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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。,一,、微生物在传统发酵技术中应用,项目,内容,果酒,果醋,腐乳制作,泡菜制作,菌种,原理,酵母菌（兼性厌氧）,毛霉（好氧）,乳酸菌,（厌氧）,醋酸菌（好氧）,温度,考点探源,1/28,2,(,江苏,，,21),以下关于制作果酒、果醋和腐乳,叙述，合理是,(,),。,A,在果酒发酵后期拧开瓶盖间隔时间可延长,B,条件适宜时醋酸菌可将葡萄汁中糖分解成醋酸,C,果酒发酵过程中发酵液密度会逐步减,大,D,将长满毛霉豆腐装瓶腌制时，底层和近瓶口处需加,大用盐量,AB,2/28,下列图所表示是果酒和果醋制作试验流程以及某同学设计果酒和果醋发酵装置。依据图示回答以下问题。,(1),完成图,1,中制作流程。,醋酸发酵,(2),图,2,装置中充气口在,_,过程中要关闭，某同学在试验时,为了密闭装置特意将瓶塞使劲塞紧，并将充气口和排气口用夹子夹,紧，方便于发酵。但第二天观察时，发觉瓶塞松了，他不明白其中,原因，请帮助解释说明其原因。,_,_,。,酒精发酵,酵母菌进行无氧呼吸产生二氧化碳使瓶中气体压强增大,3/28,(4),在醋酸发酵时，排气口排出气体起源是,_,。,(5),若在果汁中含有醋酸菌，在酒精发酵旺盛时期，醋酸菌能否将果汁中糖发酵为醋酸？说明理由。,_,。,剩下空气、,醋酸菌有氧呼吸产生二氧化碳,不能。因为酒精发酵时缺氧，会抑制醋酸菌生长，,醋酸菌发酵条件是氧气充分,4/28,二,、微生物基本技术,1,制备培养基,：计算,称量,溶化,灭菌,倒平板。,(1),无菌技术,：主要指消毒和灭菌。,(2),倒平板操作,：待培养基冷却至,50,左右时，在酒精灯火焰旁倒平板。,5/28,尤其提醒,平板冷凝后，培养皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发；又能够预防培养皿盖上水珠落入培养基，造成污染。,6/282.,平板划线操作注意事项,(1),每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。,(2),灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免,温度太高杀死菌种。,(3),划线时最终一区域不要与第一区域相连。,(4),划线用力大小要适当，预防用力过大将培养基,划破。,4,平板划线操作：平板划线法是经过接种环在琼脂固体培养基,表面连续划线操作，将聚集菌种逐步稀释分散到培养基表面。,7/28,5,稀释涂布平板法,：先将菌液进行,一系列梯度稀释,后涂布平板，在稀释度足够高菌液里，聚集在一起微生物将被分散到培养基表面，从而在培养基表面形成,单个菌落,。如图：,8/28,A,将少许干酵母加入到新鲜葡萄汁中,B,将毛霉菌液接种在切成小块鲜豆腐上,C,将转基因植物叶片接种到无菌培养基上,D,将土壤浸出液涂布在无菌选择培养基上,3,(,北京卷,，,5),高中生物学试验中，在接种时不进行严格,无菌操作对试验结果影响最大一项是,(,),。,C,9/28,二、某种微生物分离与计数,1,分离,选择培养基,2,计数,(1),土壤中分解尿素细菌分离与计数。,筛选菌株：利用选择培养基筛选菌株。,计数方法：活菌计数法和显微镜直接计数法。,过程：土壤取样,样品稀释,微生物培养与观察。,10/28,(2),分解纤维素微生物分离。,试验原理,即：可依据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。,流程：土壤取样选择培养梯度稀释涂布平板挑选菌落。,11/28,3,判定方法,判定分解尿,素细菌,含酚红指示剂尿素为唯一氮源培养基细菌指示剂变红，则该菌能分解尿素,判定纤维素,分解菌,12/28,尤其提醒,平板划线法适合用于微生物纯化，但不能用于微生物计数。,稀释涂布平板法惯用于活菌计数法，而显微镜直接计数法不能区分细菌死活。,土壤中纤维素分解菌筛选流程中,“,选择培养,”,是否需要，应依据样品中目标菌株数量多少来确定。,13/28,【,例,】从自然菌样筛选较理想生产菌种普通步骤是：采集菌样,富集培养,纯种分离,性能测定。,(1),不一样微生物生存环境不一样，取得理想微生物第一步是从适合环境采集菌样，然后再按一定方法分离、纯化。培养嗜盐菌菌样应从,_,环境采集。,(2),富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长特定环境条件，使其在群落中数量大大增加，从而分离出所需微生物培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物富集培养应选择,_,培养基，并在,_,条件下培养。