隐丹参酮治疗小鼠非酒精性脂肪性肝病效果及机制研究.pdf

2 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l J o u r n a l基金项目:陕西省重点研发计划项目(2 0 2 2 S F-0 3 8)通讯作者:王 宁,E-m a i l:w a n g n i n g c a r e 1 6 3.c o m隐丹参酮治疗小鼠非酒精性脂肪性肝病效果及机制研究赵梦溪,罗 斌,吕建瑞,王 宁(西安交通大学第二附属医院,陕西 西安7 1 0 0 0 4)摘 要 目的:探讨隐丹参酮对小鼠非酒精性脂肪性肝病的治疗效果及相关机制。方法:将雄性C 5 7 B L/6 J小鼠随机分为正常组、模型组以及隐丹参酮低、中和高剂量组,每组1 0只。造模8周干预4周后,采集小鼠血液检测谷丙转氨酶(A L T)和谷草转氨酶(A S T);行组织病理学染色观察小鼠肝脏组织;检测肝脏组织总胆固醇(T C)、甘油三酯(T G)、高密度脂蛋白胆固醇(HD L-C)、低密度脂蛋白胆固醇(L D L-C)、超氧化物歧化酶(S O D)、丙二醛(MD A)、谷胱甘肽(G S H)、肿瘤坏死因子-(T N F-)、白介素-1(I L-1)和I L-6等指标。W e s t e r nb l o t法检测肉碱棕榈酰转移酶1(C P T 1)、酰基辅酶A氧化酶1(A C OX 1)以及过氧化物酶体增殖物激活受体(P P A R)蛋白表达水平。结果:肝脏组织病理染色结果显示,正常组几乎无脂肪浸润,模型组小鼠肝脏组织存在大量脂肪空泡,隐丹参酮低、中和高剂量组较模型组肝脏组织病变明显改善。与正常组比较,模型组A S T、A L T、T C、T G、L D L-C、TN F-、I L-1、I L-6、MD A水平升高,HD L-C、S O D、G S H水平降低(均P0.0 5)。与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组A L T、A S T、T C、T G、L D L-C、TN F-、I L-1、I L-6、MD A水平降低,HD L-C、S O D、G S H水平升高(均P0.0 5)。与正常组比较,模型组P P A R、C P T 1和A C OX 1蛋白表达水平降低(均P0.0 5)。与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组P P A R、C P T 1和A C O X 1蛋白表达水平升高(均P0.0 5)。结论:隐丹参酮对NA F L D具有治疗作用,能够改善脂质代谢,促进肝脏脂质排出,改善肝功能和减少肝脏脂质沉积,其机制可能与调节脂肪酸-氧化、减轻炎症反应及平衡氧化应激有关。关键词 非酒精性脂肪性肝病;隐丹参酮;脂肪酸-氧化;脂质代谢;氧化应激;炎症反应中图分类号:R5 7 5.5 文献标志码:A D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 0-7 3 7 7.2 0 2 3.0 9.0 0 5E f f e c t a n dm e c h a n i s mo f c r y p t o t a n s h i n o n eo nn o n a l c o h o l i c f a t t y l i v e rd i s e a s e i nm i c eZ HAO M e n g x i,L UOB i n,L YUJ i a n r u i,WANGN i n g(T h eS e c o n dA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fX ia nJ i a o t o n gU n i v e r s i t y,X ia n7 1 0 0 0 4,C h i n a)A B S T R A C T O b j e c t i v e:T o i n v e s t i g a t e t h e t h e r a p e u t i c e f f e c t o f c r y p t o t a n s h i n o n eo nn o n a l c o h o l i c f a t t y l i v e rd i s e a s ei nm i c ea n d i t sm e c h a n i s m.M e t h o d s:T h eC 5 7 B L/6 Jm i