高效液相色谱分离苯、二甲苯.doc

高效液相色谱法分离苯、甲苯
实验目的：
1. 了解高效液相色谱仪器的组成部分。
2. 掌握高效液相色谱仪器的使用方法及软件操作方法。
3. 掌握分离样品的流动相的配置方法。
实验仪器介绍：
高效液相色谱仪的组成如下图：

A 色谱泵：本实验室色谱泵型号：Waters 1525 Binary HPLC Pump
其组成部分如下图：

B 进样器：本实验室进样器型号：Waters 2707 Autosampler
其组成部分如下图：

侧面图如下：

自动进样器有三种进样模式：
充满定量环：具有最高的进样体积精度
不充满定量环针头溢出：具有最大的灵活性
不充满定量环：具有零样品的损失

使用过程：

C 检测器型号：Atltech ELSD 2000 ES
其组成部分如下图：

蒸发光散射检测器的原理：首先将柱洗脱雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射监测池中得到监测。
1. LCD（液晶显示）：在仪器使用中液晶显示的主窗口为操作窗口。操作窗口列出了仪器的状态和参数，如方法的名称，漂移管温度，气体流量，撞击器位置，增益，信号输出，满量程输出设置，和操作错误总数（如发生）。液晶屏也显示所有相关的子窗口：方法窗口，参数设置窗口，和诊断窗口。
2. 数字键盘：触摸键盘提供 09 数字，“*”，和“ Enter ”键调整仪器参数。
3. 窗口键：前面板上有四个圆形触摸窗口键。每个窗口键的功能是基于屏幕。如果该键在当前窗口中是可执行的，当前的功能会显示在该键上方的窗口屏幕上。

液相色谱法分离苯与甲苯
原理：试样中苯、甲苯用甲醇溶解，以甲醇+水为流动相，使用C18柱为填充的不锈钢柱和紫外检测器，对试样中的苯、甲苯进行高效液相色谱分离和外标法定量。
试剂和溶液
苯、甲苯（色谱纯）
甲醇（色谱纯）
水（新蒸二次蒸馏水）
仪器
高效液相色谱仪：具有可变波长紫外检测器
色谱柱：250 mm * 4.6 mm（id），不锈钢柱，内装 C18 填料，粒径 5 μm
超声波清洗器
微孔过滤器：滤膜孔径为0.45 μm
分析步骤
高效液相色谱操作条件
流动相：甲醇+水=70+30（ V / V ），使用前经 0.45 μm 滤膜并超声脱气。
柱温：室温。
流速：1.0 ml/min
检测波长：254 nm
进样量：10 μL
标准溶液配制
称取色谱纯苯、甲苯各0.05g（精确至0.0001 g）于 50 ml 容量瓶中，此溶液质量浓度C（苯、甲苯）为1.00 mg/ml，用甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀备用。
标准曲线的制备
分别吸取苯、甲苯标准溶液0.5、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00 ml，置于50 ml 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配置成分别含苯、甲苯10.00 μg/ml、20.00 μg/ml、30.00 μg/ml、40.00μg/ml、50.00μg/ml、60.00μg/ml的标准溶液，用0.45μm 滤膜过滤，滤液待用。
在上述色谱条件下，待仪器基线稳定后注入标准系列溶液，记录色谱峰面积，以苯、甲苯的质量浓度（μg/ml）为横坐标，相应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
试验的测定
在与测定标准系列溶液相同的条件下注入待测溶液，根据色谱峰的保留时间定性，记录色谱峰面积，并从标准曲线查的苯、甲苯的浓度。
结果的表示
苯、甲苯质量分数X（%）按下式计算：
X=（C*V*10-6/m）*100
m ----试样的质量，g
v------ 试样定容体积，ml
C------由标准曲线查出的试样溶液中苯、甲苯的浓度，μg/ml