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对艾弗里实验表述的质疑.doc

1、对艾弗里实验表述的质疑             要讲DNA是主要的遗传物质了 。集备时, 组里老师讨论后感觉有困惑。教材叙述:艾弗里及其同事对S型细菌中的物质进行了提纯和鉴定。他们将提纯的DNA、蛋白质和多糖等物质分别加入到培养了R型细菌的培养基中,结果发现:只有加入DNA,R型细菌才能转化为S型细菌,并且DNA的纯度越高,转化就越有效;也就是只有DNA才与转化相关,且DNA纯度与转化成正相关。由此提出不同与当时大多数科学家观点的结论:DNA才是使R型细菌产生稳定遗传变化的物质。    按照教材所述,哪怕纯度不够,当时人们也没有怀疑蛋白质起作用的必要了,因为艾弗里及其同事已经用实验排除了啊

2、是当时的科学工作者死板吗? 读了刘永生老师的博文才知道,不是当时的科学家死板,也不是我们理解能力太差,而是教材的问题。    刘永生: 人教版高中生物课标教材(以下均简称“课标教材”)对艾弗里实验的表述,不符合生物科学发展的史实。 1 Avery实验简介 Avery等在1944年发表了《Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal Types: Induction of transformation by a desoxyribonucleic aci

3、d fraction isolated from pneumococcus type Ⅲ》(以下简称“论文”)。论文第一次用实验表明了DNA是遗传物质。让我们先简单回顾论文所述的实验过程。       1.1 “转化因子”的纯化[1]   1.1.1 原始材料:离心得到S型肺炎双球菌(Streptococcus pneumoniae)。将离心得到的S型细菌加热杀死。 1.1.2 从原始材料获得具有转化活性的提取液:用氯化钠溶液洗原始材料。将清洗后的原始材料置于含脱氧胆酸钠的氯化钠溶液中,振荡,离心去除细胞,得到S型细菌的粗提取液。向粗提取液中添加无水酒精,析出纤维状物质。将纤维状物质

4、再溶于氯化钠溶液中,得到S型细菌的提取液(具有转化活性)。 1.1.3 去除提取液中的蛋白质和多糖:使用Sevag法去除提取液中的蛋白质。使用酶去除提取液中的荚膜多糖。再次使用Sevag法去除提取液中的蛋白质。向提取液中添加无水酒精,析出纤维状物质(具有转化活性)。 通过以上步骤,Avery等得到了具有转化活性的纯化的“转化因子”。 1.2 纯化“转化因子”的鉴定[1] 1.2.1 纯化的转化因子与双缩脲试剂和米龙氏试剂反应均为阴性,与二苯胺试剂反应为阳性。 1.2.2 纯化的转化因子中N/P值和DNA中N/P值相近。 1.2.3经纯化的胰蛋白酶、糜蛋白酶、核糖核酸酶处理后,纯

5、化的转化因子仍具有转化活性;经未纯化的DNase处理后,转化因子失去转化活性。 1.2.4 免疫分析表明:纯化的转化因子既不与肺炎双球菌蛋白抗体反应,也不与荚膜多糖抗体反应。 1.2.5 超高速离心与电泳的结果均表明,纯化的转化因子成分均一,紫外吸收峰在260nm(和核酸相同)。 根据上述结果,Avery等推断转化因子是DNA。 1.3 转化因子是DNA的最终证明[2] 1946年,Avery等获得了DNase,经DNase处理后的转化因子丧失了转化活性,由此确定了转化因子是DNA。 2 课标教材对Avery实验的表述[3] 为了弄清楚转化因子,艾弗里及其同事对S型细菌中

6、的物质进行了提纯和鉴定。他们将提纯的DNA、蛋白质和多糖等物质分别加入到培养了R型细菌的培养基中,结果发现:只有加入DNA,R型细菌才能转化为S型细菌,并且DNA的纯度越高,转化就越有效;如果用DNA酶分解从S型细菌中提取的DNA,就不能使R型细菌发生转化。 3 课标教材对Avery实验的表述不符合生物科学发展史实 3.1 课标教材的表述误解了Avery实验的设计思路 Avery实验的思路是:先纯化转化因子,然后对纯化的转化因子进行鉴定。这在论文中已经明确指出:The major interest has centered in attempts to isolate the a

7、ctive principle from crude bacterial extracts and to identify if possible its chemical nature or at least to characterize it sufficiently to place it in a general group of known chemical substances.(关注焦点放在了:从细菌粗提液中分离出具有转化活性的物质;我们期望能够对这种物质进行鉴定,或者至少获得足够的关于该物质的描述性信息,从而将其归属于某类已知的化学物质。) Avery原始实验抓住了转化因子

8、具有转化活性这一核心功能。首先明确S型细菌的粗提取液具有转化能力,然后通过一定的方法逐步去除粗提取液中的某种成分。如果去除某种成分后丧失转化能力,则去除的成分是转化必需成分;如果去除某种成分后仍保持转化能力,则去除的成分是转化非必需成分。不断地去除转化非必需成分,实质上就是在不断地纯化转化因子。得到纯化的“转化因子”后,Avery等再对转化因子进行鉴定。 与Avery等整体上把握转化因子的转化活性不同,课标教材对Avery实验的表述是一种简单的还原论,即强调对S型细菌的各种成分进行分析。如采用课标教材所述的实验思路,Avery等不但需要分离、提纯转化因子,还需要分离提纯非转化因子。 3

9、2 课标教材的表述不符合Avery的实际工作 依据课标教材的表述,Avery等需要对S型细菌的各种成分进行分离提纯。 1994年McCarty(Avery的同事,1944年论文的三作者之一)指出[4]:他们曾经怀疑具有转化能力的纤维状物质是多糖(因为免疫学检测到多糖抗体反应)。1943年的一次实验中,纤维状物质经过分解荚膜多糖的酶处理后,检测不到多糖抗体反应,仍具有转化能力,Avery等据此排除了多糖是转化因子的可能。由此可见,Avery等并未对S型细菌的荚膜多糖进行分离、提纯。 以上分析表明,课标教材对Avery实验的表述和科学史实不符。 除人教版高中生物课标教材外,国内其它版本教

10、材也存在对艾弗里实验表述的误解。 《普通高中生物课程标准(实验)》指出,科学是一个发展的过程。学习生物科学史能使学生沿着科学家探索生物世界的道路,理解科学的本质和科学研究的方法,学习科学家献身科学的精神。因此,生物科学史对培养学生的生物科学素养有着重要意义。Avery实验作为生物科学史的重要事件,在编入教材时,理应尽量忠于史实,实事求是。考虑到教材的科普性质,教材编写时可对原始实验进行重写,但应该保留原始实验的思路。   参考文献 [1]Avery O.T., MacLeod C.M., McCarty M.: Studies on the chemical nature of the

11、 substance inducing transformation of pneumococcal types: Induction of transformation by a desoxyribonucleic acid fraction isolated from pneumococcus type Ⅲ. J. Exp. Med., 1944,79:137~158. [2] McCarty M. & Avery O. T.:Studies of the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumo

12、coccal types II. Effect of desoxyribonuclease on the biological activity of the transforming substance. J. Exp. Med.,1946,83: 89~96. [3]人民教育出版社,课程教材研究所,生物课程教材研究开发中心:普通高中课程标准实验教科书生物②必修《遗传与进化》.北京:人民教育出版社,2007:43~44. [4] McCarty M.: A Retrospective Look: How We Identified the Pneumococcal Transforming Substance as DNA. J. Exp. Med., 1994,179:385~394.

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