c e(m a l e s)w e r ed i v i d e dr a n d o m l yi n t on o r m a lg r o u p,m o d e lg r o u pa n dc r y p t o t a n s h i n o n e l o w-,m e d i u m-a n dh i g h-d o s eg r o u p,1 0m i c ei ne a c hg r o u p.A f t e r8w e e k so fm o d e l i n ga n d4w e e k so f i n t e r v e n t i o n,b l o o ds a m p l e sw e r e c o l l e c t e dt od e t e c tA L Ta n dA S T.T h e i r l i v e rw a s c o l l e c t e d f o r l i v e rh i s t o p a t h o l o g y.M e a n w h i l e,T C,T G,HD L-C,L D L-C,MD A,G S H,S O D,T N F-,I L-1a n dI L-6i nt h e l i v e rw e r ed e-t e c t e d.F i n a l l y,W e s t e r nb l o tw a su s e dt od e t e c t e dt h ee x p r e s s i o nc h a r a c t e r i s t i c so fp e r o x i s o m ep r o l i f e r a t o r-a c t i v a t e dr e c e p t o r(P P A R),c a r n i t i n ep a l m i t o y l t r a n s f e r a s e1(C P T 1)a n da c y lC o Ao x i d a s e1(A C O X 1).R e s u l t s:T h er e-s u l t so fp a t h o l o g i c a l s t a i n i n go f l i v e rt i s s u es h o w e dt h a t t h e r ew a sa l m o s tn of a t t yi n f i l t r a t i o ni nn o r m a lg r o u p,a n dt h e r ew e r ea l o t o f f a t t yv a c u o l e s i n t h e l i v e r t i s s u e o fm o d e l g r o u p;c o m p a r e dw i t hm o d e l g r o u p,t h e c r y p t o t a n s h i n o n el o w-,m e d i u m-a n dh i g h-d o s eg r o u p sh a ds i g n i f i c a n t l y i m p r o v e d l i v e r t i s s u e l e s i o n s.C o m p a r e dw i t hn o r m a l g r o u p,t h el e v e l so fA S T,A L T,T C,T G,L D L-C,TN F-,I L-1,I L-6a n dMD A w e r ei n c r e a s e d,a n dt h el e v e l so fHD L-C,S O Da n dG S H w e r ed e c r e a s e d i nm o d e l g r o u p(a l lP0.0 5).C o m p a r e dw i t hm o d e lg r o u p,t h e l e v e l so fA L T,A S T,T C,T G,L D L-C,T N F-,I L-1,I L-6a n dMD Aw e r ed e c r e a s e d,a n d t h e l e v e l so fHD L-C,S O Da n dG S Hw e r e i n c r e a s e d i nc r y p t o t a n s h i n o n e l o w-,m e d i u m-a n