一种显著提高实验用斑马鱼繁殖效率和使用寿命的优化养殖方案.pdf

Jun.2023,43(3)DOl:10.12300/j.issn.1674-5817.2023.004一种显著提高实验用斑马鱼繁殖效率和使用寿命的优化养殖方案金仕容，华叶，皆化星，杜旭飞，卜纪雯1.中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心(原中国科学院上海生命科学院神经科学研究所),全脑介观神经联接图谱研究平台（斑马鱼)，上海2 0 0 0 31；2.中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心(原中国科学院上海生命科学院神经科学研究所),感觉整合与行为研究组，上海2 0 0 0 31)摘要目的解决实验用斑马鱼出现的生长发育滞后、产卵量不足等问题，以提高实验用斑马鱼的繁殖效率和使用寿命。方法取受精后2 月龄的斑马鱼，以投喂商品化的观赏鱼专用颗粒饲料或冰冻成体卤虫为实验组，以投喂活的幼体卤虫为对照组。不同饵料投喂7 0 d内，通过测量体长和体重评估斑马鱼生长性能，通过统计产卵量和产卵率等评估斑马鱼繁殖性能。对甲状腺肿大病症明显的斑马鱼投喂颗粒饲料，通过测量其甲状腺肿大病灶直径大小变化评估颗粒饲料对该病症的抑制效果。将3种饲料配合使用，对饲养方案进行优化，通过繁殖性能测试验证其用于斑马鱼饲养的实际效果。结果从6 0 dpf开始投喂颗粒饲料直到111dpf，颗粒饲料组的体长、体重均日渐优于对照组（P0.0001)。从6 0 dpf开始投喂成体卤虫直到96 dpf，成体卤虫组的体长增长趋势与对照组基本相同，而7 582dpf时成体卤虫组的雌鱼体重极明显高于对照组的雌鱼（P0.0001)。成体卤虫组斑马鱼相比于对照组，雌雄间体色差异显著，在7 5dpf时，已可以通过体色差异准确区分性别；而且成体卤虫组斑马鱼3月龄时产卵率显著高于对照组（94.44%vs27.78%，P 0.0 5）。另外，投喂颗粒饲料130 d后，所有实验用斑马鱼的甲状腺肿大病灶均消失。根据以上结果，将3种饲料组合，优化大于2 月龄的斑马鱼饲养方案为上午保持喂食幼体卤虫，下午用颗粒饲料和成体卤虫交替投喂，直至12 月龄斑马鱼的产卵率可以保持7 0%，产卵量达到（2 33.6+3.9 5）颗，受精率和孵化率分别为97.47%和90.2 4%，均显著高于原方案饲养组（P0.001或P=0.01)。结论相比幼体卤虫饵料，商品化的颗粒饲料能显著提升斑马鱼的生长性能，并对甲状腺肿大病症有治疗作用，而成体卤虫饵料能显著提高斑马鱼的早期繁殖性能。优化后的饲养方案成功提高了斑马鱼的产卵效率，并延长其繁殖使用寿命，能更好地保障相关科学研究的开展。【关键词】斑马鱼；饲养方案；繁殖性能；生长性能中图分类号】Q95-33【文献标志码】A文章编号】16 7 4-58 17(2 0 2 3)0 3-0 2 97-10AnOptimized ExperimentalSignificantly Enhancing Reproductive Efficiency and Service LifeJIN Shirong,HUA Ye,ZI Huaxing,DU Xufei,BU Jiwen?1.Center for Excellence in Brain Science and Intelligence Technology(linstitute of Neuroscience),Chinese【基金项目】国家重点研发计划“发育编程及其代谢调节 重点专项项目“斑马鱼发育与代谢突变体库的系统创制”（2 0 18 YFA0801000）第一作者】金仕容（1994一），女，硕士，实验师，研究方向：水产养殖。E-mail：18 8 17 7 7 2 7 47 16 3.c o m；华叶(198 3一）,女，硕士，助理研究员，研究方向：斑马鱼早胚发育与精子发生。E-mail:通信作者】卜纪雯（198 2），女，硕士，高级实验师，研究方向：分子发育生物学。E-mail:。O RCID:0 0 0 9-0 0 0 6-0 933-7 314实验动物与比较医学LaboratoryAnimaland ComparativeMedicine卜纪雯，西南大学分子发育生物学硕士。2 0 0 8 年进人中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所（现变更为中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心）工作，2 0 14年被评为高级实验师。2 0 0 5年至今一直从事斑马鱼相关研究和管理工作。工作期间以第二作者在Circulation Research，A n g e w a n d t e C h e m ie I n t e r n a t io n a lEd it io n 等杂志发表合作论文共8 篇。主要擅长的技术有斑马鱼胚胎显微注射、转基因斑马鱼制备、CRISPER/Cas9基因敲除/敲人技术、斑马鱼胚胎移植、斑马鱼胚胎原位杂交、活体斑马鱼长时程共聚焦成像等。