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1、 AKT/PKB信号通路蛋白质磷酸化检测抗体芯片（PAB216） · · · · · 产品介绍 Ser/Thr蛋白激酶AKT（v-Akt Murine Thymoma Viral Oncogene）又名PKB (Protein Kinase-B)，在细胞因子、生长因子、荷尔蒙及分裂素等胞外信号分子与RTKs（Receptor Tyrosine Kinase）结合引起的下游信号转导过程中起着核心作用。AKT/PKB信号通路激活主要引起抗凋亡和促细胞增殖效应，进而在转录因子调节、蛋白合成、细胞周期、凋亡与代谢中发挥关键作用。AKT/PKB信号通路与NF-кB、ERK、JNK、
2、Apoptosis等信号通路密切相关，在2型糖尿病、肿瘤等疾病的病理发展中的作用日益明确。 AKT/PKB通路蛋白质磷酸化检测抗体芯片（PAB216） ，采用三维高分子膜专利技术，在片基上共价结合216种高特异抗体，并运用特有的荧光标记技术进行样本标记，以实现对AKT/PKB经典信号通路的高覆盖检测。芯片提供信号蛋白多个关键磷酸化位点的同步检测，针对每一个特定蛋白磷酸化位点，设置一对抗体分别检测其磷酸化（Phospho）和非磷酸化（non-Phospho）状态。同时，芯片可检测多种已有文献报道的非AKT/PKB经典通路的信号蛋白，极大扩展AKT/PKB单一信号通路研究的延伸性。 检测特点
3、 1. 芯片规格为76 x 25 x 1 mm； 2. 实现单一信号通路全面筛选； 3. 每种抗体设置6次技术重复； 4. 适用于组织、细胞等多类型样本； 5. 5×106细胞、200 µg总蛋白量即可满足实验； 6. 每个检测位点设有磷酸化和非磷酸化配对抗体； 7. 可通用于人、小鼠、大鼠等多类型模式生物检测。 检测原理： 检测列表： · 14-3-3 theta/tau (Ser232) · 14-3-3 ζ (Ser58) · 14-3-3 ζ/δ (Thr232) · PFKFB2 (Ser483) · AKT (Ser473) ·
4、AKT (Thr308) · AKT (Tyr326) · AKT1 (Ser124) · AKT1 (Ser246) · AKT1 (Thr450) · AKT1 (Thr72) · AKT1 (Tyr474) · AKT1S1 (Thr246) · AKT2 (Ser474) · BAD (Ser112) · BAD (Ser134) · BAD (Ser136) · BAD (Ser155) · BAD (Ser91/128) · BCL-2 (Ser70) · BCL-2 (Ser87) · BCL-2 (Thr56)
5、 · BCL-2 (Thr69) · BIM (Ser69/65) · Cyclin D1 (Thr286) · eNOS (Ser1177) · eNOS (Ser615) · eNOS (Thr495) · FAK (Ser910) · FAK (Tyr397) · FAK (Tyr407) · FAK (Tyr576) · FAK (Tyr861) · FAK (Tyr925) · FKHR (Ser256) · FKHR (Ser319) · FOXO1/3/4-PAN (Thr24/32) · FOXO1A (Ser329)
6、 · FOXO1A/3A (Ser322/325) · Gab1 (Tyr627) · Gab1 (Tyr659) · Gab2 (Tyr643) · GABA-RB (Ser434) · GSK3a-b (Tyr216/279) · GSK3α (Ser21) · GSK3β (Ser9) · IKK α (Thr23) · IKKa/b (Ser180/181) · IRS-1 (Ser1101) · IRS-1 (Ser307) · IRS-1 (Ser312) · IRS-1 (Ser323) · IRS-1 (Ser612)
7、 · IRS-1 (Ser636) · IRS-1 (Ser639) · IRS-1 (Ser794) · JAK1 (Tyr1022) · LYN (Tyr507) · MDM2 (Ser166) · mTOR (Ser2448) · mTOR (Ser2481) · mTOR (Thr2446) · p21Cip1 (Thr145) · p27Kip1 (Ser10) · p27Kip1 (Thr187) · p53 (Ser15) · p53 (Ser20) · p53 (Ser315) · p53 (Ser33) ·
8、p53 (Ser366) · p53 (Ser37) · p53 (Ser378) · p53 (Ser392) · p53 (Ser46) · p53 (Ser6) · p53 (Ser9) · p53 (Thr18) · p53 (Thr81) · p70S6K (Ser371) · p70S6K (Ser411) · p70S6K (Ser418) · p70S6K (Ser424) · p70S6K (Thr229) · p70S6K (Thr389) · p70S6K (Thr421) · p70S6K-β (Ser42
9、3) · Paxillin (Tyr118) · Paxillin (Tyr31) · PDK1 (Ser241) · PI3Kα (Tyr607) · PI3K α/γ (Tyr467/Tyr199) · PIP5K (Ser307) · PP2A-a (Tyr307) · PTEN (Ser370) · PTEN (Ser380) · PTEN (Ser380/Thr382/Thr383) · RapGEF1 (Tyr504) · RPS6(Ser235) · SYK (Tyr323) · SYK (Tyr348) · SYK (