dh i g h-d o s eg r o u p s(a l lP0.0 5).C o m p a r e dw i t hn o r m a lg r o u p,t h ep r o t e i ne x-p r e s s i o n l e v e l so fP P A R,C P T 1a n dA C O X 1i nm o d e lg r o u pw e r ed e c r e a s e d(a l lP0.0 5).C o m p a r e dw i t hm o d e lg r o u p,t h ep r o t e i ne x p r e s s i o nl e v e l so fP P A R,C P T 1a n dA C O X 1w e r e i n c r e a s e d i nc r y p t o t a n s h i n o n e l o w-,m e d i u m-a n dh i g h-d o s eg r o u p s(a l lP0.0 5).C o n c l u s i o n:C r y p t o t a n s h i n o n eh a s t h e r a p e u t i ce f f e c t so nNA F L D,w h i c hc a n i m-p r o v e l i p i dm e t a b o l i s m,p r o m o t el i v e rl i p i de x c r e t i o n,i m p r o v el i v e rf u n c t i o na n dr e d u c el i v e rl i p i dd e p o s i t i o n.T h em e c h a n i s m m a yb er e l a t e dt or e g u l a t i n gf a t t ya c i d-o x i d a t i o n,r e d u c i n gi n f l a mm a t o r yr e s p o n s ea n db a l a n c i n go x i d a-t i v es t r e s s.5311陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l J o u r n a l2 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9K E Y WO R D S N o n a l c o h o l i c f a t t yl i v e rd i s e a s e;C r y p t o t a n s h i n o n e;F a t t ya c i d-o x i d a t i o n;L i p i dm e t a b o l i s m;O x i-d a t i v es t r e s s;I n f l a mm a t o r yr e s p o n s e 非酒精性脂肪性肝病(N o n a l c o h o l i cf a t t yl i v e rd i s e a s e,NA F L D)是临床中较为常见的代谢综合征。近年来,NA F L D的发生率逐渐升高,已经成为人们亚健康状态的疾病之一1。“二次打击”或“多次打击”是NA F L D目前公认的核心发生机制,其本质与肝脏脂质代谢异常密切相关。在脂质代谢过程中,脂肪酸-氧化和-氧化研究最为广泛。脂肪酸-氧化主要涉及肝脏脂肪酸的合成,脂肪酸-氧化主要涉及肝脏脂质的分解代谢2-3。隐丹参酮是一种从丹参酮中获得的有效药理成分单体,具有优秀的抗炎、抗菌及降温能力4。目前,隐丹参酮已经应用于冠心病及肝炎的治疗中5-7,但还没有其用于治疗NA F L D的相关研究。因此,本研究探讨不同剂量隐丹参酮对NA F L D的治疗效果及其作用机制。1 材料与方法1.1 实验动物 选取S P F级雄性C 5 7 B L/6小鼠6 0只,均为6周龄,体重1 82 2g,购自西安交通大学医学部动物实验中心,生产许可证号:S C X K(陕)2 0 2 0-0 0 1。饲养环境由中央空调 统一控制,温 度为2 22 4,湿度4 0%6 0%,光照/黑暗为1 2h/1 2h,自由进食和饮水,适应性喂养1周。本研究获本院实验动物伦理委员会授权。