在长期的斑马鱼管理工作中，积累了丰富的管理经验，主持开发了斑马鱼房及品系自动化管理系统V1.0软件，于2 0 2 1年获得计算机软件著作权。IZebrafish1Breeding297动物实验技术与方法Animal Experimental Techniques and MethodsSchemefor298Academy of Sciences,Research Platform of Whole Brain Mesoscopic Neural Junction Map(Zebrafish),Shanghai200031,China;2.Center for Excellence in Brain Science and Intelligence Technology(lnstitute of Neuroscience),Chinese Academy of Sciences,Lab of Sensory Integration&Behavior,Shanghai 200031,ChinalCorrespondence to:BU Jiwen(ORCID:0009-0006-0933-7314),E-mail:ABSTRACT Objective To solve the problems of delayed growth and development and insufficientspawning of experimental Zebrafish,so as to improve the reproductive efficiency and service life ofexperimental Zebrafish.Methods The zebrafish at the age of 2 months after fertilization were divided intotwo groups.The experimental group was fed with dry commercial diets specifically designed for ornamentalfish or frozen adult brine shrimp,while control group was fed with live laval brine shrimp.Within a period of70 days,the growth performance of the zebrafish was evaluated by measuring body length and weight,andthe reproductive performance was assessed by measuring the fecundity and spawning rate.Zebrafish withapparent goiter disease were fed with dry commercial diets,and the inhibitory effect of the pellets on thisdisease was evaluated by measuring the diameter of the thyroid enlargement lesion.The three feedingmethods were combined,and the feeding plan was optimized.The actual effects of the plan on zebrafishrearing were validated through reproductive performance tests.Results Starting from 60 days post-fertilization(dpf)until 111 dpf,the body length and weight of the dry commercial diets feed group graduallysurpassed those of control group(all P0.000 1).From 60 dpf to 96 dpf,the growth trend in body length ofthe adult brine shrimp group was similar to that of control group,but the female fish in the adult brineshrimp group had significantly higher body weight than the female fish in control group at 75-82 dpf(P0.00o 1).Compared to control group,there was a significant difference in body color between males andfemales in the adult