10、Tyr525) · SYN1-Synapsin1 (Ser62) · Tuberin/TSC2 (Ser939) · Tuberin/TSC2 (Thr1462) · WEE1 (Ser642) · XIAP (Ser87) 相关文献： 1. Jia D, et al.Amplification of MPZL1/PZR promotes tumor cell migration through Src-mediated phosphorylation of cortactin in hepatocellular carcinoma.Cell Res, 2014,
11、 (24):204-217. (上海仁济医院) 2. Ding Y, et al. Seed-targeting anti-miR-21 inhibiting malignant progression of retinoblastoma and analysis of their phosphorylation signaling pathways.Exp Eye Res,2014. (暨南大学) 3. Dong S, et al. The REGγ Proteasome Regulates Hepatic Lipid Metabolism through Inhibition of
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20、on-related patterns of phosphorylation and sensitivity to tyrosine kinase inhibitors. Leukemia. 2012; 26(7):1547-54. 17. Bernier M et al. Negative regulation of STAT3 protein-mediated cellular respiration by SIRT1 protein.J Biol Chem. 2011; 286(22): 19270-19279. 18. Yu Y et al. Cellular Iron Dep
21、letion Stimulates the JNK and p38 MAPK Signaling Transduction Pathways, Dissociation of ASK1-Thioredoxin, and Activation of ASK1. J Biol Chem, 2011; 286: 15413-15427. 19. Hu Y, Pioli P D, Siegel E, et al. EFEMP1 suppresses malignant glioma growth and exerts its action within the tumor extracellula
22、r compartment. Mol Cancer, 2011, 10: 123. 20. Li Hui et al. Increased prevalence of regulatory T cells in the lung cancer microenvironment: a role of thymic stromal lymphopoietin. Cancer Immunology Immunotherapy. 2011; 60(11): 1587-1596. （天津医科大学） 21. Izzotti A et al. Proteome Alterations in Prim
23、ary Open Angle Glaucoma Aqueous Humor. J Proteome Res. 2010; 9 (9): 4831-4838. 22. Kang S et al. p90 ribosomal S6 kinase 2 promotes invasion and metastasis of human head and neck squamous cell carcinoma. J Clin Invest PI3K/Akt/mTOR信号通路 关键词： 信号通路 抑制剂 细胞 2012-07-17 00:00 来源：
24、互联网 点击次数：3767 目的：通过特异性阻断PI3K和mTOR，观察HepG2和Hep3B细胞株PI3K/Akt/mTOR信号通路活性及生物学行为的改变，探讨相关的分子机制。 方法：在培养的HepG2、Hep3B人肝癌细胞株和人正常肝细胞株QSG-7701上，以免疫印迹方法（Western blot）检测各细胞株中PI3K（p110α亚单位）、PTEN、pAkt（S473，T308）和p-mTOR（S2448）的表达情况；分别用 PI3K抑制剂LY294002（50μmol/ml）和mTOR抑制剂Rapamycin（RAPA，50 nmol/ml）孵育HepG2和Hep3B
25、细胞，以MTT比色法检测细胞的增殖能力，以流式细胞术（Flow cytometry）检测细胞周期和凋亡情况，以Western blot法检测细胞中pAkt（S473，T308）和p-mTOR（S2448）的表达改变。 结果：PTEN在HepG2和Hep3B细胞中基本无表达，在QSG-7701细胞株中高表达，pAkt和p-mTOR在HepG2和Hep3B细胞中的 表达较QSG-7701细胞均显著升高；LY294002和RAPA均呈剂量-时间依赖的抑制HepG2和Hep3B细胞生长。饱和效应浓度的 LY294002和RAPA作用24小时后，HepG2和Hep3B细胞均呈现明显的G0/G1期
26、阻滞，处于S期的细胞比例较对照组显著减少 （P<0.01）；两给药组中HepG2细胞和Hep3B细胞的凋亡率与对照组比较均显著增加（P<0.01）；两给药组HepG2细胞的凋 亡率显著高于Hep3B细胞（P<0.01或P<0.05），并且HepG2细胞的凋亡率在RAPA给药组显著高于LY294002给药组 （P<0.01），但Hep3B细胞的凋亡率在两组间无显著差异。饱和效应浓度的LY294002作用48小时后，HepG2和Hep3B细胞中 pAkt（T308，S473）和p-mTOR（S2448）的表达水平较对照组均显著降低（P<0.01），饱和效应浓度的RAPA作用48小时 后，HepG2