1.2 主要药物与试剂 隐丹参酮(质量分数9 8%,货号:3 5 8 2 5-5 7-1,上海同田生物技术有限公司);1 0%的低脂饲料和4 5%的高脂饲料(江苏美迪森生物医药公司);谷草转氨酶(A S T)、谷丙转氨酶(A L T)、总胆固醇(T C)、甘油三酯(T G)、高密度脂蛋白胆固醇(H D L-C)、低密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇(L D L-C)、超 氧 化 物 歧 化 酶(S O D)、丙二醛(MD A)和谷胱甘肽(G S H)检测试剂盒(货 号:C 0 1 0-2-1、C 0 0 9-2-1、A 1 1 1-1-1、A 1 1 0-1-1、A 1 1 2-1-1、A 1 1 3-1-1、A 0 0 1-3-2、A 0 0 3-1-2、A 0 0 6-1-1,南京建成生物工程研究所);肿瘤坏死因子-(T N F-)、白介素-1(I L-1)和I L-6E L I S A检测试剂盒(货号:C S B-E 0 4 7 4 1 m、C S B-E 0 8 0 5 4 m、C S B-E 0 4 6 3 9 m,武汉华美生物科技有限公司);B C A蛋白定量分析试剂盒(货号:G 2 0 2 6-1 0 0 0 T,武汉赛维尔生物工程有限公司);E C L发光液(货号:3 4 5 7 8,赛默飞世尔 科技中国公司);过氧化物酶体增殖物激活受体(P P A R)、过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1抗体(A C O X 1)(货号:s c-1 3 5 5 1、s c-3 9 8 3 9 4,美国S a n t aC r u zB i c y c l e s公司);肉碱棕榈酰转移酶1(C P T 1)一抗(货号:a b 1 8 9 1 8 2,美国A B C AM公司);辣根过氧化物酶(HR P)标记的二抗(货号:B A 1 0 6 6,武汉博士德生物工程有限公司)。1.3 主 要 仪 器 与 设 备 精 密 电 子 天 平(型 号:WT 2 0 0 0 3型,常州万泰天平仪器有限公司);化学发光成像系统(型号:C h e m i D o cX R S+型,美国B i o-R a dL a b o r a t o r i e s公司);酶标仪(型号:B I O-D L K 3P l u s型,上海素秋仪器设备有限公司);低温高速离心机(型号:MU L T I F UG FX 1 R型,德国H e r a e u s公司);超低温冰箱(型号:MD F-U 5 3 V型,日本三洋公司);组织石蜡包埋机(型号:E S 5 0 0型,美国T h e mF i s h e rS c i e t i f i c公司);冰冻组织切片机(型号:CM1 8 6 0型,德国L e i-c a公司);石蜡切片机(型号:HM3 2 5型,美国T h e mF i s h e rS c i e t i f i c公司);实验室荧光显微镜(型号:F C K-4 0 C型,上海蔡康光学仪器厂);常规垂直电泳仪(型号:M i n i-P R OT E AN型,美国B i o-R a d公司)。1.4 实验方法1.4.1 动物分组与给药:将6 0只小鼠根据随机数字法分为两组,其中正常组1 2只(普通饲料喂养),造模组4 8只(高脂高糖饲料喂养)。8周后,正常组随机处死2只,造模组随机处死8只检验造模是否成功(本研究NA F L D模型均构建成功)。造模成功后,随机将造模组小鼠分为模型组和隐丹参酮低、中和高剂量组,每组1 0只。正常组和模型组给予1m l/(k gd)0.9%氯化钠溶液腹腔注射,隐丹参酮低、中和高剂量组分别给予7.5、1 5、3 0m g/(k gd)隐丹参酮腹腔注射,4周后进行后续实验。1.4.2 实验样本采集:4周后,所有实验小鼠禁食不禁水1 2h,于次日腹腔注射1%戊巴比妥钠1 2m l/k g进行麻醉,麻醉后固定于解剖板,暴露腹腔,找到腹主动脉后用5m l注射器采集小鼠血液。采用低温高速离心机离心血液(3 0 0 0r/m i n离心1 0m i n)并收集血清,保存至超低温冰箱中用于后续检测。此外,收集血液后,快速分离小鼠肝脏组织,将其表面血液处理干净后用于后续HE染色、油红O染色、相应生化指标检测及相关蛋白表达检测。1.4.3 小鼠一般情况记录:在喂养周期内,每日观察记录小鼠的日常活动、毛发特点以及饮食变化量。同时每周称重小鼠1次,同时进行相应的药物计算,以确定每周的给药量。