brine shrimp group,and at 75 dpf,gender could be accurately distinguished by bodycolor differences.Furthermore,the spawning rate of the zebrafish in the adult brine shrimp group at 3months of age was significantly higher than that of control group(94.44%vs.27.78%,P0.05).Additionally,after feeding with the dry commercial diets for 130 days,all thyroid enlargement lesions in theexperimental zebrafish disappeared.Based on the above results,the three feeding methods werecombined and the feeding plan for zebrafish older than 2 months of age was optimized as follows:feed livebrine shrimp in the morning,and alternate between dry commercial diets and adult brine shrimp in theafternoon.This feeding plan lasts until the age of 12 months.The spawning rate of Zebrafish can maintan70%,and the spawning amount can reach(233.63.95)eggs.The fertilization rate and hatching rate were97.47%and 90.24%,respectively,both significantly higher than those of control group(P0.05，图1AB)。随后，颗粒饲料组斑马鱼的体长和体重持续快速增长，8 9dpf时其体长及体重均极显著高于幼体卤虫组（P0.001，P 0.0 1）（图1AB）。直至实验结束，颗粒饲料组斑马鱼在体长和体重指标上始终极显著高于表1不同饵料营养成分表Table1Nutrition ingredientsof differentdiets幼体卤虫(活)成体卤虫（冻)营养成分需求量Nutrition ingredientsRequirement钙Calcium/%0.9 1.6(斑马鱼)5)磷 Phosphorus/%0.8 1.4(斑马鱼)5)镁Magnesium/(mg.kgl)600 mg/kg(鲤鱼)14)铁 Iron/(mg:kgil)150 mg/kg(鲤鱼)15)硒Selenium/(mg.kgl)0.12 mg/kg(鲤鱼)16 l 锌Zinc/(mg:kgl)15 30 mg/kg(鲤鱼)15)维生素B3VitaminB3/(mgkgl)30 40 mg/kg(鲤鱼)17)维生素C Vitamin C/(mgkgl)30 50 mg/kg(鲤鱼)17)维生素B2 Vitamin B2/(mg.kgl)7 10 mg/kg(鲤鱼)17)颗粒饲料1LarvabrineAdult brmeshrimp(live)shrimp(frozen)未检出未检出0.120.07186102未检出58.50.150.27205.3未检出13350.5102未检出未检出颗粒饲料2Dry commercialDry commercialdiets-1diets-22.312.621.922.22611053605759403.224.55160300未检出未检出100039603884.8Jun.2023,43(3)幼体卤虫组（P0.05)。而从增重效果来看，幼体卤虫组雌鱼增重先慢后快，而成体卤虫组先快后慢，其中成体卤虫组体重在7 2、8 2 dpf极显著高于幼体卤虫组（P0.0001），随后雌性鱼体重增长放缓，在8 9dpf显著高于幼体卤虫组（P0.05），直实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicine301至96 dpf，幼体卤虫组雌鱼和成体卤虫组雌鱼的体重差异缩小（图1D）。相较于雌鱼而言，两个处理组间雄鱼体重增长趋势基本相同，仅7 5dpf时成体卤虫组雄鱼体重显著高于幼体卤虫组（P0.05，图1D)。因此，成体卤虫可显著提高斑马鱼雌鱼早期的体重生长性能。2.3不同饵料对斑马鱼繁殖性能的影响2.3.1雌雄体色差异投喂成体卤虫组斑马鱼相较于幼体卤虫组，体色鲜艳，呈金黄色，雌雄间体色差异显著；在7 5dpf时，已可以通过体色差异，准确区分性别（图2 A）。