27、和Hep3B细胞中P-mTOR（S2448）的表达水平较对照组均显著降低（P<0.01），而pAkt（T308，S473）的 表达水平较对照组均显著升高（分别P<0.01）。 结论：（1）HepG2和Hep3B细胞存在PI3K/Akt/mTOR信号通路的组成性激活；（2）LY294002和RAPA能有效阻断HepG2和 Hep3B细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路，抑制HCC细胞的生长增殖，诱导细胞周期阻滞，促进细胞凋亡，且阻断效应与HCC细胞P53的表达有 关；（3）一定浓度范围内，HepG2细胞对PI3K/Akt/mTOR信号通路阻断剂的敏感性高于Hep3B细胞，RAPA对PI
28、3K/Akt /mTOR信号通路的部分阻断效应优于LY294002。 目的：观察阿霉素（Doxorubicin，DOX）单用或与RAPA联合用药对HepG2和Hep3B细胞生物学行为及PI3K/Akt/mTOR信号通路活性的影响，探讨mTOR抑制剂增强HCC化疗药物疗效的相关作用机制。 方法：分别取对数生长期的HepG2和Hep3B细胞，以不同浓度的DOX单用或与RAPA（20 nmol/ml）联合应用培养48h或24h，以MTT法测定药物对HepG2和Hep3B细胞的增殖抑制作用，以流式细胞技术检测二者的凋亡情况，以 Western blot法检测者P-p70S6K（T389
29、P-4E-BP1（S65）和pS6（S235/236）的表达改变。 结果：0.156～2.5 mg/L浓度范围内，DOX能抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖，且呈浓度依赖性；DOX在0.625～10mg/L浓度范围内，Hep3B细胞的相 对存活率显著大于HepG2细胞（P<0.01）；与DOX单用比较，DOX（0.156～2.5mg/L）与RAPA联用显著降低了HepG2和 Hep3B细胞的存活率（P<0.01或P<0.05），DOX（0.156～10mg/L）与RAPA联用，Hep3B细胞存活率显著大于 HepG2细胞（P<0.01）。DOX（0.156～10mg/L）单用或与
30、RAPA联用24h均可诱导HepG2和Hep3B细胞凋亡发生，且 随DOX浓度增加，凋亡牢升高；与DOX单用比较，DOX（1.25～10mg/L）与RAPA联用，HepG2细胞捌亡率较显著升高 （P<0.01或P<0.05），DOX（2.5～10 mg/L）与RAPA联用，Hep3B细胞凋亡率显著升高（分别P<0.05）；DOX（5.0～10mg/L）单用，HepG2细胞凋亡率显著大 于Hep3B细胞（分别P<0.05），DOX（2.5～10 mg/L）与RAPA联用，HepG2细胞凋亡率显著大于Hep3B细胞（分别P<0.01）。RAPA（20nmol/L）、DOX（2.5mg /L）以及二
31、者联用均可导致HepG2或Hep3B细胞P-p70S6K（T389）、P-4E-BP1（S65）和pS6（S235/236）表达减 少，且以DOX与RAPA联用效应最为明显。 结论：（1）DOX可抑制HepG2和Hep3B细胞生长增殖，促进细胞凋亡，下调PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化程度；（2）DOX与 RAPA联合用药能显著抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖，促进细胞凋亡，下调PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化程度，并在一定浓度范围内表 现出协同效应；（3）在一定浓度范围内，HepG2细胞对DOX单用或与RAPA联合用药的敏感性显著高于Hep3B细胞，可能与HCC细
32、胞p53的表达 差异有关。 目的：分析人HCC组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化水平与p53的表达及HCC临床病理参数之间的关系，评估PI3K/Akt/mTOR信号通路在HCC诊断和预后评价中的作用。 方法：76例HCC组织样本经临床病理分期分级后，以免疫组织化学方法检测HCC组织和癌旁组织中p53、pAkt、PTEN、p-mTOR和pS6的表达情况，分析上述指标在不同HCC病理特征条件下的阳性表达率，并与正常肝组织比较。 结果：p53、pAkt、PTEN、p-mTOR和pS6在人HCC组织有不同程度的表达，HCC组织p53（60.5％，46/76）、 pA
33、kt（92.1％，70/76）、p-mTOR（84.2％，64/76）和pS6（88.2％，67/76）的阳性表达比例较癌旁肝组织（分别为 10.5％，8/76、63.2％，48/76、46.1％，35/76、52.6％，40/76）和正常肝组织（分别为0％、55.0％，11/20、 50.0％，10/20、45.0％，9/20）显著升高（P<0.01），而PTEN（65.8％，50/76）的阳性表达比例较癌旁肝组织 （89.5％，68/76）和正常肝组织（85.0％，17/20）显著减少（P<0.05）；p53阳性表达HCC组织pAkt、p-mTOR和 pS6的阳性表达率较p53阴性表达组织
34、显著升高（P<0.01），而PTEN的阳性表达率较p53阴性表达组织显著降低（P＜0.01）。低分 化、存在血管侵袭、TNM分期高的HCC组织p53、pAkt、p-mTOR和pS6的阳性表达率较相对应的分化较好、无血管侵袭、TNM分期低的HCC 组织显著升高（分别P<0.01或P<0.05）；而PTEN的阳性表达率显著降低（分别P<0.01或P<0.05）。 结论：（1）人HCC组织存在PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活；（2）人HCC组织PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化程度与p53的表 达可能有相关性；（3）人HCC组织PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化程度与HCC的临床病理特征有关，活化程度越高的HCC其分化程度越低、血管侵袭多发、TNM分期高。
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