1.4.4 血清A S T和A L T检测:将血清严格按照试剂盒说明书进行检测,得到吸光度值后计算A S T和A L T含量。1.4.5 肝脏组织生化指标检测:称取1 0 0m g肝脏组织,用组织提取液提取并收集上清液,定量并调平后使用相应的试剂盒检测T G、T C、HD L-C、L D L-C、S O D、63112 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l J o u r n a lMD A、G S H、T N F-、I L-1和I L-6。1.4.6 肝脏组织病理学染色:将肝脏组织固定2 47 2h后取出并清洗,用梯度乙醇浸润并脱水,二甲苯溶液处理后采用石蜡包埋法制作石蜡块,并切成35mm薄片。将切片脱蜡处理后进行HE染色,采用光学显微镜收集图像,每张切片选取4个不同视野。将肝脏组织用包埋剂包埋后连续切成厚度为1 0m的薄片,用组织固定液固定1 0m i n后用超纯水洗涤,油红O染色封片后收集图像,每张切片选取4个不同视野。1.4.7 肝脏组织蛋白表达水平检测:称取1 0 0m g肝脏,用组织裂解液裂解后提取上清液,测定蛋白浓度并调平。每组取5 0g进行S D S-P AG E凝胶电泳,电泳条件:8 0V恒压电泳3 0m i n;1 2 0V恒压电泳6 0m i n。电泳结束后,将目的蛋白用半干转移法转移到P V D F膜,选用5%脱脂牛奶进行封闭,一抗过夜孵育、二抗孵育,E C L发光液反应后用凝胶成像仪成像。计算C P T 1、A C O X 1以及P P A R 蛋白的表达水平。1.5 统计学方法 采用S P S S2 3.0统计学软件分析数据,计量资料以(xs)表示,组间比较行t检验或方差分析,P0.0 5为差异有统计学意义。2 结 果2.1 各组小鼠一般情况 正常组小鼠毛色光滑且有光泽,精神活跃。模型组小鼠毛色枯糙暗淡,体重前期增加快,后期增加慢,活动明显减少,且垫料在后期明显潮湿发臭。与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组小鼠一般情况均有好转。2.2 各组小鼠肝脏组织染色结果 见图1。HE染色结果显示:正常组肝脏组织可见完整的小叶结构和均匀分布的肝细胞,肝细胞核多数位于细胞中央,偶尔出现空泡;模型组肝脏组织可见大量脂肪空泡;与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组肝脏组织病变有不同程度好转。油红O染色结果显示:正常组肝脏组织几乎未见脂滴;模型组肝脏组织出现大量脂滴且呈弥漫性分布;与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组脂滴数量均有不同程度降低。图1 各组肝脏组织病理学HE、油红O染色结果(4 0 0)2.3 各组小鼠血清A S T和A L T水平比较 见表1。与正常组比较,模型组小鼠A S T和A L T水平升高(均P0.0 5)。与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组A S T和A L T水平降低(均P0.0 5)。2.4 各组小鼠肝脏组织脂代谢指标比较 见表2。与正常组比较,模型组L D L-C、T G和T C水平升高,HD L-C水平降低(均P0.0 5)。与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组L D L-C、T G和T C水平降低,HD L-C水平增加(均P0.0 5)。表表11 各组小鼠血清A S T和A L T水平比较(U/L)组 别nA S TA L T正常组1 05 6.2 16.5 41 0.2 31.2 8模型组1 07 8.6 51 3.2 5*2 3.4 53.1 4*隐丹参酮低剂量组1 07 0.3 48.7 6#2 0.5 42.9 5#隐丹参酮中剂量组1 06 5.2 31 0.1 4#1 6.7 32.3 7#隐丹参酮高剂量组1 06 0.3 28.0 4#1 0.6 51.9 8#注:与正常组比较,*P0.0 5;与模型组比较,#P0.0 5表表22 各组小鼠肝脏组织脂代谢指标比较(mm o l/L)组 别nHD L-CL D L-CT GT C正常组1 04.3 60.6 50.9 40.2 42.0 10.3 03.0 80.5 4模型组1 02.7 80.4 3*3.8 20.7 1*4.5 20.7 9*7.6 01.1 3*隐丹参酮低剂量组1 03.3 10.5 0#2.4 