相较于幼体卤虫组，颗粒饲料组的体色发白，且雌雄个体A4.03.5F3.02.5F2.0FC3.0FB0.4颗粒饲料组Drycommercial diets幼体卤虫组Larva brine shrimp60颗粒饲料组*Dry commercial diets幼体卤虫组Larva brine shrimp0.3*0.20.1F0.0L7582采样时间Samplingtime/dpf*8911160D0.25F0.2075采样时间Samplingtime/dpf*82*89111H成体卤虫组-雄Adult brine shrimp-male幼体卤虫组-雄Larva brine shrimp-male2.5HAdult brine shrimp-female成体卤虫组-雌幼体卤虫组-雕Larva brine shrimp-female6075采样时间Samplingtime/dpf注：每组9条斑马鱼，数据均以平均值+标准差表示。AB为颗粒饲料组和幼体卤虫组斑马鱼的体长（A）和体重（B）变化（与幼体卤虫组相比，*P0.01，*P 0.0 5)。C D 为成体卤虫组和幼体卤虫组雌雄斑马鱼的体长（C）和体重（D）变化（分别与幼体卤虫组雌雄斑马鱼相比，*P0.0001，*P0.0 0 1，P0.0 1，P0.0 5)。d p f，受精后日龄。Note:Data are presented as means+SEM(n=9).A-B are the body length(A)and body weight(B)changes of zebrafish in dry commercialdiets group and larva brine shrimp group(compared with larva brine shrimp group,P0.01,P0.05).C-D are the changes in bodylength(C)and body weight(D)of male and female zebrafish in adult brine shrimp group and larva brine shrimp group(compared withmale and female zebrafish in larval brine shrimp group,*P0.0001,*0.001,*0.01,P0.05).dpf,age after fertilization.图1颗粒饲料和成体卤虫对斑马鱼生长的影响Figure 1 Effects of dry commercial diets and adult brine shrimp on growth of zebrafish0.150.10F8289成体卤虫组-雄Adult brine shrimp-male幼体卤虫组-雄Larva brine shrimp-male成体卤虫组-雕Adult brine shrimp-female幼体卤虫组-雕Larva brine shrimp-female966075采样时间Samplingtime/dpf828996302均较大；但是雌雄体色差别很不明显，至8 9dpf仍难以通过体型、体色很好地区分不同性别（图2 A）。2.3.2繁殖力差异由于颗粒饲料组的斑马鱼雌雄性征不明显，大部分无法正确区分雌雄。为确保繁殖测试正常进行，尽量区分雌雄后，采取2 雌：2 雄进行预实验，结果显示产卵率为8 8%，但单缸产卵量从10 40 0 颗不等，提示雌雄分组不准确，后续无法严格按照1雌：2 雄进行配对繁殖测试。因此，后续仅测量并记录成体卤虫组的繁殖性能指标。图2 B结果显示，成体卤虫组的产卵率明显高于幼体卤虫组，3月龄成体卤虫组的产卵率是幼体卤虫组的A成体卤虫组Adult brine shrimp幼体卤虫组Larvabrine shrimp实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicineJun.2023,43(3)3.5倍，到5月龄时仍存在约1.6 倍的差异。与之相反，5月龄时幼体卤虫组的产卵量显著高于成体卤虫组（P0.05。综上所述，饲喂成体卤虫显著提高了成年斑马鱼的早期繁殖力，但到5月龄时产卵率和产卵量均有所下降，可能提示成体卤虫难以满足实验室斑马鱼需长期保持高产卵率和产卵量的要求。2.4颗粒饲料对斑马鱼其他体征的影响实验选取的甲状腺肿大病鱼初始（记为0 d）病灶直径为0.5 4mm不等。在投喂颗粒饲料30 d后，发现部分具有甲状腺肿大病症的斑马鱼其病灶出现消失或者缩小的趋势；在实验进行130 d后，所有实验用鱼的甲状腺肿大病灶均消失（图3）。这提示颗粒饲料可能有治疗斑马鱼甲状腺肿大的作用。A颗粒饲料组Dry commercial diets234567B25020015000成体卤虫组-3月龄*Adult brine shrimp-3months幼体卤虫组-3月龄Larva brine shrimp-3monthsAdult brineshrimp-5.months成体卤虫组-5月龄幼体卤虫组-5月龄Larva brine shrimp-5monthsB54ns*2产卵率/%Spawning rate注：A，饲喂成体卤虫组、幼体卤虫组或颗粒饲料组斑马鱼的典型外观（雄，雌）。