干扰素释放试验ppt.ppt

PPD试验的不足，目前多个国试验的不足，目前多个国家已将其用于诊断家已将其用于诊断MTBMTB潜伏感染潜伏感染(1atent(1atent tuberculosis infectiontuberculosis infection，LTBI)LTBI)，我国部分医院也已，我国部分医院也已常规开展此项检测常规开展此项检测IGRAs通过检测全血或分离自全血的单核细胞在MTB特异性抗原刺激下产生的干扰素，判断受试者是否感染MTB再次遇到同类抗原时可产干扰素受到MTB抗原刺激致敏的T细胞 目前国际上较成熟的目前国际上较成熟的IGRAsIGRAs有有2 2种：种：(1)(1)全血法全血法：采用酶联免疫吸附试验：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)(ELISA)检测全血中致敏检测全血中致敏T T细胞细胞再次受到再次受到MTBMTB特异性抗原刺激后释放的特异性抗原刺激后释放的1 1干扰素水平，称之为干扰素水平，称之为全血检测全血检测或结核感染或结核感染T T细胞免疫检测；细胞免疫检测；(2)(2)细胞法细胞法：采用酶联免疫斑点技：采用酶联免疫斑点技(ellzymelinkedimmunospot assay(ellzymelinkedimmunospot assay，ELISPOT)ELISPOT)测定在测定在MTBMTB特异性抗原刺激下，外周血单个核细胞中能特异性抗原刺激下，外周血单个核细胞中能够释放够释放1 1一干扰素的效应一干扰素的效应T T细数量，称之为细数量，称之为细胞检测细胞检测或结核感染或结核感染T T细胞检测。细胞检测。上述上述2 2种检测方法的原理类似，检测技术和操作程序略有不同，均种检测方法的原理类似，检测技术和操作程序略有不同，均采用采用MTBMTB的的RDlRDl区基因编码抗原多肽作为特异性抗原，主要相对区基因编码抗原多肽作为特异性抗原，主要相对分子质量为分子质量为6 0006 000的早期分泌抗原靶的早期分泌抗原靶(ESAT-6(ESAT-6)和相对分子质量为和相对分子质量为10 10 000000的培养滤液蛋白的培养滤液蛋白(CFPCFP一一1010)抗原或抗原多肽抗原或抗原多肽T-SPOTT-SPOTT-SPOTT-SPOT试验试验试验试验干扰素干扰素检测阴性检测阴性干扰素干扰素检测阳性检测阳性TB抗原多肽T细胞活化T细胞 干扰素30IGRAs的结核特异免疫抗原 SAT-6SAT-6和和CFPCFP一一1010主要存在于主要存在于MTBMTB复合群复合群，而在，而在卡介苗卡介苗和和大多数大多数NTMNTM中缺失，因此中缺失，因此IGRAsIGRAs的特异度较好。的特异度较好。但但ESAT-6ESAT-6和和CFP10CFP10也也存在于少数几种存在于少数几种NTMNTM中中，如堪，如堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、转黄萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、转黄分枝杆菌和胃分枝杆，故分枝杆菌和胃分枝杆，故IGRAsIGRAs阳性不能排除上述几阳性不能排除上述几种种NTMNTM感染的可能感染的可能。PPD试验与IGRAs的对比 PPDPPD试验作为诊断试验作为诊断MTBMTB感染的传统方法，具有操作简便、成本低廉的特感染的传统方法，具有操作简便、成本低廉的特 点，至今仍广泛使用，但该方法使用的点，至今仍广泛使用，但该方法使用的PPDPPD抗原成分复杂抗原成分复杂，易受卡介苗，易受卡介苗接种和非结核分枝杆菌接种和非结核分枝杆菌(nontuberculosismyeobacterium(nontuberculosismyeobacterium，NTM)NTM)的影响，特的影响，特异度较低，且对人免疫缺陷病毒异度较低，且对人免疫缺陷病毒(HIV)(HIV)感染及重症疾病患者等感染及重症疾病患者等免疫功能受免疫功能受损人群的敏感度不足。损人群的敏感度不足。