20.4 2#4.0 60.5 6#6.6 50.9 7#隐丹参酮中剂量组1 03.5 40.3 9#2.1 80.4 0#3.6 00.4 4#5.5 20.6 9#隐丹参酮高剂量组1 03.7 50.4 6#1.5 40.3 6#3.1 50.2 5#4.7 80.5 2#注:与正常组比较,*P0.0 5;与模型组比较,#P0.0 57311陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l J o u r n a l2 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.92.5 各组小鼠肝脏组织氧化应激指标比较 见表3。与正常组比较,模型组S O D和G S H水平降低,MD A水平升高(均P0.0 5)。与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组S O D和G S H水平升高,MD A水平降低(均P0.0 5)。表表33 各组小鼠肝脏组织氧化应激相关指标比较(xs)组 别nMD A(U/m gp r o t)S O D(mm o l/gp r o t)G S H(mm o l/gp r o t)正常组1 07 9.6 51 0.5 66 0.6 78.2 42 9.1 83.6 2模型组1 01 4 5.7 63 0.1 8*3 0.7 33.6 5*1 0.5 01.2 3*隐丹参酮低剂量组1 01 0 0.2 02 0.3 5#3 7.6 54.5 4#1 3.2 11.5 0#隐丹参酮中剂量组1 09 0.4 82 0.3 1#4 0.2 65.3 2#1 6.7 72.2 1#隐丹参酮高剂量组1 08 0.4 61 6.0 9#4 6.7 15.6 0#2 0.2 02.8 8#注:与正常组比较,*P0.0 5;与模型组比较,#P0.0 52.6 各组小鼠肝脏组织炎性指标比较 见表4。与正常组比较,模型组T N F-、I L-1和I L-6水平升高(均P0.0 5)。与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组T N F-、I L-1和I L-6水平下降(均P0.0 5)。2.7 各组小鼠肝脏组织脂肪酸-氧化调节酶表达水平比较 见表5。与正常组比较,模型组肝脏组织中P P A R、C P T 1和A C O X 1表 达 水 平 降 低(均P0.0 5)。与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组肝脏组织中P P A R、C P T 1和A C O X 1表达水平升高(均P0.0 5)。表表44 各组小鼠肝脏组织炎性指标比较(n g/L)组 别nTN F-I L-1I L-6正常组1 06 8 9.4 56 0.3 41 4 0.3 62 0.1 41 8 0.5 02 6.7 8模型组1 01 3 5 6.2 52 0 0.4 5*2 9 0.5 05 0.2 7*4 2 0.3 55 0.3 8*隐丹参酮低剂量组1 09 8 6.4 51 2 5.5 0#2 2 0.4 23 5.3 6#3 3 5.8 22 7.6 5#隐丹参酮中剂量组1 09 0 0.3 59 5.2 6#1 8 0.3 52 0.5 4#2 9 6.5 73 2.5 0#隐丹参酮高剂量组1 08 2 3.5 68 0.4 5#1 6 5.7 82 6.6 8#2 6 0.5 22 8.7 3#注:与正常组比较,*P0.0 5;与模型组比较,#P0.0 5表表55 各组小鼠肝脏组织脂肪酸-氧化调节酶表达水平比较(xs)组 别nP P A R/G A P DHC P T 1/G A P DHA C O X 1/GA P DH正常组1 02.3 70.2 82.0 40.1 91.6 10.1 2模型组1 00.7 80.1 2*0.9 00.1 7*0.3 00.0 8*隐丹参酮低剂量组1 01.1 50.1 0#1.0 20.1 3#0.8 00.1 2#隐丹参酮中剂量组1 01.3 60.1 5#1.3 00.1 3#0.9 50.1 5#隐丹参酮高剂量组1 01.7 20.2 1#1.6 50.2 4#1.3 70.2 1#注:与正常组比较,*P0.0 5;与模型组比较,#P0.0 53 讨 论NA F L D的发生是一个复杂的过程,“二次打击”和(或)“多次打击”学说能够较为全面地阐述本病的发生和发展,是目前国内外相关学者接受度较高的机制学说。