B，饲喂成体卤虫或幼体卤虫组的3月龄和5月龄斑马鱼产卵率、产卵量、受精率和孵化率比较（每组9条斑马鱼，产卵量、受精率和孵化率均以平均值标准差表示，*P0.01。Note:A,the typical appearance of zebrafish(male,female)indry commercial diets group,adult brine shrimp group and larvabrine shrimp group.B is the comparison of spawning rate,spawningamount,fertilization rate and hatching rate of 3-month-old and 5-month-old zebrafish between adult brine shrimp group and larvabrine shrimp group(9 zebrafish in each group.Spawning amount,fertilization rate and hatching rate are presented as means+SEM,*P0.01).图2 不同饲料对斑马鱼繁殖性能的影响Figure 2 Effects of different diets on reproductivecharacteristics ofzebrafish产卵量/颗Fecundity受精率/%Fertilization rate孵化率/%Hatchingrate0-1注：A，甲状腺肿大的斑马鱼外观；B，颗粒饲料喂养后的斑马鱼甲状腺直径变化数据均以平均值标准差表示（n=15，*P 0.0 1，*P0.0001，n s 表示没有统计学差异。Note:A,Appearance of Zebrafish with goiter;B,Changes inthyroid diameter of Zebrafish after dry commercial diets feedingData are presented as means SEM(n=15)*P0.01,*P0.000 1,ns indicated no statistical differencel.图3颗粒饲料对斑马鱼甲状腺肿大病症的影响Figure 3 Effect of dry commercial diets on goiter diseaseofzebrafishAAAAAMMAAAAA030时间Time/d130Jun.2023,43(3)2.5饲养方案优化后斑马鱼繁殖性能提高综合以上结果，将幼体卤虫、颗粒饲料和成体卤虫配合使用，对饲养方案进一步优化。原饲养方案称为Du-Lab Zebs Recipe1.0，新饲养方案称为Du-LabZebsRecipe2.0。如图4所示，原饲养方案在仔鱼期（12 d p f 前）投喂海水轮虫，此后仅投喂幼体卤虫（活）作为唯一食物来源。新饲养方案在仔鱼期（12dpf前）投喂海水轮虫，幼鱼期（12 dpf2 月龄）投喂幼体卤虫，2 月龄后组合喂食，即上午保持喂食幼实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicine303体卤虫，下午用颗粒饲料和成体卤虫交替投喂。测试结果显示，直至12 月龄，新饲养方案组的产卵率为7 0%，高于原饲养方案组的6 4%；产卵量为（2 33.6 0 3.95）颗，极显著高于原饲养方案组的（139.40 9.41）颗（P0.001）；受精率和孵化率分别为9 7.47%和9 0.2 4%，显著高于原饲养方案组的94.92%和7 3.52%（均P=0.01）。这表明，新饲养方案可显著提升斑马鱼的产卵效率，并延长其繁殖使用寿命。0 dpfDu-Lab Zebs无9:00轮虫Recipe 1.0None5dpf1012 dpfRotifer2month9:00幼体卤虫（活）Larva brine shrimp(live)14:00幼体卤虫（活）Larva brine shrimp(live)Du-Lab ZebsRecipe 2.0图4新饲养方案Du-LabZebsRecipe2.0示意图Figure 4 New breeding scheme Du-Lab Zebs Recipe 2.03讨论杜久林研究组斑马鱼房（前身为国家斑马鱼中心，目前改迁至武汉斑马鱼中心）作为国内最早一批以斑马鱼为模式生物的实验室，始终关注实验鱼的质量控制。目前对于斑马鱼幼苗期（515dpf）的养殖方案，国家标准GB/T3964920202】以及国家斑马鱼资源中心均建议投喂草履虫，并且已经建立了一套比较稳定的实验室养殖程序，因此大部分国内斑马鱼养殖实验室均采用草履虫进行投喂。但是，对斑马鱼而言，轮虫相较于草履虫适口性好，营养价值高，稳定性高，且海水轮虫对于淡水斑马鱼养殖引入外源微生物的风险更小。