荟萃分析结果显示，在荟萃分析结果显示，在HIVHIV感染人群中，感染人群中，IGRAsIGRAs的敏感度并未高于的敏感度并未高于PPDPPD试试验，但验，但IGRAs(IGRAs(尤其是细胞检测尤其是细胞检测)受受CD4+TCD4+T细胞数量的影响小于细胞数量的影响小于PPDPPD试验，试验，这可能因为这可能因为IGRAsIGRAs检测过程已对单个核细胞数量进行了标准化，即在检检测过程已对单个核细胞数量进行了标准化，即在检测程序上消除了淋巴细胞数量减少对检测结果的影响测程序上消除了淋巴细胞数量减少对检测结果的影响PPD阳性对以下情况无法区分卡介苗预防接种卡介苗预防接种 非结核分枝杆菌感染非结核分枝杆菌感染 LIBILIBI 活跃结核病活跃结核病 结核病治愈、自愈后结核病治愈、自愈后 IGRAs阳性卡介苗预防接种卡介苗预防接种 大多数非结核分枝杆菌感染大多数非结核分枝杆菌感染 LIBILIBI 活跃结核病活跃结核病 结核病治愈、自愈后结核病治愈、自愈后 20102010年年 全国结核病流行病抽样调查全国结核病流行病抽样调查 结核分枝杆菌复合群结核分枝杆菌复合群 77.1%77.1%，非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌22.9%22.9%20102010年广州结核病流行病抽样调查：非结核分枝杆菌年广州结核病流行病抽样调查：非结核分枝杆菌19.3%19.3%，且，且其中其中前前5 5位位IGRAsIGRAs为阴性为阴性的的IGRAs的敏感性和特异性美国美国FDAFDA认证临床实验数据：认证临床实验数据：经培养确诊的结核病患者样本经培养确诊的结核病患者样本183183例例敏感性敏感性95.6%95.6%（175183175183）306306例入伍新兵例入伍新兵特异性特异性97.1%97.1%（297 306297 306）对活动性结核病的辅助诊断：对活动性结核病的辅助诊断：PPDPPD试验和试验和IGRAsIGRAs均无法均无法区分区分LTBILTBI和活动性结核病患者。国内和活动性结核病患者。国内IGRAsIGRAs的研究数的研究数据显示其敏感度和特异度差别较大，敏感度为据显示其敏感度和特异度差别较大，敏感度为5353一一9898，特异度为，特异度为60609090(或以上或以上)，但多数文献报道，但多数文献报道的敏感度和特异度的敏感度和特异度7070，提示，提示IGRAsIGRAs的特异度优于的特异度优于PPDPPD试验试验。IGRA用于诊断肺结核：深圳第三人民医院的结果例数例数（n）ELISPOT(+)n (%)结核患者24461846（75.47）急性播散型肺结核5851（87.93）继发性肺结核18381389（75.97）结核性胸膜炎538428（79.55）结核性脑膜炎5940（67.80）其他肺外结核356275（77.25）陈旧性肺结核5624（42.86）健康对照42265（14.20）新发肺结核密切接触者384136（35.4）IGRAs检测活动性结核病的敏感度高于TSTIGRAs敏感性还未高到阴性可以排除结核病的程度存在假阴性，阴性并不能排除结核病IGRAs检测结核疑似病例的特异性不高IGRAs不能区分活动性肺结核和潜伏期结核感染（阳性不一定是活动性肺结核）存在假阴性，阴性并不能排除结核病IGRAs阳性时不能肯定诊断，阴性时不能排除诊断WHO不推荐中、低收入国家在诊断活跃结核感染时使用IGRAs中国的国情适用IGRAs吗？中国结核病发病率高WHO不推荐中、低收入国家在诊断活跃结核感染时使用IGRAsY-干扰素释放试验在中国应用的建议我国一方面是结核病高负担国家，但又与低收入国家在结核病控制经费投入、结核病流行特点、卡介苗接种以及NTM感染等方面存在显著不同IGRAs可以有考虑到我国肺结核患者中菌阴肺结核所占比例较高，在诊断这类患者缺乏细菌学依据时，IGRAs可发挥其辅助作用应用于活动性结核病的辅助诊断应用于LTBI诊断中IGRAs用于体液或组织标本？近几年来国内有近几年来国内有IGRAs(IGRAs(仅限于仅限于ELISPOTELISPOT方法方法)辅助诊断辅助诊断结核性胸膜炎和结核性腹膜炎等肺外结核的报道，结核性胸膜炎和结核性腹膜炎等肺外结核的报道，其其中采用胸腔积液和腹水等体液或组织标本检测的中采用胸腔积液和腹水等体液或组织标本检测的IGRAsIGRAs的敏感度和特异度高达的敏感度和特异度高达9090以上以上，采用血液标，采用血液标本检测时本检测时IGRAsIGRAs则并未显示出优势。则并未显示出优势。