两种学说几乎都离不开NA F L D发生的本质,即肝脏的脂肪 变性以及脂 肪细胞在肝 脏中过量蓄积8-9。肝脏脂质的蓄积是NA F L D发展的第一步。相关研究1 0表明,在NA F L D中,肝脏脂质蓄积的主要原因为脂肪生成增加(即脂肪酸-氧化)和肝脏中脂肪酸-氧化减少。脂质长期蓄积可引起肝脏脂质和相关碳水化合物的异常,长期存在可引起肝细胞炎症反应和氧化应激的发生,进而加重NA F L D,导致肝纤维化甚至肝硬化的发生1 1-1 3。因此,目前国内外学者对NA F L D治疗的研究重心转到减少脂质合成或促进脂肪分解代谢两个方面1 4-1 5。本实验重点研究增强脂肪酸-氧化方面。研究1 6表明,中药天然化合物可能能够作为脂肪酸-氧化的靶点。例如,田香1 7分别构建了NA F L D的细胞和动物模型,观察梓醇对N A F L D脂肪酸-氧化信号通路的影响,发现梓醇能够明显调节脂肪酸-氧化83112 0 2 3年9月第5 2卷第9期S e p.2 0 2 3V o l.5 2N o.9陕 西 医 学 杂 志S h a a n x iM e d i c a l J o u r n a l信号通路蛋白A C C、P P A R、C P T 1和A C O X 1等的表达,进而调节肝细胞脂质代谢,减轻肝脏负担,预防脂肪肝。此外,廖文云等1 8构建了NA F L D小鼠模型,发现人参皂苷R g 1对脂肪酸-氧化信号相关蛋白具有明显的调节作用。隐丹参酮是中药丹参的主要成分。由于隐丹参酮在丹 参 中 含 量 较 低,所 以 目 前 缺 少 将 其 用 于 治 疗NA F L D的研究。然而,有较多研究报道1 9-2 1其中药植株及中药提取物对NA F L D有治疗作用。本研究中,肝脏组织HE染色结果显示模型组肝脏组织可见明显的脂肪空泡。与正常组比较,模型组血清A S T和A L T水平升高,肝脏组织L D L-C、T G和T C水平升高,HD L-C水平降低。而给予隐丹参酮治疗后,肝脏组织染色提示,脂肪空泡明显变小且数量减少,脂肪浸润均有不同程度降低。与模型组比较,血清A S T和A L T水平降低,肝脏组织L D L-C、T G和T C水平降低,HD L-C水平升高,证明了隐丹参酮对NA F L D有治疗作用。在 脂 肪 酸-氧 化 过 程 中,P P A R、C P T 1和A C O X 1是其中的三个核心蛋白酶。P P A R 是机体内重要的转录因子,可以控制脂肪酸氧化酶A C O X 1基因表达,通过激活A C O X 1的表达促进脂肪酸的分解,而在此过程中脂肪酸-氧化的关键调节酶和限速酶能够平衡脂肪酸-氧化,维持-氧化的稳态2 2。本研究结果发现,与正常组比较,模型组小鼠P P A R、C P T 1和A C O X 1蛋白表达水平降低,证实NA F L D存在脂肪酸分解异常。采用隐丹参酮治疗后,肝脏组织中P P A R、C P T 1和A C O X 1蛋白表达水平较模型组升高,表明隐丹参酮能够促进肝脏脂肪酸-氧化,进而改善脂肪颗粒在肝脏中蓄积。为准确地评估隐丹参酮对NA F L D的治疗作用,本研究也观察了隐丹参酮对炎症反应和氧化应激相关因子的变化特点。观察这两类指标,主要是因为在NA F L D发生和发展过程中炎症反应和氧化应激参与了“二次打击”或“多次打击”的过程,是NA F L D进展的关键指标2 3。本研究发现,模型组小鼠T N F-、I L-1和I L-6水平显著高于正常组,而氧化应激相关指标中MD A水平较正常组升高,抗氧化应激指标S O D和G S H水平降低。采用隐丹参酮治疗后,T N F-、I L-1、I L-6以及MD A水平较模型组降低,而S O D和G S H水平升高,提示隐丹参酮能改善NA F L D的炎症反应,也能平衡氧化应激,进而保护肝脏。综上所述,隐丹参酮对NA F L D具有治疗作用,能够改善脂质代谢,促进肝脏脂质排出,改善肝功能和减少肝脏脂质沉积,其机制可能与调节脂肪酸-氧化、减轻炎症反应及平衡氧化应激有关,但具体机制仍需后续进一步实验研究。参考文献1 N a s s i rF.NA F L D:M e c h a n i s m s,t r e a t m e n t s,a n db i o m a r k-e r sJ.B i o m o l e c u l e s,2 0 2 2,1 2(6):8 2 4.2 王智勇,宋 凯,郝祥蕊,等.细菌中脂肪酸-氧化途径与机理的研究 进展J.