经过长期探索，本实验室已成功解决实验室稳定养殖海水轮虫的技术难题，建立了Du-Lab ZebsRecipe1.0饲养方案，即在仔鱼期（12 dpf前）将饵料由草履虫更换为海水轮虫，此后仅投喂幼体卤虫(活)作为唯一食物来源。本研究旨在继续探索斑马鱼幼鱼期及成鱼期的饵料多样性，以期建立更加科学合理的无9:00轮虫NoneRotifer9:00幼体卤虫（活）Larva brine shrimp(live)14:00幼体卤虫（活）Larva brineshrimp(live)养殖。对于斑马鱼幼鱼期及成鱼期，国家标准及国内外权威机构仅建议可喂食多种食物，但是没有给出明确的饲养方案，因此大部分斑马鱼实验室仅投喂幼体卤虫。本研究中营养成分分析结果表明，单一食物幼体卤虫的营养缺陷明显，仅投喂幼体卤虫不足以提供斑马鱼生长繁殖所需的营养物质。成体卤虫是由卤虫卵孵化出的无节幼体经过几次蜕皮变态发育而成【18 。成体卤虫多为孤雌生殖，雌性卤虫的生殖系统能形成两种类型的卵：冬卵和夏卵。条件差时产冬卵，冬卵又称休眠卵、耐久卵，这就是养殖中所使用的卤虫卵。成体卤虫富含蛋白质和脂肪以及碳水化合物等营养素，是优质天然饵料19。本研究参考价格、使用效果、口碑、销售量等因素，选取了两类商品化的观赏鱼饵料以及成体卤虫（冷冻品）进行营养成分分析，最终确定了颗粒饲料2及成体卤虫进行后续生长繁殖测试。测试结果显示，9:00幼体卤虫（活）Larva brine shrimp(live)14:00颗粒饲料2（周一、三、六）Dry commercial diets-2(Mon,Wed,Sat)成体卤虫（冻）（周二、四、五）Adult brine shrimp(frozen)(Tue,Thu,Fri)斑马鱼饲养方案，以保证实验用斑马鱼的科学健康304颗粒饲料极显著地提高了斑马鱼的生长速率，但是斑马鱼雌雄体色差异和性征不明显，无法开展繁殖测试。此外，颗粒饲料饲养的斑马鱼会出现过度生长、肥胖等营养过剩表型2 0 。据报告，营养过剩对鱼类繁殖性能也有负面影响，例如投喂高n-3高不饱和脂肪酸(n-3 highly unsaturated fatty acids，n-3H U FA）水平的饵料会降低海鲷的总产卵量【2 1。因此，颗粒饲料可以显著提高斑马鱼的生长性能，但无益于甚至减弱生殖性能。体色是动物的基本特征之一，在其生存和繁殖中发挥着重要作用【2 。类胡萝卜素水平是影响鱼类体色的主要因素之一2 3，但是鱼类不能从头合成类胡萝卜素，必须从食物中摄取2 4。本次实验结果显示，在75dpf时，成体卤虫组的斑马鱼体色鲜艳，性征明显，但是颗粒饲料组和幼体卤虫组均体色暗淡，这可能与成体卤虫富含-胡萝卜素有关2 5。成体卤虫组在6 0 dpf8 9d p f 期间，雌鱼的体重显著增加，同时其繁殖力也得到了显著提升。之前的研究表明，当发育到6 0 dpf时，斑马鱼性腺分化结束，卵巢和精巢开始形成，在90 dpf时达到性成熟2 6 。因此，6 0 dpf90dpf是斑马鱼性腺发育成熟的关键时期，在这一时期适当人工添加中链脂肪酸（medium-chainfattyacid，M C FA）和n-3HUFA可以促进斑马鱼雌鱼的繁殖性能和仔鱼成活率的提高2 7 。本研究结果说明，成体卤虫可以满足斑马鱼性腺发育成熟所需的营养，同时提示原饲养方案中幼体卤虫的脂肪酸含量不足，仅投喂幼体卤虫容易导致斑马鱼性腺发育迟缓，性成熟滞后。但是，到繁殖中期（5月龄），成体卤虫组的产卵率下降，而繁殖力受到亲鱼饲料中营养缺乏的影响2 1，这提示长期单一投喂成体卤虫不能满足频繁交配的实验用斑马鱼的营养需求。本研究中还意外地发现，颗粒饲料对于实验室养殖斑马鱼常见病症甲状腺肿大有显著的治愈效果。有研究表明，甲状腺肿大病与斑马鱼在摄食过程中碘离子摄取不足显著相关2 8 ，这说明传统食物幼体卤虫中碘离子缺乏，而颗粒饲料中碘离子含量丰富。综合以上结果可以发现，颗粒饲料和成体卤虫单独饲养对于斑马鱼的生长和发育有利有弊。本研究明确了颗粒饲料可提高斑马鱼的生长性能，而成体卤虫可提高斑马鱼繁殖性能。同时考虑到幼体卤虫价格便宜，易于消化10 ，且活体食物可以刺激斑马鱼的自然进食【2 9。因此，本平台将幼体卤虫、颗粒饲料和成体实验动物与比较医学Laboratory Animal andComparativeMedicine物相关法律法规条例要求进行。All animal experiments involved in this study have beenreviewed and approved by Institutional Animal Care andUse Committee of Center for Excellence in Brain Scienceand Intelligence Technoligy(Institute of Neuroscience)(Approval LetterNA-046-2019).Allexperimentalprocedures were performed in accordance with therequirements of laws and regulations in China related toexperimental animals,including the guidelines such asAnimalManagementRegulations(01/03/2017）,LaboratoryAnimal:Guideline for Ethical Review of AnimalWelfare(GB/T 35892-2018),and so on.