此类研究此类研究报道数量不多，病例数也不足报道数量不多，病例数也不足，且且国家食品药品监督管理总局批准的国家食品药品监督管理总局批准的IGRAsIGRAs仅限于血仅限于血液样液样本的检测本的检测，即，即IGRAsIGRAs对体液或组织标本的研究尚未经过充对体液或组织标本的研究尚未经过充分验证分验证，不能得出可靠的结论。，不能得出可靠的结论。IGRAs对儿童结核病的辅助诊断 儿童结核病的儿童结核病的临床症状不典型临床症状不典型，重症及肺外结核病比，重症及肺外结核病比例较高，且例较高，且结核病患儿的细菌载量低结核病患儿的细菌载量低，咳嗽反射和气，咳嗽反射和气管纤毛运动能力差，管纤毛运动能力差，病原学检查阳性率很低病原学检查阳性率很低，PPDPPD试试验和验和IGRAsIGRAs联合诊断有一定的辅助作用。联合诊断有一定的辅助作用。IGRAs在LTBI诊断中的应用1活动性肺结核患者密切接触者和医务工作者中LTBI的诊断2IGRAs在HIV感染等免疫抑制或缺陷患者LTBI诊断中的应用活动性肺结核患者密切接触者和医务工作者中LTBI的诊断 1.PPD 1.PPD试验和试验和IGRAsIGRAs均可用于均可用于LTBILTBI的诊断和追踪，若考的诊断和追踪，若考虑到虑到PPDPPD试验检测结果可能受卡介苗接种或试验检测结果可能受卡介苗接种或NTMNTM影响时，可影响时，可对对PPDPPD试验阳性者进一步采用试验阳性者进一步采用IGRAsIGRAs帮助确认帮助确认；(2)(2)不宜采用不宜采用IGRAsIGRAs对大范围人群进行对大范围人群进行LTBILTBI筛查；筛查；(3)PPD3)PPD试验试验仍是在健康人群中动态仍是在健康人群中动态筛查筛查LTBILTBI的首选的首选。(1)(1)对对HIVHIV感染人群进行感染人群进行LTBILTBI筛查，单用筛查，单用PPDPPD试验的敏试验的敏感度不高，应单用感度不高，应单用IGRAsIGRAs或联合使用或联合使用PPDPPD试验，在方法试验，在方法选择上优先考虑细胞检测技术。选择上优先考虑细胞检测技术。(2)(2)自身免疫性疾病和器官移植患者在接受糖皮质激素自身免疫性疾病和器官移植患者在接受糖皮质激素或或TNF-TNF-拮抗剂治疗前，应单用拮抗剂治疗前，应单用IGRAsIGRAs或联合使用或联合使用PPDPPD试验试验筛查筛查LTBILTBI。除除HIVHIV感染者外，类风湿关节炎等自身免疫性疾病、器官移植等感染者外，类风湿关节炎等自身免疫性疾病、器官移植等免疫功能受损患者及糖尿病等特殊患者，因其免疫功能受损患者及糖尿病等特殊患者，因其自身原因自身原因，或接受，或接受糖皮质激素或肿瘤坏死因子糖皮质激素或肿瘤坏死因子 TNFTNF拮抗剂等拮抗剂等免疫抑制药物治疗免疫抑制药物治疗导致导致免疫功能缺陷免疫功能缺陷，这类患者是，这类患者是LTBILTBI发展为结核病的高风险人群，对发展为结核病的高风险人群，对这类患者也有必要进行这类患者也有必要进行LTBILTBI筛查。筛查。应行IGRAs和PPD检测的6种情况WHO 2015）HIVHIV阳性者阳性者 肺结核病人的接触者肺结核病人的接触者 拟进行抗拟进行抗TNFTNF治疗的患者治疗的患者 拟透析的患者拟透析的患者 拟行器官及造血细胞移植者拟行器官及造血细胞移植者 矽肺患者矽肺患者结语(1)IGRAs(1)IGRAs可用于诊断可用于诊断MTBMTB感染，但不能区分活动性结核病和感染，但不能区分活动性结核病和LTBILTBI，也不能准确预测，也不能准确预测LTBILTBI发展为活动性结核病的风险发展为活动性结核病的风险(2)IGRAs(2)IGRAs对疑似结核病患者具有辅助诊断作用，对疑似结核病患者具有辅助诊断作用，IGRAsIGRAs阴性阴性结果对排除结果对排除MTBMTB感染有一定帮助感染有一定帮助(3)IGRAs(3)IGRAs用于筛查用于筛查LTBILTBI时不受卡介苗接种的影响，较少受到时不受卡介苗接种的影响，较少受到NTMNTM感染的影响，但感染的影响，但IGRAsIGRAs不适用于流行病学筛查不适用于流行病学筛查(4)IGRAs(4)IGRAs在在HIVHIV感染人群中筛查感染人群中筛查LTBILTBI的敏感度优于的敏感度优于PPDPPD试验，试验，但在其他人群中的检测效率尚需进一步研究。但在其他人群中的检测效率尚需进一步研究。Thank youThank you