,海滩等高盐,以淀粉为唯一碳源,高温,14/28,(3),下面两图是采取纯化微生物培养两种接种方法接种后培养效果图解，请分析接种详细方法。,取得图,A,效果接种方法是,_,，取得图,B,效果接种方法是,_,。,(4),接种前要进行,_,，在整个微生物分离和培养中，一定要注意在,_,条件下进行。,稀释涂布平板法,平板划线法,高压蒸汽灭菌,无菌,15/28,破题关键,16/28,一、酶研究及应用,1.,酶活性（酶活力）测定普通原理和方法,酶活性（酶活力）通常以单位时间内底物消耗量或者在单位时间内,产物生成量来表示。,考点探源,17/28,2.,纤维素酶与果胶酶,组成,纤维素酶,C,1,酶,C,X,酶,葡萄糖苷酶,果胶酶,多聚半乳糖醛、酸酶、果胶分解酶果胶酯酶,均为一类酶,18/28,3.,制备和应用固定化酶、固定化细胞,（,1,）直接使用酶、固定化酶和固定化细胞差异,直接使用酶,固定化酶,固定化细胞,酶种类,一个或几个,一个,一系列酶,惯用载体,明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺等,惯用方法,包埋法、化学结正当、物理吸附法,包埋法,营养物质,不需要,不需要,需要,化学反应,一个或几个,一个,一系列,19/28,底物,各种物质,各种物质,能进入载体小分子物质,优点,效率高、耗能低、无污染,可回收重复使用,成本低、易操作，可催化一系列化学反应,缺点,环境原因影响大，酶难以回收利用,不利于催化一系列化学反应,反应物与细胞内酶不轻易接触，催化效率下降,20/28,关键步骤,（,2,）制备固定化酵母细胞,固定酵母细胞方法：包埋法。步骤以下：,酵母细胞活化：酵母菌,吸水,，由休眠状态恢复为正常状态。,配制,CaCl,2,溶液：,CaCl,2,溶液用于增强凝胶珠强度,配制海藻,酸钠溶液,小火间断加热，预防海藻酸钠焦糊。,浓度适宜，确保凝胶珠成型且能固定。,海藻酸钠溶液,与酵母细胞混合,a.,海藻酸钠溶液冷却至室温，防,止,过热杀死酵母细胞。,b.,酵母细胞与海藻酸钠充分混合。,固定化酵母细胞：将海藻酸钠酵母细胞混合液滴到,CaCl,2,溶液,中。,21/28,二、,DNA,和蛋白质技术,1.DNA,粗提取和判定方法,（,1,）材料选取：选取,DNA,含量相对较高生物组织。,（,2,）破碎细胞,动物红细胞，,吸水破裂,。,植物细胞：,加入洗涤剂、食盐后研磨,。,（,3,）除去杂质方法,方法一：利用,DNA,在不一样浓度,NaCl,溶液中溶解度不,同，经过调整,NaCl,溶液浓度除去溶于和不溶于,NaCl,溶液,中杂质。,22/28,方法二：利用,DNA,对酶耐受性，直接在滤液中加入嫩肉粉，反应,10,15 min,，嫩肉粉中,木瓜蛋白酶,能够分解蛋白质，而不会破坏,DNA,。,（,3,）,DNA,析出：向处理后滤液中加入与滤液体积相等、,冷却酒精溶液,（体积分数为,95%,），静置,2,3 min,，溶液中会出现白色丝状物，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物。,（,4,）,DNA,判定：在,沸水浴,条件下，,DNA,遇,二苯胺,会被染成,蓝色,。,23/28,（,1,）样品预处理及粗分离,血红蛋白提取和分离,24/28,25/28,2.纯化：凝胶色谱法和电泳法,凝胶色谱法原理,相对分子质量大,相对分子质量小,运动路径,从凝胶颗粒间隙向下移动,从凝胶颗粒内部空隙向下移动,运动旅程,较短,较长,移动速度,较快,较慢,洗脱次序,先从凝胶柱洗脱出来,后从凝胶柱洗脱出来,电泳法原理：利用各种分子带电性质、分子大小，形状不一样，实现分离,26/28,A.,洗涤剂能瓦解细胞膜并增加,DNA,在,NaCl,溶液中溶解度,B.,将,DNA,丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝,C.,常温下菜花匀浆中有些酶类会影响,DNA,提取,D.,用玻璃棒迟缓搅拌滤液会造成,DNA,取得量降低,高考经典,1.,（,江苏,，,18,）以下关于,“DNA,粗提取与判定试验”叙,述，正确是,（）。,C,27/28,2.,（,广东理综,，,5,）以下关于猪血红蛋白提纯描述,，,不,正确是,（）。,A.,洗涤红细胞时，使用生理盐水可预防红细胞破裂,B.,猪成熟红细胞中缺乏细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少,C.,血红蛋白颜色可用于凝胶色谱法分离过程监测,D.,在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小杂蛋,白移动慢,D,28/28,