激光 生物 学 报,2 0 2 1,3 0(6):4 9 4-5 0 4.3 杨 婧.银杏内酯B调节长链脂肪酸-氧化相关蛋白表达治疗非酒精性脂肪性肝病机制D.昆明:云南中医药大学,2 0 2 2.4 周 杨.隐丹参酮对脂多糖诱导的B V 2小胶质细胞炎症反应的影响及其机制研究D.蚌埠:蚌埠医学院,2 0 2 0.5 谢 嵩,于宗琴,徐济萍.隐丹参酮对小鼠肝微粒体内阿司匹林酯酶活性的影响J.中国医院药学杂志,2 0 1 4,3 4(2):9 4-9 7.6 秦 魏,邢 露,杨智慧,等.丹参活性成分在抗动脉粥样硬化中的作用与机制研究进展J.陕西中医,2 0 2 1,4 2(7):9 7 7-9 7 9.7 刘新叶,李 勇,杨东伟.盾叶冠心宁联合丹参酮治疗冠状动脉粥样硬化疗效及对患者左室功能的影响J.陕西中医,2 0 1 9,4 0(5):5 8 4-5 8 6.8 S a l v o z aN,G i r a u d iP J,T i r i b e l l iC,e t a l.N a t u r a lc o m p o u n d sf o r c o u n t e r a c t i n gn o n a l c o h o l i c f a t t y l i v e r d i s e a s e(NA F L D):A d v a n t a g e sa n dl i m i t a t i o n so ft h es u g g e s t e dc a n d i d a t e sJ.I n t JM o lS c i,2 0 2 2,2 3(5):2 7 6 4.9 P a l m aR,P r o n i oA,R o m e o M,e t a l.T h er o l eo f i n s u l i nr e s i s t a n c e i nf u e l i n gNA F L Dp a t h o g e n e s i s:F r o m m o l e c u-l a rm e c h a n i s m st oc l i n i c a l i m p l i c a t i o n sJ.JC l i n M e d,2 0 2 2,1 1(1 3):3 6 4 9.1 0 T a r g h e rG,B y r n eC D,T i l gH.N A F L Da n d i n c r e a s e dr i s ko fc a r d i o v a s c u l a rd i s e a s e:C l i n i c a la s s o c i a t i o n s,p a t h o p h y s i-o l o g i c a lm e c h a n i s m sa n d p h a r m a c o l o g i c a li m p l i c a t i o n sJ.G u t,2 0 2 0,6 9(9):1 6 9 1-1 7 0 5.1 1 C o l a kY,H a s a nB,E r k a l m aB,e t a l.P a t h o g e n e t i cm e c h-a n i s m so fn o n a l c o h o l i cf a t t yl i v e rd i s e a s ea n di n h i b i t i o no f t h ei n f l a mm a s o m ea san e wt h e r a p e u t i ct a r g e tJ.C l i nR e sH e p a t o lG a s t r o e n t e r o l,2 0 2 1,4 5(4):1 0 1 7 1 0.1 2 Z h o uJ,B a iL,Z h a n gX J,e t a l.N o n a l c o h o l i c f a t t y l i v e rd i s-e a s e a n d c a r d i a c r e m o d e l i n g r i s k:P a t h o p h y s i o l o g i c a lm e c h a n i s m sa n dc l i n i c a li m p l i c a t i o n sJ.H e p a t o l o g y,2 0 2 1,7 4(5):2 8 3 9-2 8 4 7.1 3 陈 妍,缪 娟,高 宏.欧芹根对非酒精性脂肪肝大鼠的有效成分 及机 制 研 究 J.陕 西