作者贡献AuthorContribution金仕容负责方案策划、动物实验及初稿写作；华叶负责实验设计和部分动物实验；皆化星参与文章思路讨论及部分文章内容的撰写和修改；杜旭飞参与文章的整体设计，研究内容的讨论；卜纪雯负责整体研究方案、经费管理和文章审核定稿。利益声明DeclarationofInterest所有作者均声明本文不存在利益冲突。参考文献References1李阔宇,潘鲁援,孙永华.斑马鱼鱼房和养殖系统建设标准J.中国比较医学杂志，2 0 2 0,30(6):12 1-12 7.DOl:10.3969/j.issn.1671-7856.2020.06.018.LI K Y,PAN L Y,SUN Y H.Standards for constructingzebrafish houses and breeding systemsJJ.Chin J Comp Med,Jun.2023,43(3)卤虫三者配合使用，对原有的饲养方案进行优化，满足了提高斑马鱼繁殖能力，延长其使用寿命的科研需求。目前，新饲养方案已经在本实验室稳定投入使用超过2 年，在此期间观察到斑马鱼体长、体重的增长明显优于原饲养方案，同时鱼体颜色鲜艳，雌雄体色差异明显，3月龄均可明确区分雌雄，且再未发现甲状腺肿大病症的鱼体。本研究遵循食物多样性的原则，结合实验结果，对实验室斑马鱼的原饲养方案进行了优化，配合使用多种饵料，成功提高了实验室斑马鱼的繁殖性能，并延长其使用寿命，进而更好地保障科学研究的开展，且实现了可操作性、可坚持性和可推广性的目标。对于特殊科研需求的斑马鱼养殖，笔者建议可以对多种食物进行组合实验，进一步优化饲养方案，更好地为科研工作服务。医学伦理声明MedicalEthicsStatament本研究所涉及的所有动物实验已通过中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心动物管理委员会动物福利伦理审核小组审查批准（NA-046-2019）。所有实验过程均遵照中国实验动Jun.2023,43(3)2020,30(6):121-127.DOl:10.3969/j.issn.1671-7856.2020.06.018.2国家市场监督管理总局，国家标准化管理委员会.实验动物实验鱼质量控制：GB/T396492020S.北京：中国标准出版社，2020.State Administration for Market Regulation,China NationalStandardization Commission.Laboratory animal-Qualitycontrol of laboratory fish:GB/T 396492020 S.Beijing:China Standards Press,2020.3 欧阳娟，薛松磊，徐妍，等.环境因素对丰年虾孵化的影响及孵化条件优化J.中国饲料，2 0 18(18):8 3-8 6.DOl:10.15906/11-2975/s.20181817.OUYANG J,XUE S L,XU Y,et al.The effect of environmentalfactors on the hatching of Artemia salina and theoptimization of hatching conditionsJJ.China Feed,2018(18):83-86.DOl:10.15906/11-2975/s.20181817.4LAWRENCE C.The husbandry of zebrafish(Danio rerio):areviewJ.Aquaculture,2007,269(1-4):1-20.DOl:10.1016/j.aquaculture.2007.04.077.5 祝梅香，王天奇，张长勇，等.实验用斑马鱼剑尾鱼营养需求及饲料现状分析J.中国比较医学杂志,2 0 0 9,19(12):6 1-6 5.DOI:10.3969/j.issn.1671-7856.2009.12.012.ZHU M X,WANG T Q,ZHANG C Y,et al.Nutritionalrequirements and current status of diets of laboratoryzebrafish and swordtailsJ.Chin J Comp Med,2009,19(12):61-65.DOl:10.3969/j.issn.1671-7856.2009.12.012.6SPENCE R,FATEMA M K,ELLIS S,et al.Diet,growth andrecruitment of wild zebrafish