）；,2.,优生优育（,TORCH,）系列：,TXORV,、,CMV,、,HSV,；,3.,泌尿生殖道性传输疾病病原体系列：,CT,、,NG,、,UU,、,HPV,、,HSV,、,TP,。,B.2,分子病理检测项目，最少应申请以下任意两个系列，每个系列最少申请一项。同一项目使用不一样仪器,/,方法汇报结果时，全部仪器,/,方法均应申请认可。,1.,突变检测：,EGFR,、,KRAS,、,BRAF,、,C-KIT,、,PDGFRA,等；,2.,扩增系列：,Her-2,等；,3.,易位：,EWS,、,Bcl-2,、,C-MYC,、,Bcl-6,、,ALK,等；,4.,基因重排：,IGH,、,IGK,、,IGL,、,TCR,等。,第45页,第四部分,ISO15189,对分子诊疗设备性能要求,第46页,检验过程,5.5,5.5.1,检验程序,选择、验证和确认,5.5.1.1,总则,试验室应选择,预期用途,经过确认检验程序。,每一检验程序要求要求（性能特征）应与该检验预期用途相关。,首选,程序能够是体外诊疗医疗器械使用说明中要求程序，或公认,/,权威教科书、经同行审议过文章或杂志发表，或国际公认标准或指南中，或国家、地域法规中程序。,1.,筛查：灵敏度,2.,确认：特异性,3.,治疗：定量,第47页,预期用途：,筛查、确认、定性、定量、诊疗和治疗,1.,筛查：,灵敏度高、快速和方便（如,POCT,）。,确认：,特异性好,。,诊疗和治疗：定量准确,、测量区间宽、检测限（如超敏方法，要关注最低检出限、线性、测量区间等性能参数）。,试验室应有项目性能特征清单！,第48页,预期用途,第49页,预期用途,Procleix Ultrio Assay*,是一个体外核酸定性检测系统，,用于,筛查,来自人类血浆样本中人类免疫缺点病毒,型（,HIV-1,）,RNA,、丙型肝炎病毒（,HCV,）,RNA,和乙型肝炎病毒（,HBV,）,DNA,。本试剂盒可用于检测单份血浆样本，也可用于检测由不超出,16,个单份血浆样本等量混合后人血浆混合物。,此检测,不能用于帮助,诊疗,HIV-1,、,HCV,或,HBV,感染。,第50页,预期用途,第51页,INTENDED USE,The ARCHITECT HBsAg assay is a chemiluminescent microparticle immunoassay(CMIA)for the,quantitative,（定量）,determination of hepatitis B surface antigen(HBsAg)in human serum and plasma.,HBsAg assays are routinely used,to aid in the diagnosis,（辅助诊疗）,of suspected hepatitis B viral(HBV)infection and to monitor the status of infected individuals,i.e.,whether the patients infection has resolved or the patient has become a chronic carrier of the virus.,预期用途,第52页,预期用途,第53页,INTENDED USE,The ARCHITECT HBsAg Qualitative II assay is a chemiluminescent microparticle immunoassay(CMIA),for the,qualitative,detection,of hepatitis B surface antigen(HBsAg)in human serum and plasma.,The ARCHITECT HBsAg Qualitative II assay,is intended to be used as an aid in the diagnosis of HBV infection and as a screening test for donated blood and plasma.,HBsAg assays are used,to,identify,persons infected with HBV,and to prevent transmission of the virus by blood and blood products as well as to monitor the status of infected individuals in combination with other hepatitis B serological markers.In most countries,testing for HBsAg is part of the antenatal screening program to identify HBV infected mothers and to prevent perinatal HBV infection by subsequent immunization.,预期用途,第54页,预期用途,第55页,预期用途,INTENDED USE,AxSYM Anti-HCV(hepatitis C virus)is a Microparticle Enzyme Immunoassay(MEIA)for the qualitative detection of anti-HCV IgG to HCV recombinant proteins in human serum or plasma(potassium EDTA,sodium EDTA,sodium heparin,lithium heparin,sodium citrate and potassium oxalate).,Assay results,in conjunction with other laboratory results and clinical information,may,be used to,provide presumptive evidence,of infection with HCV virus,(state of infection or associated disease not determined)in persons with signs or symptoms of hepatitis and in persons at risk for hepatitis C infection.,WARNING:,Not intended for use in screening blood,plasma,or tissue donors.,The effectiveness of AxSYM Anti-HCV for use in screening blood,plasma,or tissue donors has not been established.,Assay performance characteristics have not been established for prenatal screening or testing a pediatric population less than 10 years of age.,第56页,检验程序,验证,(,Verification,),未经修改而使用已确认检验程序在常规使用前，应经过试验室独立验证。,应从制造商或方法开发者处取得相关信息，以确定检验程序性能特征。,进行独立验证，应经过获取客观证据（,以性能特征形式,）证实检验程序性能与其申明相符。验证过程证实检验程序性能指标，应与检验结果预期用途相关。,应将验证程序制订成文件，并统计验证结果。验证结果应由适当授权人员审核并统计审核过程。,第57页,试验室应对以下起源检验程序进行确认：,（,a,）非,标方法；,（,b,）试验室设计或制订方法；,（,c,）超出预期范围使用标准方法,；,（,d,）修改过确实认方法,。,方法确认应尽可能全方面，并经过客观证据（,以性能特征形式）,证实满足检验预期用途特定要求。,应将确认程序制订成文件，并统计确认结果。确认结果应由授权人员审核并统计审核过程。,当对确认过检验程序进行变更时，应将改变所引发影响形成文件，适当初，应重新进行确认。,检验程序,确认,(,Validation,),第58页,测量正确度,(,measurement,trueness),：,测量准确度,(,measurement accuracy,),：,测量,精密度（含测量重复性和测量中间,精密度,measurement precision,，,including measurement repeatability and measurement intermediate precision,）,：,测量不确定度,(,measurement uncertainty,),：,分析,特异度（含干扰,物,analytical,specificity,including interfering substances,）,；,分析灵敏度,(,analytical sensitivity,),：,检出限,(,detection limit,),：,定量限,(,quantitation limit,),：,测量区间,(,measuring interval,),：,诊疗,特异,度,(,diagnostic specificity,),：,诊疗灵敏度,(,diagnostic sensitivity,),：,第59页,测量正确度,(measurement trueness),：,无穷屡次重复测量所得量值平均值与一个参考量值间一致程度。,注,1,：测量正确度不是一个量，不能用数值表示。,注,2,：测量正确度与系统测量误差相关，与随机测量误差无关。,注,3,：术语“测量正确度不能用“测量准确度”表示。反之亦然。,第60页,测量准确度,(measurement accuracy),：,被测量测得值与其真值间一致程度。,注,1,：概念“测量准确度”不是一个量，不给出有数字量值。当测量提供较小测量误差时就说该测量是较准确。,注,2,：术语“测量准确度”不应与“测量正确度”、“测量精密度”相混同，尽管它与这两个概念相关。,注,3,：测量准确度有时被了解为赋予被测量测得值之间一致程度。,第61页,正确度验证方法,-,溯源性,方法类：,1,、,决定性,方法：,与决定性,方法检测结果进行比较而建立,；,2,、参考方法：,与,参考方法检测结果进行比较而建立,；,3,、常规方法：与已建立可比性方法进行结果比较而验证,。,物质类：,1,、标准物质：,检测有证书说明其材料特征适当参考物质,；,2,、校准品：,由供给商或制造商提供溯源性，应相关于试剂、程序或检验系统溯源性申明文件,；,3,、质控品：,经,PT,，,EQA,，,CAP,等活动使用过质控品,。,第62页,第五部分,ISO15189,对分子诊疗检测系统完整性要求,第63页,ABI ViiA7,ABI7500,LC480,CFX96,Mx3000p,Slan96P,激发光源,卤钨灯,卤钨灯,氙灯,LED,卤钨灯,LED,检测器,CCD,成像系统,CCD,成像系统,CCD,成像系统,光敏二极管,光电倍增管,光电传感器,检测通道,6,个,5,个,6,个,5,个,4-5,个,4,个,激发波长,450-670nm,400-660nm,430-630nm,450-730nm,350-750nm,通道,1,：,470nm,通道,2,：,530nm,通道,3,：,580nm,通道,4,：,630nm,检测波长,500-720nm,500-660nm,430-630nm,450-730nm,350-750nm,通道,1,：,510nm,；通道,2,：,565nm,；通道,3,：,620nm,；通道,4,：,665nm,支持荧光染料,FAM,、,SYBR,、,SYTO9(MeltDoctor,),、,Fluorescein,、,SYPROOrange,、,VIC,、,JOE,、,TET,、,HEX,、,TAMRA,、,NED,、,BODIPY TMR-X,、,ROX,、,Texas Red,、,LIZ,、,Alexa Fluor,、,Joda-4,FAM/SYBR Green,、,VIC/JOE,、,NED/TAMRA/Cy3,、,ROX/Texas Red,、,Cy5,等，软件支持,ROX,校正去除误差,LightCycler Cyan 500,、,YBR Green I,、,FAM,、,HEX,、,VIC,、,LightCycler Red 610,、,LightCycler Red 640,、,Cy5FAM,、,SYBR,、,HEX/JOE,、,ROX,、,Cy5,、,TAMRA,等,SYBR Green I,、,FAM,、,Texas Red,、,ROX,、,TET,、,Cy3,、,C y5,、,HEX,、,JOE,、,VIC,、,TAMRA,、,ALEXA Fluor 350,等,通道,1,：,FAM/SYBR green I,；,通道,2,：,VIC/HEX/TET/JOE,；通道,3,：,Texas Red/ROX,；通道,4,：,Cy5,国内外主流荧光定量,PCR,仪器情况介绍,第64页,国内市场上主要使用乙肝试剂情况,圣湘,罗氏,达安,科华,凯杰,方法学,一步法,磁珠法,磁珠法,煮沸法,柱提法,煮沸法,煮沸法,目标基因检测荧光,FAM,FAM,FAM,FAM,FAM,FAM,FAM,内标检测荧光,HEX,HEX,VIC,无,VIC,无,VIC,灵敏度（,IU/ml,）,100,10,19,500,100,500,500,线性范围（,IU/ml,）,5005,10,9,202,10,9,201.710,8,1,10,3,1,10,8,250,5,10,8,500,1,10,8,1,10,3,5,10,7,重复性,好,好,好,较差,普通,较差,较差,抗干扰能力,较强,强,较强,普通,普通,普通,普通,ROX,荧光校正,有,有,无,无,无,无,有,操作简便性,简便,普通自动化，复杂,普通,复杂,普通,普通,第65页,圣湘,达安,科华,凯杰,方法学,磁珠法,酚,-,氯仿抽提法,柱提法,柱提法,目标基因检测荧光,FAM,FAM,FAM,FAM,内标检测荧光,HEX,无,无,VIC,灵敏度（,IU/ml,）,25,定性检测,500,1000,线性范围（,IU/ml,）,501,10,8,定性检测,1,10,3,1,10,7,1,10,3,1,10,7,重复性,好,较差,普通,普通,抗干扰能力,强,弱,普通,普通,ROX,荧光校正,有,无,无,有,操作简便性,简便,复杂,复杂,复杂,国内市场上主要使用丙肝试剂情况,第66页,医学试验室量值溯源要求,CNAS,认可检